A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تم تشريح أجنة دبور ناسونيا من الشرانق Lucillia sericata بعد التطفل لمدة 12-24 ساعة وغسلها بالكحول ومحلول هيبوكلوريت الصوديوم 10٪ للحصول على أجنة خالية من الجراثيم. بعد تربية الأجنة الخالية من الجراثيم وتزويدها بوسط تربية Nasonia للنمو والتطور في المختبر ، تم الحصول على Nasonia البالغين الخالية من الجراثيم.

Abstract

تكنولوجيا التربية المعقمة هي طريقة لاستزراع الحشرات في ظل ظروف معقمة أو شبه معقمة ، والتي يمكن أن تقضي بشكل فعال على تأثير الكائنات الحية الدقيقة الخارجية على ميكروبات الحشرات وبالتالي تعزيز التطور السريع لأبحاث ميكروبات الحشرات. Nasonia (جنس الدبور) هي حشرة دبور طفيلية لها العديد من المزايا ، مثل العمر القصير ، والتباين الجيني العالي ، وسهولة التشغيل ، وما إلى ذلك ، وتستخدم على نطاق واسع كنظام نموذج للحشرات. على عكس العلاج بالمضادات الحيوية ، الذي يمكن أن يقلل فقط من عدد الكائنات الحية الدقيقة في الحيوانات ، يمكن لتقنيات التربية المعقمة التحكم في تكوين وكمية الكائنات الحية الدقيقة في الحيوانات ، مما يسهل دراسة تفاعلات المضيف والميكروب. ومع ذلك ، فإن الإصدارات السابقة من وسط تربية Nasonia (NRM) بها بعض العيوب والمشاكل ، مثل عملية التحضير المعقدة والمستهلكة للوقت ، والتلوث السهل بالبكتيريا أو الفطريات ، ووقت التخزين القصير. لذلك ، تحل هذه الدراسة هذه المشكلات من خلال تحسين الأدوات المستخدمة في عملية إعداد NRM وظروف التخزين ونسب المكونات. يمكن أن يسمح الوسط الأمثل بالتخزين عند -20 درجة مئوية لمدة 3 أشهر على الأقل والقضاء على إمكانية تلوث NRM أثناء تغذية الدبابير المعقمة. هذا يحسن معدل البقاء على قيد الحياة والمستوى الصحي ل Nasonia المعقم ، وهو أمر مهم لاستخدام Nasonia كنموذج للبحوث الميكروبية.

Introduction

الحيوانات الخالية من الجراثيم هي لا تحتوي على كائنات حية حية وطفيليات يمكن اكتشافها1. يمكن الحصول على أجنة خالية من الجراثيم عن طريق تشريح الأم في ظل ظروف معقمة ثم تربيتها لاحقا في أنظمة الحاجز2. يمكن استخدام هذه الحيوانات لدراسة آثار الكائنات الحية الدقيقة على الحيوانات ، مثل الجراثيم المعوية ، والجهاز المناعي ، والتمثيل الغذائي1. مع بعض الوسائل التقنية ، يمكن جعل العديد من الحشرات وحتى الثدييات معقمة 3,4. تلعب الحيوانات الخالية من الجراثيم دورا فريدا وقد استخدمت على نطاق واسع في جوانب مختلفة من أبحاث علم الأحياء الد....

Protocol

1. تحضيروسط تربيةناسونيا الخالي من الجراثيم 

  1. ضع الشرانق L. sericata المتاحة تجاريا (انظر جدول المواد) على سطح يمكن أن يستوعب جميع الشرانق ، مثل صينية أو ورقة. تخلص من أي يرقات متخلفة أو شرانق قديمة داكنة أو أصداف عذراء فارغة أو نشارة خشب أو شوائب أخرى. احتفظ فقط بالشرانق الصغيرة ذات اللون البني والأحمر وانقلها إلى دورق (حوالي 3000-4000 خادرة).
    ملاحظة: بعد إجراء العديد من التجارب ، وجد أن الوسط المصنوع من الشرانق القديمة المظلمة تحول بسهولة إلى اللون الداكن وأوقف تطور الدبابير الخالية من الجراثيم. لم تحدث هذه الظاهرة عند استخدام الشرانق الصغيرة ذات اللون البني والأحمر لإنتاج وسط. لا يزال ....

النتائج

تم تحسين كفاءة إعداد NRM بشكل كبير من خلال تحسين أدوات التحضير. بالإضافة إلى ذلك ، تم القضاء على مشكلة تلوث NRM في عملية التغذية من خلال تحسين الاستراتيجية وطريقة الحفظ. في الوقت نفسه ، كان لدى NRM المعدل نسبة غذائية أكثر ملاءمة لنمو وتطور الدبابير الخالية من الجراثيم مع L. sericata كمضيفين. تحس.......

Discussion

مع تطبيق تقنيات الكشف عالية الإنتاجية مثل علم الجينوم والأيض ، أدرك الباحثون تدريجيا أن هناك تنوعا وراثيا هائلا وتعقيدا أيضيا في ميكروبيوتا الأمعاء16. ترتبط هذه البكتيريا التكافلية ارتباطا وثيقا بحالات فسيولوجية أو مرضية مختلفة ، مثل التمثيل الغذائي الغذائي للمضيف ، والأور?.......

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

التمويل: تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم في الصين (32270538) ، والبرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2022YFF0710603) ، ومؤسسة العلوم الطبيعية في بكين (6222046) ، والتمويل الاستراتيجي CAS عبر مخطط تمويل CAS-CSIRO (152111KYSB20210011) الممنوح ل G.H.W. مساهمات المؤلف: طور جميع المؤلفين نطاق المراجعة وتركيزها وساهموا في كتابة المخطوطة.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22 Sterile vacuum filterNEST331011
10% SodiumHypochloriteLIRCONXB-84BS-1
1x PBS solutionSolarbioP1020
200 mesh nylon netBIOBYINGBY-378Z
24 well-plateNEST702001
8, 1.2, 0.8, and 0.45 µm filtersShanghai Xingya Purification Material FactoryHN-AA-JT-10079
Absolute ethyl alcoholMacklinE809057-500ml
Cell StrainerBIOLOGIX15-1100
Commercial Drosophila MediumBoerB645446-500ml
Dissecting needleBioroyee17-9140
Garlic pressTaobaoNo Catalog numbersPurchase on Taobao
Lucillia sericata pupaeHefei Dayuan Biotechnology Co., Ltd.No Catalog numbersPurchase on Taobao
Small writing brushCestidurBL0508
StereoscopeSOPTOPRX50
TweezersSALMARTA109001-56

References

  1. Diviccaro, S., et al. Exploring the impact of the microbiome on neuroactive steroid levels in germ-free animals. International Journal of Molecular Sciences. 22 (22), 12551 (2021).
  2. Pang, X., et al.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

197

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved