Otimizando o procedimento de criação de vespas livres de germes

Resumo

Embriões de vespas Nasonia foram dissecados de pupas de Lucillia sericata após parasitização por 12-24 h e lavados com álcool e solução de hipoclorito de sódio a 10% para obtenção de embriões livres de germes. Após a criação dos embriões livres de germes e fornecimento de meio de criação de Nasonia para crescimento e desenvolvimento in vitro, adultos de Nasonia livres de germes foram obtidos.

Resumo

A tecnologia de criação asséptica é um método de cultivo de insetos em condições estéreis ou quase estéreis, que pode efetivamente eliminar a influência de microrganismos externos na microbiota de insetos e, assim, promover o rápido desenvolvimento da pesquisa da microbiota de insetos. Nasonia (gênero vespa) é um inseto vespa parasita que tem muitas vantagens, como uma vida curta, alta variação genética, fácil operação, etc., e é amplamente utilizado como um sistema modelo de insetos. Ao contrário do tratamento com antibióticos, que só pode reduzir o número de microrganismos em animais, as técnicas de criação asséptica podem controlar tanto a composição quanto a quantidade de microrganismos em animais, facilitando ainda mais o estudo das interações hospedeiro-micróbio. No entanto, as versões anteriores do meio de criação Nasonia (NRM) têm alguns defeitos e problemas, como um processo de preparação complexo e demorado, fácil contaminação por bactérias ou fungos e curto tempo de armazenamento. Portanto, este estudo resolve esses problemas otimizando as ferramentas usadas no processo de preparação da NRM, as condições de armazenamento e as proporções de componentes. O meio otimizado pode permitir o armazenamento a -20 °C por pelo menos 3 meses e eliminar a possibilidade de contaminação por NRM durante a alimentação de vespas estéreis. Isso melhora ainda mais a taxa de sobrevivência e o nível de saúde da nasonia asséptica, que é importante para o uso de Nasonia como um modelo para a pesquisa microbiana.

Introdução

Animais livres de germes são animais que não apresentam microrganismos vivos e parasitas detectáveis¹. Embriões livres de germes podem ser obtidos dissecando a mãe em condições assépticas e posteriormente criados em sistemas de barreira². Esses animais podem ser utilizados para estudar os efeitos de microrganismos em animais, como na microbiota intestinal, no sistema imunológico e no metabolismo¹. Com certos meios técnicos, muitos insetos e até mamíferos podem se tornar estéreis ^3,4. Animais livres de germes têm um pa....

Protocolo

1. Preparação de meio de criação de Nasonia livre de germes 

1. Coloque as pupas de L. sericata disponíveis comercialmente (ver Tabela de Materiais) em uma superfície que possa acomodar todas as pupas, como uma bandeja ou uma folha de papel. Descarte quaisquer larvas subdesenvolvidas, pupas velhas escuras, conchas de pupas vazias, serragem ou outras impurezas. Mantenha apenas pupas jovens de cor vermelho-acastanhada e transfira-as para um copo (aproximadamente 3.000-4.000 pupas).
   NOTA: Depois de realizar muitos experimentos, descobriu-se que o meio feito a partir das pupas velhas escuras fa....

Discussão

Com a aplicação de tecnologias de detecção de alto rendimento, como genômica e metabolômica, os pesquisadores gradualmente perceberam que há uma enorme diversidade genética e complexidade metabólica na microbiota intestinal¹⁶. Essas bactérias simbióticas estão intimamente relacionadas a vários estados fisiológicos ou patológicos, como metabolismo nutricional do hospedeiro, tumores, imunidade e envelhecimento por meio de interações complexas com o hospedeiro¹⁷

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 Sterile vacuum filter	NEST	331011
10% SodiumHypochlorite	LIRCON	XB-84BS-1
1x PBS solution	Solarbio	P1020
200 mesh nylon net	BIOBYING	BY-378Z
24 well-plate	NEST	702001
8, 1.2, 0.8, and 0.45 µm filters	Shanghai Xingya Purification Material Factory	HN-AA-JT-10079
Absolute ethyl alcohol	Macklin	E809057-500ml
Cell Strainer	BIOLOGIX	15-1100
Commercial Drosophila Medium	Boer	B645446-500ml
Dissecting needle	Bioroyee	17-9140
Garlic press	Taobao	No Catalog numbers	Purchase on Taobao
Lucillia sericata pupae	Hefei Dayuan Biotechnology Co., Ltd.	No Catalog numbers	Purchase on Taobao
Small writing brush	Cestidur	BL0508
Stereoscope	SOPTOP	RX50
Tweezers	SALMART	A109001-56