قياس استهلاك O2 في ذبابة الفاكهة الميلانية باستخدام قياس التنفس المجهري بقياس الكولوم

Summary

قياس التنفس بقياس الكولوم مثالي لقياس معدل الأيض للكائنات الحية الدقيقة. عند تكييفه مع ذبابة الفاكهة الميلانية في الدراسة الحالية ، كان استهلاك O₂ المقاس ضمن النطاق الذي تم الإبلاغ عنه للنوع البري D. melanogaster من خلال الدراسات السابقة. كان استهلاك O₂ لكل ذبابة بواسطة طفرات CASK ، وهي أصغر حجما وأقل نشاطا ، أقل بكثير من النوع البري.

Abstract

قياس التنفس الدقيق للكولوم هو طريقة مباشرة وغير مكلفة لقياس استهلاك O₂ للكائنات الحية الصغيرة مع الحفاظ على بيئة مستقرة. يتكون مقياس التنفس المجهري الكولوم من غرفة محكمة الإغلاق يتم فيها استهلاك O 2 ويتم إزالة CO₂ الذي ينتجه الكائن الحي بواسطة وسيط ماص. يؤدي انخفاض الضغط الناتج إلى إنتاج O 2 كهربائيا ، ويتم قياس كمية O₂ المنتجة عن طريق تسجيل كمية الشحنة المستخدمة لتوليدها. في هذه الدراسة ، تم تكييف الطريقة مع ذبابة الفاكهة الميلانية التي تم اختبارها في مجموعات صغيرة ، مع حساسية الجهاز والظروف البيئية المحسنة لتحقيق ثبات عالي. تتوافق كمية O₂ التي يستهلكها الذباب البري في هذا الجهاز مع تلك التي تم قياسها بواسطة الدراسات السابقة. لم يكن استهلاك O₂ الخاص بالكتلة بواسطة طفرات CASK ، وهي أصغر ومعروفة بأنها أقل نشاطا ، مختلفا عن الضوابط المتجانسة. ومع ذلك ، أدى صغر حجم طفرات CASK إلى انخفاض كبير في استهلاك O₂ على أساس كل ذبابة. لذلك ، فإن مقياس التنفس الدقيق قادر على قياس استهلاك O₂ في D. melanogaster ، ويمكنه التمييز بين الاختلافات المتواضعة بين الأنماط الجينية ، ويضيف أداة متعددة الاستخدامات لقياس معدلات الأيض.

Introduction

القدرة على قياس معدل الأيض أمر بالغ الأهمية لفهم كامل للكائن الحي في سياقه البيئي. على سبيل المثال ، من الضروري قياس معدل الأيض من أجل فهم دوره في العمر¹ ، أو دور النظام الغذائي في التمثيل الغذائي² ، أو عتبة الإجهاد نقص الأكسجين³.

هناك طريقتان عامتان لقياس معدل الأيض⁴. يقيس القياس الحراري المباشر إنفاق الطاقة مباشرة عن طريق قياس إنتاج الحرارة. يقيس القياس الحراري غير المباشر إنتاج الطاقة من خلال وسائل أخرى ، غالبا عن طريق القياس التنفسي لاستهلاك O₂ (V_O2) أو إنتاج CO₂ أو كليهما. على الرغم من تطبيق القياس الحراري المباشر على الحرارة الخارجية الصغيرة ، بما في ذلك ذبابة الفاكهة الميلانوجاستر⁵ ، إلا أن قياس التنفس أبسط تقنيا وأكثر استخداما.

تم استخدام عدة أشكال من قياس التنفس بنجاح لقياس معدل الأيض في النوع البري والمتحولة D. melanogaster وقدمت نظرة ثاقبة للتأثيرات الأيضية لدرجة الحرارة⁶ ، والبيئة الاجتماعية 3 ، والنظام الغذائي³،^{7 ،} واضطرابات النمو العصبي⁸. تنقسم هذه إلى فئتين ، والتي تختلف اختلافا كبيرا في التكلفة والتعقيد. قياس الضغط هو أبسط وأقل تكلفة ^9,10 ، حيث يتم وضع الذباب في غرفة مغلقة تحتوي على مادة ماصة CO₂ والتي ترتبط عبر شعرية رقيقة بخزان السوائل. عندما يتم استهلاك O₂ وامتصاص CO₂ ، ينخفض الضغط في الغرفة ويتم سحب السائل إلى الشعيرات الدموية. ومن ثم، فإن حجم الشعيرات الدموية المملوء بالسائل يتناسب مع V_O2. كما تم استخدام إصدارات أكثر تفصيلا ، والتي تعوض عن القوة التي يمارسها السائل في الشعيرات الدموية ، على D. melanogaster¹. يتميز قياس الضغط بكونه بسيطا وغير مكلف ، ولكن لأنه حساس للضغط ، يتطلب ظروفا بيئية ثابتة. علاوة على ذلك ، نظرا لعدم استبدال O₂ المستهلك ، فإن الضغط الجزئي ل O₂ (P_O2) ينخفض تدريجيا داخل الغرف.

كما يستخدم قياس التنفس باستخدام تحليل الغاز بانتظام ل D. melanogaster. في هذه الحالة ، يتم أخذ عينات من الغازات على فترات منتظمة من غرف محكمة الغلق تحتوي على الذباب وإرسالها إلى محلل الأشعة تحت الحمراء²،^6،11. يتميز هذا النوع من الأجهزة بمزايا أنه متاح تجاريا ، وهو أقل حساسية للظروف البيئية ، ويتم تحديث الغازات أثناء أخذ العينات بحيث يظل P_O2 مستقرا. ومع ذلك ، يمكن أن تكون المعدات باهظة الثمن ومعقدة للعمل.

يوفر مقياس التنفس المجهري¹² الكولومتري الذي تم تطويره مؤخرا بديلا غير مكلف وحساس ومستقر للأنظمة الحالية. في الممارسة العملية ، يتم وضع الكائن الحي في غرفة محكمة الإغلاق حيث يستهلك O₂ ويتم إزالة ثاني أكسيد الكربون الزفير₂ بواسطة مادة ماصة ، مما يؤدي إلى انخفاض صاف في ضغط الغرفة. عندما ينخفض الضغط الداخلي إلى عتبة محددة مسبقا (ON-bit) ، يتم تمرير التيار عبر مولد O₂ كهربائيا ، مما يعيد الضغط إلى عتبة ثانية (عتبة OFF) توقف التحليل الكهربائي. يتناسب نقل الشحنة عبر مولد O 2 طرديا مع كمية O 2 المطلوبة لإعادة ضغط الغرفة وبالتالي يمكن استخدامه لقياس O₂ الذي يستهلكه الكائن الحي⁴. الطريقة حساسة للغاية ، وتقيس V O2 بدقة ، ويمكن للاستبدال المنتظم ل O₂ الحفاظ على P_O2 عند مستوى ثابت تقريبا لساعات أو أيام.

يستخدم مقياس التنفس المجهري الكولوم المستخدم في هذه الدراسة مستشعرا إلكترونيا متعدد الوسائط (الضغط ودرجة الحرارة والرطوبة). يتم تشغيل المستشعر بواسطة متحكم دقيق يكتشف التغيرات الصغيرة في الضغط وينشط جيل O₂ عند الوصول إلى عتبة الضغط المنخفض¹². يتم تجميع هذا الجهاز من خارج أجزاء الرف ، ويمكن استخدامه مع مجموعة متنوعة من الغرف والبيئات التجريبية ، وقد تم استخدامه بنجاح لفحص تأثيرات كتلة الجسم ودرجة الحرارة على خنفساء Tenebrio molitor. في الدراسة الحالية ، تم تكييف مقياس التنفس الدقيق لقياس استهلاك O₂ في D. melanogaster ، الذي يحتوي على ما يقرب من 1 ٪ من كتلة T. molitor. تمت زيادة حساسية الجهاز عن طريق تقليل عتبة تنشيط جيل_{O 2} ، وتم تعزيز الاستقرار البيئي من خلال إجراء تجارب في حمام مائي يتم التحكم في درجة حرارته والحفاظ على الرطوبة داخل الغرف عند أو بالقرب من 100٪.

بروتين CASK (بروتين سيرين كيناز المعتمد على الكالمودولين) ، وهو جزء من عائلة كينازات غوانيلات المرتبطة بالغشاء (MAGUK) ، هو سقالة جزيئية في مجمعات متعددة البروتينات مختلفة ، وترتبط الطفرات في CASK باضطرابات النمو العصبي لدى البشر وفي D. melanogaster^13,14. متحولة D. melanogaster قابلة للحياة ، CASK^Δ18 ، تعطل نشاط الخلايا العصبية الدوبامينية 15 وتقلل من مستويات النشاط بأكثر من 50٪ مقارنة بالضوابط الخلقية^14,16. بسبب انخفاض مستويات نشاط طفرات CASK ودور الكاتيكولامينات في تنظيم عملية التمثيل الغذائي¹⁷ افترضنا أن معدل الأيض القياسي ، وبالتالي استهلاك O₂ ، سينخفض بشكل كبير مقارنة بالضوابط.

تم قياس استهلاك O₂ في CASK^Δ18 ومتجانساتها البرية ، w (ex33). تم وضع مجموعات من الذباب في غرف قياس التنفس ، وتم قياس استهلاك O 2 ، وتم حساب استهلاك O₂ والتعبير عنه على أساس الكتلة الخاصة ولكل ذبابة. سجل الجهاز V_O2 في الذباب البري الذي كان متسقا مع الدراسات السابقة ، ويمكن أن يفرق بين استهلاك O₂ لكل ذبابة من النوع البري والذباب الطافر CASK.

Protocol

1. تربية الذباب والجمع

1. الحفاظ على الذباب عند 25 درجة مئوية في قوارير ضيقة تحتوي على طعام ذبابة الفاكهة القياسية.
   ملاحظة: يجب أن يشتمل حجم العينة لكل نمط وراثي على تسع نسخ متماثلة على الأقل ، تتكون كل منها من غرفة قياس تنفس واحدة تحتوي على 15-25 ذبابة ، تم إعدادها على النحو المبين أدناه.
2. نقل الذباب كل 2-3 أيام.
3. تخدير الذباب باستخدام CO₂ ، وجمع مجموعات من 15-25 ذكرا من كل نمط وراثي ، ووضع كل مجموعة في قوارير طعام طازجة غير مخبوزة.
   ملاحظة: تم استخدام الذكور لتقليل التباين بسبب الحالة الإنجابية. تنطبق الطريقة على كلا الجنسين.
4. اسمح للذباب بالتعافي عند 25 درجة مئوية لمدة 24 ساعة على الأقل.
   ملاحظة: بحلول وقت التجربة ، يجب أن يكون عمر الذباب 1-4 أيام. يمكن ضبط وتيرة المجموعات الموضحة في الخطوة 1.3 لتضييق النطاق العمري للذباب.

2. إعداد وتجميع غرفة مقياس التنفس

1. قم بتشغيل الحمام المائي واضبطه على درجة الحرارة المطلوبة للتجربة.
   ملاحظة: أجريت التجارب أدناه عند 25 درجة مئوية باستخدام أنابيب شلينك سعة 50 مل كغرف. يجب تجميع المكونات كما هو موضح في الأشكال 1 أ و 1 ب و 1 ج.
2. نظف الوصلات الزجاجية الأرضية للغرف ومقابس المستشعر جيدا عن طريق رش 70٪ من الإيثانول على منديل المختبر (وليس مباشرة على المفصل) ومسح الغبار والشحوم القديمة من قابس المستشعر (الشكل 1 أ). امسح الإيثانول بمسح مختبر جديد.
3. ضع قطعة 1 سم من لفائف القطن المنقوعة في الماء النقي في قاع الحجرة لتثبيت الرطوبة.
   1. أضف كمية كافية من الماء (~ 0.5 مل) لتشكيل بركة صغيرة في الجزء السفلي من لفة القطن.
4. امسح أي ماء انسكب على مفصل الغرفة.
5. انقل الذباب إلى أنابيب البولي بروبلين الموسومة باستخدام قمع.
   1. قم بتوصيل الأنبوب بلفافة قطنية.
      ملاحظة: تتكون الأنابيب من أنبوب اختبار بولي بروبيلين سعة 5 مل ، مشذب إلى 5.5 سم في الطول ومثقوب بسكين ساخن للسماح بالتبادل الحر للهواء مع غرفة التجربة. من المعروف أن تخدير CO₂ يسبب تشوهات التمثيل الغذائي ، لذلك يتم نقل الذباب بدون تخدير مما يتطلب مزيدا من العناية لتجنب فقدان الذباب.
6. أضف أنبوبا واحدا جيد التهوية مع الذباب في كل حجرة لقياس التنفس (فوق القطن المبلل).
7. املأ خراطيش جير الصودا (4-5 كريات لكل أنبوب) وضعها في الجزء العلوي من الأنبوب الذي يحتوي على الذباب داخل الغرفة.
   ملاحظة: تتكون خراطيش الجير الصودا من أنابيب طرد مركزي سعة 800 ميكرولتر مثقبة 4-5 مرات باستخدام مثقاب كهربائي.
8. املأ مولدات O₂ بمحلول كبريتات النحاس المشبع (CuSO₄) تحت مستوى فتحات التهوية
   ملاحظة: تتكون مولدات O₂ من أنابيب طرد مركزي ذات غطاء لولبي مع 4 ثقوب محفورة أسفل الخيوط. يتم لحام أقطاب البلاتين (Pt) والنحاس (Cu) بموصل ثنائي السنون ، ويتم إدخالها في ثقوب محفورة في الغطاء ، ويتم لصقها بالإيبوكسي. يولد التحليل الكهربائي ل CuSO₄ O₂ الذي يستهلكه الكائن التجريبي. CuSO₄ سام لللافقاريات ، وتجنب الانسكابات أو التسرب ونظف على الفور.
9. قم بتوصيل مولد O₂ المملوء بموصل ثنائي السنون على قابس المستشعر.
   ملاحظة: يجب أن يتصل الكاثود النحاسي بالإخراج السالب لوحدة التحكم وأنود البلاتين بالسلك الموجب. ستؤدي الاتصالات المعكوسة إلى فشل التجربة.
10. ضع قطعتين صغيرتين من شحم السيليكون الشفاف على جوانب متقابلة من المفصل الزجاجي الأرضي لقابس المستشعر.
11. أدخل القابس في الحجرة وقم بتدوير القابس (أو الحجرة) بضغط معتدل لنشر الشحوم في المفصل.
    1. امسح الشحوم الزائدة بمسح المختبر.
12. قم بتثبيت مثبتات Keck البلاستيكية على المفاصل لتثبيت المقابس في الغرف. يجب أن تبدو الغرفة المجمعة مثل الشكل 1C.
13. كرر الخطوات المذكورة أعلاه لعدد الغرف المستخدمة لتجربة اليوم.
    ملاحظة: عدد الغرف التي يمكن تسجيلها محدود بعدد الغرف ووحدات التحكم ومدخلات USB المتوفرة على الكمبيوتر. بالنسبة للتجارب الحالية ، تم تشغيل سبع غرف بشكل متواز. يجب مطابقة الذباب التجريبي مثل الطفرات مع الضوابط المناسبة. يجب تضمين غرفة تم إنشاؤها بشكل مماثل ولكن بدون ذباب في كل تجربة كعنصر تحكم في التباين البيئي. يجب تدوير الغرف التي تحتوي على علاجات مختلفة (متحولة ، برية ، حظر طيران) بين التجارب.
14. ضع الغرف المجمعة في رف في حمام مائي مع فتح محبس (الشكل 1E).
    ملاحظة: لتجنب اختلاف الساعة البيولوجية ، تم وضع الغرف في الحمام بين الساعة 9:30 و 9:50 صباحا لجميع التجارب الموضحة هنا.
15. اترك محبس الإغلاق مفتوحا (حافظ على المقبض موازيا لمحبس المحابس).
    ملاحظة: احرص على عدم السماح للماء بدخول المحبس.
16. اسمح للغرف بالتوازن مع فتح محبس لمدة 30 دقيقة تقريبا.
    ملاحظة: أثناء توازن الحجرة ، قم بتوصيل الإلكترونيات وإعداد الحصول على البيانات كما هو موضح أدناه.

3. إعداد وحدات التحكم والكمبيوتر

1. تأكد من أن المفاتيح التي تزود مولدات O₂ بالتيار في وضع إيقاف التشغيل (بعيدا عن الموصل ؛ الشكل 1 د).
2. قم بتوصيل كل صندوق وحدة تحكم بمنفذ ناقل تسلسلي عالمي (USB) متوفر.
   ملاحظة: بناء وبرمجة وحدات التحكم الموصوفة في مكان آخر¹².
3. قم بتوصيل وحدات التحكم بغرف مقياس التنفس باستخدام كابلات ذات 6 موصلات.
4. تأكد من أن شاشات الصمام الثنائي العضوي الباعث للضوء (OLED) لوحدات التحكم (الشكل 1D) تعرض المعلمات البيئية.
5. قم بتشغيل مولدات O₂ لفترة وجيزة باستخدام المفتاح الموجود على وحدة التحكم (الشكل 1D).
   1. إذا زادت القيمة الحالية من صفر إلى ما بين 35 و 55 مللي أمبير ، فإن وحدة التحكم والغرفة جاهزتان للتجارب.
6. تحديد منافذ COM التي تستخدمها وحدات التحكم، كما هو موضح أدناه.,
   1. انقر فوق رمز ابدأ في Microsoft Windows.
   2. انقر فوق رمز الإعدادات .
   3. انقر فوق البلوتوث والأجهزة.
   4. تأكد من ظهور وحدات التحكم ومنافذ COM الخاصة بها في قائمة الأجهزة.
7. افتح PuTTY على سطح المكتب وقم بإعداد ملف سجل لكل قناة من مقياس التنفس كما هو موضح أدناه.
   ملاحظة: PuTTY هو عميل shell و telnet آمن مجاني يستخدم لنقل البيانات إلى الكمبيوتر عبر منافذ COM.
   1. حدد منفذ COM لوحدة تحكم عن طريق كتابة رقم المنفذ في مربع "الخط التسلسلي" (الشكل 2A).
   2. انقر فوق تسجيل.
   3. حدد الإخراج القابل للطباعة في "تسجيل الجلسة" (الشكل 2 ب).
   4. ضمن اسم ملف السجل، انقر فوق استعراض.
   5. في المجلد الذي تختاره ، قم بإنشاء اسم ملف يحتوي على معلومات وصفية (على سبيل المثال ، التاريخ والأنواع ورقم منفذ COM).
   6. انقر على حفظ.
   7. انقر فوق فتح. سيتم فتح نافذة تعرض البيانات المحددة بفواصل التي يتم تسجيلها (الشكل 2C).
   8. كرر ذلك مع جميع وحدات التحكم الأخرى المستخدمة في التجربة. سيظهر الإدخال إلى كل منفذ COM كنافذة منفصلة (الشكل 2D).

4. تشغيل التجارب

1. بمجرد توازن الغرف لمدة 30 دقيقة ، قم بإغلاقها عن طريق إغلاق المحبس.
2. قم بتغطية الحمام والغرف بصندوق رغوة البوليسترين للحفاظ على بيئة مستقرة.
3. السماح لتحقيق التوازن لمدة ساعة أخرى.
4. قم بتشغيل التيار إلى مولد O₂ لكل غرفة باستخدام المفتاح الموجود في صندوق التحكم.
5. بمجرد تنشيط مولدات O₂ ، تأكد من زيادة الضغط إلى ضغط إيقاف التشغيل مسبقا.
   ملاحظة: تم استخدام 1017 هيكتوباسكال ، وهو أعلى بقليل من الضغط الجوي ، كضغط "OFF" في هذه السلسلة من التجارب. ستشير العودة إلى الضغط المحيط إلى تسرب الغاز من الغرف. علاوة على ذلك ، فإنه يسمح باستخدام نفس الضغط عبر التجارب بغض النظر عن الضغط الجوي المحيط. كان ضغط "ON" 1016 hPa ، مما يعني أن الضغط يحتاج فقط إلى انخفاض 1 hPa قبل تنشيط مولد O₂ . هذا يوفر حساسية كافية لقياس استهلاك O₂ في ذبابة الفاكهة. بمجرد ضغط الغرفة إلى إعداد "OFF" ، يجب أن ينخفض التيار إلى الصفر.
6. دع التجربة تستمر لمدة 3 ساعات أو أكثر.
   ملاحظة: يمكن أن يسمح ارتفاع V_O2 في درجات حرارة مرتفعة بأوقات تجربة أقصر. راقب من حين لآخر للتأكد من أن المعدات تعمل ولكن تجنب النشاط المفرط بالقرب من الغرف التي قد تؤثر على استقرار درجة الحرارة.

5. الانتهاء من التجربة

1. قم بإيقاف تشغيل مولدات O₂ على جميع وحدات التحكم.
   ملاحظة: قم أولا بتجنب تشغيل مولدات O₂ أثناء فتح الغرف.
2. افتح المحبس لفتح الغرف.
3. اترك نوافذ PuTTY مفتوحة لمدة 5-15 دقيقة أخرى لتوفير خط أساس نهائي.
4. أغلق نافذة PuTTY لكل وحدة تحكم ، مع إنهاء التسجيلات.
   ملاحظة: انتهت جميع التجارب بين الساعة 4:50 و 5:10 مساء.
5. افصل المستشعرات عن الكابلات.
6. انقل الغرف إلى الرف الجاف.
7. قم بإزالة مقابس المستشعر واحدة تلو الأخرى من الغرف.
8. افصل مولدات O₂ وضعها في رف الأنبوب.
9. امسح الشحوم من قابس المستشعر واحتفظ بها في الحامل.
10. تنظيف الشحوم من وصلات الغرفة وإزالة الأنابيب مع الذباب والجير الصودا.
11. تخدير الذباب في كل أنبوب باستخدام CO_{2 ،} واضغط على قارب وزن ووزن على ميزان دقيق.
    1. سجل وزن وعدد الذباب لكل أنبوب.
12. تخلص من الذباب أو ضعه جانبا لإجراءات إضافية.
13. تفريغ الجير الصودا من الخراطيش في حاوية النفايات.
14. افتح مولد O₂ وتخلص من محلول CuSO₄ في حاوية النفايات.
    1. شطف الأقطاب الكهربائية والأنبوب بالماء النقي.
    2. ضع رفوف الأنبوب للتجفيف.

6. تحليل بيانات تحويل الرسوم

1. استيراد البيانات كنص مفصول بفواصل إلى جدول بيانات، بحيث يشتمل كل سجل على ورقة عمل منفصلة.
2. سجل بيانات التيار والوقت لكل نبضة من مولد O₂ . بدءا من النبضة الأولى بعد ضغط الغرفة ، سجل وقت البدء ووقت الانتهاء (كأرقام صفوف) لكل نبضة حالية. هذا هو رقم الصف عندما يتجاوز التيار الصفر (عادة إلى حوالي 45-50 مللي أمبير) إلى الصف الأخير الذي يزيد عن الصفر.
3. قم بعمل جدول على ورقة العمل لتسجيل البيانات التالية:
   1. متوسط سعة التيار أثناء النبضة: = AVERAGE ([الصف الأول من النبض]: [الصف الأخير من النبضة]) لكل نبضة (من العمود الحالي).
   2. مدة النبض: ([الصف الأخير من النبض] - [الصف الأول من النبضة [-صف واحد]])/1000 لكل نبضة (من الوقت بالمللي ثانية العمود).
   3. إجمالي وقت التجربة: [الوقت في بداية النبضة الأخيرة] - [الوقت في نهاية النبضة الأولى بعد ضغط الغرفة] (من عمود الوقت بالدقائق).
4. ثم احسب نقل الشحنة (Q) لكل نبضة (متوسط المدة الحالية X)
5. اجمع الشحنة من جميع النبضات لحساب إجمالي الشحن (Q_tot).

7. تحليل استهلاك O₂

1. قم بإعداد جدول بيانات جديد لجميع البيانات وأدخل أو احسب ما يلي لكل غرفة:
   1. Q_tot (إجمالي الرسوم)
   2. الشامات (= س ÷ 96485 × 4)
   3. مل O₂ (= مول × 22413 مل / مول)
   4. إجمالي الوقت (من تحليل البيانات أعلاه)
   5. مل دقيقة ^-1 (= مل O₂ ÷ الوقت الإجمالي)
   6. الوزن بالجرام (الذباب المخدر ووزنه يقاس بعد التجربة)
   7. مل دقيقة-1 g-1 (= مل ^دقيقة-1 وزن ÷ بالجرام)
   8. مل / ساعة / ز (× أعلاه 60)
   9. ملغم / ذبابة (= وزن الذباب ÷ عدد الذباب)
   10. μL fly-1 h-1 (= (mL ^min-1 × 3600) ÷ عدد الذباب).
2. جدولة البيانات لكل علاج (النمط الجيني ، على سبيل المثال)
3. قارن بين العلاجات باستخدام ANOVA أو t-test أو Mann-Whitney u-test ¹³.

النتائج

يتم عرض الضغط ومخرجات التيار لوحدة التحكم في مقياس التنفس لغرفة واحدة في تجربة واحدة في الشكل 3 أ. ضغطت النبضة الأولى الطويلة الحالية على الغرفة من الضغط المحيط (حوالي 992 هيكتوباسكال) إلى عتبة إيقاف التشغيل المحددة مسبقا البالغة 1017 هيكتوباسكال. عندما استهلك الذباب O 2 وتم ام?...

Discussion

يوضح الإجراء أعلاه قياس استهلاك O₂ في D. Melanogaster باستخدام مقياس التنفس المجهري الكولومتري الإلكتروني. كانت البيانات الناتجة عن استهلاك O₂ في D. melanogaster من النوع البري ضمن النطاقات الموصوفة في معظم المنشورات السابقة باستخدام طرق متنوعة (الجدول 1) على الرغم من أنها ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
19/22 Thermometer Adapter	Wilmad-Labglass	ML-280-702	Sensor Plug
2 ml Screwcap Tubes	Fisher	3464	O2 generator
2-Pin Connector	Zyamy	40PIN-RFB10	O2 generator: cut to 2-pin
4-Pin Female Connector	TE Connectivity	215299-4	Sensor Plug
5 ml Polypropylene Tube	Falcon	352063	Cut to 5.5 cm and perforated
50 ml Schlenk Tube 19/22 Joint	Laboy	HMF050804	Chamber
6-Conductor Cable	Zenith	6-Conductor 26 ga	Cable
6-Pin Female Bulkhead Connector	Switchcraft	17982-6SG-300	Controller
6-Pin Female Connector	Switchcraft	18982-6SG-522	Sensor plug
6-Pin Male Connector	Switchcraft	16982-6PG-522	Cable
800 ul centrifuge tube	Fisher	05-408-120	Soda Lime Cartridge
ABS Plastic Enclosure	Bud Industries	PS-11533-G	Controller
Arduino Nano Every	Arduino LLC	ABX00028	Controller
BME 280 Sensor	DIYMall	FZ1639-BME280	Sensor Plug
Circuit Board	Lheng	5 X 7 cm	Controller
Copper Sulfate	BioPharm	BC2045	O2 Generator
Computer	Azulle	Byte4	Data Acquisition
Cotton Rolls	Kajukajudo	#2	Cut in half to plug fly tubes Cut in quarters for humidity
Environmental Chamber	Percival	I30 VLC8	Fly Care
Epoxy	JB Weld	Plastic Bonder	Secure Electrodes in O2 Generator
Fly Food	Lab Express	Type R	Fly Care
Keck Clamps	uxcell	a20092300ux0418	Secures glass joint of chamber to plug
Low-Viscosity Epoxy	Loctite	E-30CL	Sensor Plug
OLED Display	IZOKEE	IZKE31-IIC-WH-3	Controller
Platinum Wire 24 ga	uGems	14349	O2 generator
Silicone grease	Dow-Corning	High Vacuum Grease	Seals chamber-plug connection
Soda Lime	Jorvet	JO553	CO2 absorption
Toggle Switch	E-Switch	100SP1T1B1M1QEH	Controller
USB Cable	Sabrent	CB-UM63	Controller
USB Hub	Atolla	Hub 3.0	Connect controllers to computer
Water bath	Amersham	56-1165-33	Temperature Control
Water Bath Tank	Glass Cages	15-liter rimless acrylic	Bath for Respirometers