Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا للإنتاج عالي الكفاءة لجذور شعر فول الصويا المعدلة وراثيا.

Abstract

فول الصويا (جلايسين ماكس) هو محصول قيم في الزراعة التي لديها الآلاف من الاستخدامات الصناعية. جذور فول الصويا هي الموقع الرئيسي للتفاعل مع الميكروبات التي تنقلها التربة والتي تشكل تكافلا لإصلاح النيتروجين ومسببات الأمراض ، مما يجعل الأبحاث التي تنطوي على علم الوراثة لجذر فول الصويا ذات أهمية قصوى لتحسين إنتاجها الزراعي. يتم التوسط في التحول الجيني لجذور شعر فول الصويا (HRs) بواسطة سلالة Agrobacterium rhizogenes NCPPB2659 (K599) وهو أداة فعالة لدراسة وظيفة الجينات في جذور فول الصويا ، ويستغرق 2 أشهر فقط من البداية إلى النهاية. هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا يحدد طريقة الإفراط في التعبير عن جين مهم في الموارد البشرية لفول الصويا وإسكاته. تشمل هذه المنهجية تعقيم بذور فول الصويا ، وإصابة الفلقات ب K599 ، واختيار وحصاد HRs المتحولة وراثيا لعزل الحمض النووي الريبي ، وإذا لزم الأمر ، تحليلات الأيض. إن إنتاجية النهج كافية لدراسة العديد من الجينات أو الشبكات في وقت واحد ويمكن أن تحدد الاستراتيجيات الهندسية المثلى قبل الالتزام بنهج التحول المستقر طويل الأجل.

Introduction

فول الصويا (جليكاين ماكس) هو من بين المحاصيل الأكثر قيمة في الزراعة. لديها الآلاف من الاستخدامات التجارية والصناعية ، مثل المواد الغذائية والأعلاف الحيوانية والنفط ، وكمصدر للمواد الخام للتصنيع1. قدرتها على تكوين علاقة تكافلية مع الكائنات الحية الدقيقة في التربة المثبتة للنيتروجين ، وهي ريزوبيا ، تزيد من أهمية دراسة علم الوراثة فول الصويا2. على سبيل المثال ، يمكن أن يؤدي ضبط خصائص تثبيت النيتروجين في جذور فول الصويا إلى تقليل انبعاثات الكربون وتقليلمتطلبات الأسمدة النيتروجينية 3 بشكل كبير. وبالتالي ، فإن فهم علم الوراثة الذي يتحكم في جوانب بيولوجيا جذر فول الصويا ، على وجه الخصوص ، له تطبيقات واسعة في الزراعة والصناعة. بالنظر إلى هذه الفوائد ، من المهم أن يكون لديك بروتوكول موثوق لتحليل وظيفة جينات فول الصويا.

ربما تكون Agrobacterium tumefaciens هي الأداة الأكثر استخداما للتحول الوراثي للنبات حيث أن لديها القدرة على دمج الحمض النووي (T-DNA) في الجينوم النووي للعديد من الأنواع النباتية. عندما تصيب Agrobacterium نباتا ، فإنها تنقل البلازميد المسبب للورم (Ti) إلى كروموسوم المضيف ، مما يؤدي إلى تكوين ورم في موقع الإصابة. تم استخدام التحول بوساطة Agrobacterium على نطاق واسع لعقود من الزمن للتحليل الوظيفي الجيني ومن أجل تعديل سمات المحاصيل4. على الرغم من أن أي جين مهم يمكن نقله بسهولة إلى الخلايا النباتية المضيفة من خلال التحول بوساطة A. tumefaciens، فإن هذه الطريقة لها العديد من العيوب. إنها تستغرق وقتا طويلا ومكلفة وتتطلب خبرة واسعة للعديد من الأنواع النباتية ، مثل فول الصويا. على الرغم من أنه يمكن تحويل عدد قليل من أنواع فول الصويا عن طريق نهج عقدة النبتة باستخدام A. tumefaciens، فإن عدم كفاءة هذا النهج يستلزم الحاجة إلى تقنية تحويل وراثي بديلة سريعة وعاليةالكفاءة 4,5. حتى غير الخبراء يمكنهم استخدام طريقة تحويل جذر الشعر (HR) بوساطة Agrobacterium rhizogenes للتغلب على هذه العيوب.

يعد تحويل الموارد البشرية أداة سريعة نسبيا ، ليس فقط لتحليل وظيفة الجينات ، ولكن أيضا لتطبيقات التكنولوجيا الحيوية ، مثل إنتاج المستقلبات المتخصصة والمواد الكيميائية الدقيقة ، والبروتينات السكرية النشطة بيولوجياالمعقدة 6. لا يتطلب إنتاج الموارد البشرية لفول الصويا خبرة واسعة ، حيث يمكن توليدها عن طريق جرح أسطح النبتات ، يليها التلقيح باستخدام Agrobacterium rhizogenes7. تعبر A. rhizogenes عن جينات الفوعة (Vir) المشفرة بواسطة بلازميد Ti الذي ينقل ويحمل ويدمج شريحة T-DNA في جينوم الخلايا النباتية مع تحفيز نمو الجذر خارج الرحم في نفس الوقت8.

بالمقارنة مع أنظمة التعبير الجيني الأخرى لفول الصويا ، مثل biolistics أو التحول القائم على A. tumefaciens، من الأنسجة والخلايا وزراعة الأعضاء، فإن نظام التعبير HR يظهر العديد من المزايا. أولا ، الموارد البشرية مستقرة وراثيا ويتم إنتاجها بسرعة على الوسائط الخالية من الهرمونات1،9،10. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للموارد البشرية إنتاج مستقلبات متخصصة بكميات تعادل أو تزيد عن الجذور الأصلية11,12. هذه المزايا تجعل الموارد البشرية أداة تكنولوجيا حيوية مرغوبة لأنواع النباتات التي لا تتوافق مع A. tumefaciens أو التي تتطلب ظروف زراعة الأنسجة الخاصة لتشكيل أنسجة متوافقة. طريقة HR هي طريقة فعالة لتحليل تفاعلات البروتين والبروتين ، وتوطين البروتين تحت الخلوي ، وإنتاج البروتين المؤتلف ، والمعالجة النباتية ، والطفرات ، وتأثيرات الجينوم الواسعة باستخدام تسلسل الحمض النووي الريبي13،14،15. يمكن استخدامه أيضا لدراسة إنتاج المستقلبات المتخصصة التي لها قيمة في الصناعة ، بما في ذلك الجلسولين ، الذي يعالج دفاع فول الصويا ضد مسببات الأمراض الميكروبية المهمة Phytophthora sojae وله أنشطة رائعة مضادة للسرطان ووقائية عصبية في البشر16,17.

يوضح هذا التقرير بروتوكولا سهلا وفعالا لإنتاج الموارد البشرية لفول الصويا. مقارنة بطرق تحويل الموارد البشرية السابقة ، يوفر هذا البروتوكول تحسنا كبيرا (33٪ -50٪) في معدل تكوين الموارد البشرية عن طريق الفحص المسبق لمحولات A. rhizogenes لوجود بلازميد Ti قبل تلقيح فلقات فول الصويا. نوضح قابلية تطبيق هذا البروتوكول من خلال تحويل العديد من المتجهات الثنائية التي تبالغ في التعبير عن جينات عامل نسخ فول الصويا أو تسكتها.

Protocol

ملاحظة: يوصى بإجراء جميع خطوات الإجراءات في ظل ظروف معقمة.

1. تعقيم بذور فول الصويا

  1. في خزانة السلامة البيولوجية ، ضع 16-20 بذرة فول الصويا Williams 82 المستديرة في حالة نقية (أي بدون شقوق أو عيوب) في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل.
  2. أضف 30 مل من كحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪ ، ورج برفق لمدة 30 ثانية ، ثم صب الكحول.
  3. رج البذور برفق باستخدام 30 مل من المبيض بنسبة 10٪ لمدة 10 ثوان واترك البذور تجلس في المحلول لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة (RT ، 25 درجة مئوية). بعد 5 دقائق ، صفي المبيض.
  4. كرر الرج ثلاث مرات مع 30 مل من H 2 O المعقم عالي النقاء لمدةدقيقة واحدة لكل شطف وتخلص من H2O بين كل شطف.
  5. ضع البذور المعقمة على ورق ترشيح مشبع ب 5 مل من وسط الإنبات والزراعة المشتركة (الأوتوكلاف نصف القوة السائل موراشيج و Skoog [MS] وسط مع 1٪ سكروز [درجة الحموضة = 5.8] ثم أضف 2.5 مل / لتر من الفيتامينات) في أطباق بتري المعقمة.
  6. ضع الألواح في الظلام عند RT (25 درجة مئوية) لمدة 3 أيام قبل نقل الألواح عند 22 درجة مئوية تحت 16 ساعة من مصابيح الفلورسنت T5 البيضاء الباردة (100 μE m-2 · s-1) لمدة 4 أيام للسماح للبذور بالإنبات.
    ملاحظة: تخلص من البذور المجعدة أو المتشققة. أفضل البذور هي تلك الكبيرة والصفراء بشكل موحد. تعقيم ما لا يقل عن ضعف عدد البذور المطلوبة للتجربة لاختيار البذور ذات النوعية الجيدة ، حيث قد لا تكون بعض البذور مثالية بسبب التلف أو الأمراض أو عدم الإنبات.

2. إصابة النبتات ب K599

ملاحظة: استخدم متجهات سلسلة pGWB ، حيث يضمن اختيارها المزدوج التكامل الجينومي لشريط T-DNA بأكمله. تم استخدام التثقيب الكهربائي لتحويل ناقل ثنائي يؤوي الجين محل الاهتمام إلى A. rhizogenes pRi265918.

  1. استنادا إلى تسلسل A. rhizogenes pRi2659 plasmid18 ، صمم الاشعال للكشف عن جين Ti plasmid VirD2 (VirD2 إلى الأمام : 5'-CCCGATCGAGCTCAAGTTAT-3'; عكس VirD2: 5'-TCGTCTGGCTGACTTTCGT-3'; حجم التضخيم المتوقع: 221 نقطة أساس). بعد التحول ، اختبر مستعمرات Agrobacterium للاحتفاظ ب VirD2 بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام مجموعة PCR (انظر جدول المواد). دورة PCR: 94 °C لمدة 3 دقائق ؛ 35 دورة (94 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة ، 58 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، 72 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة) ؛ و 72 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
  2. بعد اختيار مستعمرة A. rhizogenes التي تحتوي على كل من VirD2 والجين محل الاهتمام (GOI) ، قم بخط بعضها على ألواح Luria-Bertani (LB) المتوسطة التي تحتوي على المضادات الحيوية المناسبة (50 مجم / لتر) للبلازميد محل الاهتمام واحتضانها طوال الليل عند 30 درجة مئوية. في حالة استخدام سبكتينومايسين ، أضف تركيز 100 مجم / لتر.
  3. استخدم طرف ماصة P200 لكشط طول ~ 1.5 سم من K599 Agrobacterium من ألواح LB وإعادة تعليق الخلايا في 1 مل من المخزن المؤقت للفوسفات (PB ؛ 0.01 M Na2HPO4 ، 0.15 M NaCl ، درجة الحموضة 7.5).
  4. تمييع Agrobacterium في H2O معقم وعالي النقاء (v / v = 1: 1) وأسيتوسيرينجون (AS؛ مخزون 100 mM في ثنائي ميثيل سلفوكسيد [DMSO] ، v / v = 1: 1000). قم بقياس الامتصاص باستخدام أنبوب كوفيت بكثافة بصرية تبلغ 600 نانومتر (OD600). النطاق الأمثل المتوقع هو بين 0.5 و 0.8.
  5. في خزانة السلامة الحيوية ، اغمس مشرطا معقم في محلول K599 Agrobacterium وقم بعمل عدة جروح بعمق 1 مم على طول السطح الداخلي (الجانب المحوري ، المسطح) من النبتة. أثناء التلقيح ، استخدم ملقط معقم لتثبيت النبتة.
  6. ضع حوالي 6-8 فلقات مقطعة من الجانب لأسفل على طبق بتري يحتوي على ورق ترشيح مشبع بوسط GC مع AS.
    ملاحظة: لتحضير 6 ألواح ، يكفي 50 مل من وسط GC و 50 ميكرولتر من 100 mM AS لتحقيق تركيز نهائي قدره 100 ميكرومتر.
  7. احتضان الألواح في RT (25 درجة مئوية) لمدة 3 أيام تحت فترة ضوئية 16 ساعة (~ 65 μE).
  8. نقل النبتات المصابة إلى ألواح نمو الجذور المشعرة (HRG) (الأوتوكلاف نصف قوة MS مع 3٪ سكروز [درجة الحموضة = 5.8] و 2.6 جم / لتر جيلزان ، ثم أضف 2.5 مل / لتر من خليط الفيتامينات و 500 مجم / لتر تيمينتين).
    ملاحظة: كانت هناك بعض المشكلات المتعلقة ب timentin من بعض البائعين البديلين ، والتي لم يتم التخلص من K599 منها. يوصى باستخدام أطباق بتري أطول (100 مم × 25 مم) لمتوسط HRG.
  9. احتضان ألواح HRG عند 22 درجة مئوية في غرفة النمو مع ضبط المعلمات على ضوء 100 μE على فترة ضوئية مدتها 16 ساعة حتى يتم ملاحظة الجذور الأولية ذات الجذور الثانوية بطول 2-3 سم (~ 3-4 أسابيع).

3. اختيار وحصاد الموارد البشرية

  1. حصاد الجذور الأولية (طولها 5-7 سم) التي تنمو من الكالس وتحتوي على جذور ثانوية (طولها 2-3 سم) باستخدام مشرط معقم وملقط. نقل إلى لوحات HRG الاختيار التي تحتوي على المضادات الحيوية المناسبة. دع الموارد البشرية تنمو لمدة 5 أيام أخرى على لوحات HRG المختارة.
    ملاحظة: عادة ما يستخدم كاناميسين (50 مجم / لتر) أو هيجروميسين (50 مجم / لتر) أو فوسفينوثريسين (10 مجم / لتر) للاختيار. بالنسبة لمتجهات التعبير ، يتم استخدام pGWB2 للتعبير الزائد ، ويستخدم pANDA35HK لإسكات RNAi ، ويستخدم pGWB6 للتوطين تحت الخلوي ، ويستخدم pMDC7 للتعبير المستحث.
  2. في اليوم الخامس ، حصاد الموارد البشرية المعدلة وراثيا ذات الجذور الثانوية بطول 3-6 سم. في حالة ملاحظة البروتينات الفلورية ، فإن الجذور الثانوية لها القليل من التألق الذاتي. في حالة إجراء الاستنباط أو العلاجات الكيميائية ، قطع الجذور الثانوية إلى قطع 1 سم ووضع ~ 100 ملغ على أجار HRG في كومة. بعد ذلك ، قم بتشبع الأكوام ب 80 ميكرولتر من العلاج المناسب واترك الألواح تحضن عند RT (25 درجة مئوية).
  3. بعد وقت العلاج المطلوب ، تابع استخراج الحمض النووي الريبي أو المستقلب.
  4. بالنسبة للحمض النووي الريبي ، جفف الجذور بسرعة على منشفة ورقية معقمة واحصدها مباشرة في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 2 مل.
  5. أغلق الجزء العلوي من الأنبوب على الفور باستخدام parafilm ، وقم بعمل فتحتين صغيرتين باستخدام ملقط مدبب ، واغمر الأنابيب في النيتروجين السائل. تجفلى لمدة 3 أيام ، ثم قم بتخزين العينات في -80 درجة مئوية.
    ملاحظة: من الضروري تحديد الموارد البشرية البيضاء. بعد 5 أيام من النمو على اللوحة الانتقائية ، ستبقى الموارد البشرية المعدلة وراثيا بيضاء ، لكن الجذور غير المعدلة وراثيا ستتحول إلى اللون البني.

النتائج

النتائج التمثيلية مأخوذة من البيانات المنشورة19,20. تظهر نتائج مستعمرة PCR (cPCR) للبكتيريا الزراعية K599 المحولة في الشكل 1. كما هو موضح في المستعمرات الإيجابية في الشكل 1 ، تم الكشف عن الجين محل الاهتمام بواسطة cPCR (ا...

Discussion

خلال العقد الماضي ، تم تطوير طريقة HR لفول الصويا كأداة قوية لدراسة الجينات المشاركة في تثبيت النيتروجين 22,23 ، وتحمل الإجهاد الحيوي وغير الحيوي 24,25 ، ومسارات الأيض الحيوي 26,27. إن معرفة كيفية إنت?...

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم تمويل هذا البحث من قبل مجلس أبحاث العلوم الطبيعية والهندسة في كندا (NSERC) رقم المنحة RGPIN-2020-06111 وبتبرع سخي من براد ليس. نود أن نشكر واين باروت (جامعة جورجيا) على K599 Agrobacterium والبروتوكول الأولي ، ومختبر Nakagawa & Hachiya (جامعة شيمانه) على المتجهات الفارغة pGWB2 و pGWB6 و pANDA35HK.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetosyringoneCayman23224
Bleachlavo21124
DMSOFisher bioreagents195679
GelzanPhytotechHYY3251089A
HygromycinPhytotechHHA0397050B
Isopropyl alcoholFisher chemical206462
KanamycinPhytotechSQS0378007G
LB powderFisher bioreagents200318
MS powderCaisson labs2210001
Na2HPO4Fisher bioreagents194171
NaClFisher chemical192946
Petri dishesFisherbrand08-757-11100 mm x 25 mm
PhosphinothricinCedarlaneP034-250MG
REDExtract-N-Amp PCR KitSigmaR4775
SucroseBioshop2D76475
TimentinCaisson labs12222002
VitaminsCaisson labs2211010

References

  1. Li, S., et al. Optimization of Agrobacterium-mediated transformation in soybean. Frontiers in Plant Science. 8, 246 (2017).
  2. Elhady, A., Hallmann, J., Heuer, H. Symbiosis of soybean with nitrogen fixing bacteria affected by root lesion nematodes in a density-dependent manner. Scientific Reports. 10, 1619 (2020).
  3. Huang, X. -. F., et al. Rhizosphere interactions: root exudates, microbes, and microbial communities. Botany. 92 (4), 267-275 (2014).
  4. Ma, H., et al. Highly efficient Agrobacterium rhizogenes-mediated genetic transformation and applications in citrus. Frontiers in Plant Science. 13, 1039094 (2022).
  5. Hwang, H. -. H., Yu, M., Lai, E. -. M. Agrobacterium-mediated plant transformation: biology and applications. The Arabidopsis Book. 15, e0186 (2017).
  6. Gutierrez-Valdes, N., et al. Hairy root cultures-a versatile tool with multiple applications. Frontiers in Plant Science. 11, 33 (2020).
  7. Ono, N. N., Tian, L. The multiplicity of hairy root cultures: prolific possibilities. Plant Science. 180 (3), 439-446 (2011).
  8. Kereszt, A., et al. Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of soybean to study root biology. Nature Protocols. 2 (4), 948-952 (2007).
  9. Chen, L., et al. Soybean hairy roots produced in vitro by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation. The Crop Journal. 6 (2), 162-171 (2018).
  10. Song, J., Tóth, K., Montes-Luz, B., Stacey, G. Soybean hairy root transformation: a rapid and highly efficient method. Current Protocols. 1 (7), e195 (2021).
  11. Fattahi, F., Shojaeiyan, A., Palazon, J., Moyano, E., Torras-Claveria, L. Methyl-β-cyclodextrin and coronatine as new elicitors of tropane alkaloid biosynthesis in Atropa acuminata and Atropa belladonna hairy root cultures. Physiologia Plantarum. 172 (4), 2098-2111 (2021).
  12. Farrell, K., Jahan, M., Kovinich, N. Distinct mechanisms of biotic and chemical elicitors enable additive elicitation of the anticancer Phytoalexin Glyceollin I. Molecules. 22 (8), 1261 (2017).
  13. Cheng, Y., et al. Highly efficient Agrobacterium rhizogenes-mediated hairy root transformation for gene functional and gene editing analysis in soybean. Plant Methods. 17 (1), 73 (2021).
  14. Arora, D., et al. Establishment of proximity-dependent biotinylation approaches in different plant model systems. Plant Cell. 32 (11), 3388-3407 (2020).
  15. Gomes, C., Dupas, A., Pagano, A., Grima-Pettenati, J., Paiva, J. A. P. Hairy root transformation: a useful tool to explore gene function and expression in Salix spp. recalcitrant to transformation. Frontiers in Plant Science. 10, 1427 (2019).
  16. Ahmed, S., Kovinich, N. Regulation of phytoalexin biosynthesis for agriculture and human health. Phytochemistry Reviews. 20, 483-505 (2021).
  17. Walker, R. R., et al. Glyceollins trigger anti-proliferative effects in hormone-dependent aromatase-inhibitor-resistant breast cancer cells through the induction of apoptosis. International Journal of Molecular Sciences. 23 (5), 2887 (2022).
  18. Tong, X., et al. The complete genome sequence of cucumopine-type Agrobacterium rhizogenes strain K599 (NCPPB2659), a nature's genetic engineer inducing hairy roots. International Journal of Agriculture Biology. 20 (5), 1167-1174 (2018).
  19. Lin, J., et al. RNA-Seq dissects incomplete activation of phytoalexin biosynthesis by the soybean transcription factors GmMYB29A2 and GmNAC42-1. Plants. 12 (3), 545 (2023).
  20. Jahan, M. A., et al. Glyceollin transcription factor GmMYB29A2 regulates soybean resistance to Phytophthora sojae. Plant Physiology. 183 (2), 530-546 (2020).
  21. Jahan, M. A., et al. The NAC family transcription factor GmNAC42-1 regulates biosynthesis of the anticancer and neuroprotective glyceollins in soybean. BMC Genomics. 20, 149 (2019).
  22. Nguyen, C. X., et al. Critical role for uricase and xanthine dehydrogenase in soybean nitrogen fixation and nodule development. The Plant Genome. , e20171 (2021).
  23. Brear, E. M., et al. GmVTL1a is an iron transporter on the symbiosome membrane of soybean with an important role in nitrogen fixation. New Phytologist. 228 (2), 667-681 (2020).
  24. Chen, Z., et al. Overexpression of transcription factor GmTGA15 enhances drought tolerance in transgenic soybean hairy roots and Arabidopsis plants. Agronomy. 11 (1), 170 (2021).
  25. Savka, M., Ravillion, B., Noel, G., Farrand, S. Induction of hairy roots on cultivated soybean genotypes and their use to propagate the soybean cyst nematode. Phytopathology. 80 (5), 503-508 (1990).
  26. Subramanian, S., Graham, M. Y., Yu, O., Graham, T. L. RNA interference of soybean isoflavone synthase genes leads to silencing in tissues distal to the transformation site and to enhanced susceptibility to Phytophthora sojae. Plant Physiology. 137 (4), 1345-1353 (2005).
  27. Sharma, A. R., Gajurel, G., Ahmed, I., Roedel, K., Medina-Bolivar, F. Induction of the prenylated stilbenoids arachidin-1 and arachidin-3 and their semi-preparative separation and purification from hairy root cultures of peanut (Arachis hypogaea l.). Molecules. 27 (18), 6118 (2022).
  28. Lozovaya, V. V., et al. Isoflavonoid accumulation in soybean hairy roots upon treatment with Fusarium solani. Plant Physiology Biochemistry. 42 (7-8), 671-679 (2004).
  29. Rahimi Khonakdari, M., Rezadoost, H., Heydari, R., Mirjalili, M. H. Effect of photoperiod and plant growth regulators on in vitro mass bulblet proliferation of Narcissus tazzeta L. (Amaryllidaceae), a potential source of galantamine. Plant Cell, Tissue, and Organ Culture. 142 (1), 187-199 (2020).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

195 Agrobacterium

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved