A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

الهدف من هذه المخطوطة هو فحص استخدام اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء للكشف عن الأجسام المضادة IgG و IgM الخاصة بداء.

Abstract

تم تطوير اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء (IFA) للكشف عن مختلف أنماط الأجسام المضادة الخاصة بداء في الأمصال أو السائل الشوكي الدماغي. يوفر هذا الاختبار نتائج سريعة ويمكن استخدامه للكشف عن الأجسام المضادة لداء في عدة سيناريوهات مختلفة. يعد اختبار IFA لداء مفيدا بشكل خاص للكشف السريع والمبكر عن الأجسام المضادة لتقييم الاستجابة المناعية لدى المريض الذي أصيب بداء. على الرغم من أن الطرق الأخرى لتشخيص داء قبل الوفاة لها الأسبقية ، يمكن استخدام هذا الاختبار لإثبات التعرض الأخير لفيروس داء من خلال اكتشاف الأجسام المضادة. لا يوفر اختبار IFA عيار الأجسام المضادة المعادلة للفيروس (VNA) ، ولكن يمكن تقييم استجابة الوقاية قبل التعرض (PrEP) من خلال وجود الأجسام المضادة الإيجابية أو السلبية. يمكن استخدام هذا الاختبار في مواقف مختلفة ويمكن أن يوفر نتائج لعدد من الأهداف المختلفة. في هذه الدراسة ، استخدمنا العديد من عينات المصل المقترنة من الأفراد الذين تلقوا PrEP وأظهروا وجود الأجسام المضادة لداء بمرور الوقت باستخدام اختبار IFA.

Introduction

يستخدم اختبار الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة لداء (IFA) للكشف عن مختلف أنماط الأجسام المضادة الخاصة بداء في الأمصال أو السائل الدماغي الشوكي. وهو واحد من ترسانة من الاختبارات المتاحة لمراقبة مريض داء قبل الوفاة. من المفيد بشكل خاص للكشف المبكر عن الأجسام المضادة تقييم الاستجابة المناعية للمريض لعدوى داء. عند استخدامه بالاقتران مع اختبارات أخرى وتاريخ الحالة وحالة تطعيم المريض ، يمكن أن يساعد اختبار IFA في تحديد التعرض لفيروس داء أو اللقاح1. نظرا لأن اختبار IFA يقيس IgM و / أو IgG ، يمكن أن تشير قيم الجسم المضاد المحدد إلى إطار زمني تقريبي من التعرض للمستضد1. قد يكون هذا الاختبار مفيدا في التطبيقات المدرجة أو غيرها....

Protocol

تمت الموافقة على البروتوكول التالي للاستخدام الأخلاقي للعينات البشرية من قبل مركز Wadsworth التابع لوزارة الصحة بولاية نيويورك لتطوير الفحص ، رقم الموافقة على البروتوكول # 03-019.

1. السلامة

  1. ارتد معدات الحماية الشخصية (PPE) ، على الأقل لحماية العين (نظارات أو درع للوجه) ، وقناع جراحي ، وقفازات غير مطاطية.
  2. تأكد من تطعيم الموظفين ضد داء وأنه تم إثبات عيار ≥0.5 وحدة دولية / مل خلال الأشهر ال 6 الماضية.

2. إعداد شريحة مستضد

ملاحظة: قم بإجراء جميع عمليات التلاعب بالفيروسات والسائل الدماغي الشوكي والمصل في خزانة السلامة البيولوجية (BS....

النتائج

تم جمع جميع عينات المصل من المرضى في نفس الأطر الزمنية تقريبا بعد PrEP. تم اختبار العينات من خمسة مرضى مختلفين في النقاط الزمنية التالية: أسبوعان بعد التطعيم النهائي ضد لقاح داء ، و 6 أشهر بعد سلسلة لقاح داء ، و 18 شهرا بعد سلسلة لقاح داء. تم تخفيف كل عينة مصل في سلسلة وتصنيفها لكل من وجود IgM و IgG ،.......

Discussion

يستفيد اختبار IFA من مركب الأجسام المضادة للمستضد ، مما يسمح بموقع وضع العلامات لتصور الأجسام المضادة الخاصة بداء. يتم زرع خلايا الورم الأرومي العصبي أو خلايا BHK على شرائح مجهرية متعددة الآبار مغلفة ب PTFE ويتم تلقيحها بسلالة مختبر فيروس داء CVS-11. بمجرد أن تتلاقى الطبقة الأحادية وتصل الخلايا إ.......

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

نحن ممتنون لمركز وادزورث التابع لوزارة الصحة بولاية نيويورك لدعم هذا المشروع.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
25x55mm glass cover slipsAny
AcetoneAny
Anti-Human IgG Labeled ConjugateSigma-AldrichF9512
Anti-Human IgM Labeled ConjugateSeraCare5230-0286
Aspirating pipette tipAny
BHK-21 CellsATCCCCL-10
BION IFA DiluentMBL BIONDIL-9993
Cell Culture waterSigma-AldrichW3500EGM
Coplin JarsAny
Fetal Bovine Serum Sigma-AldrichF2442EGM
Fluorescent microscope with FITC filterAny
GlycerolSigma-AldrichG7893Mountant
Gullsorb IgM inactivation reagentFisher Scientific23-043-158IgG Inactivation Reagent
L-GlutamineSigma-AldrichG-7513EGM
Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonateSigma-AldrichM0643EGM
Mouse Neuroblastoma CellsATCCCCL-131
Multi-well Teflon coating glass slidesAny
PBSAnypH 7.6 
PenicillinSigmaP-3032EGM
Rabies Direct Fluorescent Antibody ConjugateMillipore Sigma5100, 5500 or 6500
Sodium bicarbonateSigma-AldrichS-5761EGM
Sodium Chloride crystalsSigma-AldrichS5886Mountant
Sterile dropperAny
Streptomycin sulfate saltSigmaS9137EGM
Trizma pre-set crystals pH 9.0Sigma-AldrichS9693Mountant
Tryptose Phosphate BrothBD260300EGM
Vitamin mixSigma-AldrichM6895EGM

References

  1. Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , 232-245 (2018).
  2. Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. ....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved