광견병 간접 형광 항체 검사를 이용한 광견병 IgG 및 IgM 항체 검출

요약

이 원고의 목적은 광견병 특이적 IgG 및 IgM 항체 검출을 위한 광견병 간접 형광 항체 검사의 사용을 조사하는 것입니다.

초록

광견병 간접 형광 항체(IFA) 검사는 혈청 또는 뇌척수액에서 다양한 광견병 특이적 항체 동형을 검출하기 위해 개발되었습니다. 이 검사는 빠른 결과를 제공하며 여러 가지 시나리오에서 광견병 항체를 검출하는 데 사용할 수 있습니다. 광견병 IFA 검사는 광견병이 발병한 환자의 면역 반응을 평가하기 위한 항체를 빠르고 조기에 발견하는 데 특히 유용합니다. 광견병 사전 진단을 위한 다른 방법이 우선하지만, 이 검사는 항체 검출을 통해 최근의 광견병 바이러스 노출을 입증하는 데 활용될 수 있습니다. IFA 검사는 바이러스 중화 항체(VNA) 역가를 제공하지 않지만, 노출 전 예방(PrEP) 반응은 양성 또는 음성 항체 존재를 통해 평가할 수 있습니다. 이 테스트는 다양한 상황에서 활용될 수 있으며 다양한 대상에 대한 결과를 제공할 수 있습니다. 이 연구에서 우리는 PrEP를 투여받은 개인의 여러 쌍을 이루는 혈청 샘플을 사용하고 IFA 테스트를 사용하여 시간이 지남에 따라 광견병 항체의 존재를 입증했습니다.

서문

광견병 간접 형광 항체(IFA) 검사는 혈청 또는 뇌척수액에서 다양한 광견병 특이적 항체 동형을 검출하는 데 사용됩니다. 그것은 부검 전 광견병 환자를 모니터링하는 데 사용할 수 있는 다양한 검사 중 하나입니다. 광견병 감염에 대한 환자의 면역 반응을 평가하기 위해 항체를 조기에 발견하는 데 특히 유용합니다. 다른 검사, 증례 기록 및 환자의 백신 접종 상태와 함께 사용할 경우, IFA 검사는 광견병 바이러스 또는 백신에 대한 노출을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다¹. IFA 검사는 IgM 및/또는 IgG를 측정하기 때문에 특정 항체의 값은 항원¹에 노출된 시점의 대략적인 기간을 나타낼 수 있습니다. 이 테스트는 나열된 응용 프로그램이나 아직 탐색되지 않은 다른 응용 프로그램에서 유용할 수 있습니다.

몇 가지 광견병 혈청학적 분석이 있습니다. 신속 형광 초점 억제 검사(RFFIT), 형광 항체 바이러스 중화 검사(FAVN) 검사 또는 이들의 변형은 광견병 바이러스 중화 항체(RVNA^)를 측정하는 주요 방법입니다1. 그러나 이러한 검사는 IgM 항체와 IgG 항체를 구별하지 않습니다. 광견병 면역 반응을 모니터링하....

프로토콜

다음 프로토콜은 분석 개발을 위해 뉴욕주 보건부 워즈워스 센터(Wadsworth Center for assay development)에서 인체 샘플의 윤리적 사용을 승인했으며, 프로토콜 승인 번호 #03-019입니다.

1. 안전

1. 개인 보호 장비(PPE), 최소한의 눈 보호 장비(안경 또는 안면 보호대), 수술용 마스크 및 비라텍스 장갑을 착용하십시오.
2. 직원이 광견병 예방 접종을 받고 지난 6개월 이내에 ≥0.5IU/mL의 역가가 입증되었는지 확인합니다.

2. 항원 슬라이드 준비

알림: 모든 바이러스, CSF 및 혈청 조작은 범용 예방 조치를 사용하여 생물 안전 캐비닛(BSC)에서 수행합니다.

1. 10% 소 태아 혈청(EGM)이 보충된 Eagle의 최소 필수 배지에 3.0 x 10⁵ cells/mL 농도로 마우스 신경모세포종 또는 BHK-21 세포 20mL를 준비하고 사용할 때까지 차갑게 보관합니다.
2. EGM에서 밀리리터당 1.0 x 10^6.5 50% 조직 배양 감염 선량....

토론

IFA 검사는 항원-항체 복합체를 이용하여 표지 부위에서 광견병 특이적 항체를 시각화할 수 있습니다. 신경모세포종 또는 BHK 세포를 멀티웰 PTFE 코팅 현미경 슬라이드에 파종하고 광견병 바이러스 실험실 균주 CVS-11을 접종합니다. 단층이 합류하고 세포가 약 50%의 원하는 감염도에 도달하면 슬라이드를 사용할 준비가 될 때까지 보관합니다⁶.

환자 혈청 또는 CS.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
25x55mm glass cover slips	Any
Acetone	Any
Anti-Human IgG Labeled Conjugate	Sigma-Aldrich	F9512
Anti-Human IgM Labeled Conjugate	SeraCare	5230-0286
Aspirating pipette tip	Any
BHK-21 Cells	ATCC	CCL-10
BION IFA Diluent	MBL BION	DIL-9993
Cell Culture water	Sigma-Aldrich	W3500	EGM
Coplin Jars	Any
Fetal Bovine Serum	Sigma-Aldrich	F2442	EGM
Fluorescent microscope with FITC filter	Any
Glycerol	Sigma-Aldrich	G7893	Mountant
Gullsorb IgM inactivation reagent	Fisher Scientific	23-043-158	IgG Inactivation Reagent
L-Glutamine	Sigma-Aldrich	G-7513	EGM
Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate	Sigma-Aldrich	M0643	EGM
Mouse Neuroblastoma Cells	ATCC	CCL-131
Multi-well Teflon coating glass slides	Any
PBS	Any		pH 7.6
Penicillin	Sigma	P-3032	EGM
Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate	Millipore Sigma	5100, 5500 or 6500
Sodium bicarbonate	Sigma-Aldrich	S-5761	EGM
Sodium Chloride crystals	Sigma-Aldrich	S5886	Mountant
Sterile dropper	Any
Streptomycin sulfate salt	Sigma	S9137	EGM
Trizma pre-set crystals pH 9.0	Sigma-Aldrich	S9693	Mountant
Tryptose Phosphate Broth	BD	260300	EGM
Vitamin mix	Sigma-Aldrich	M6895	EGM