استخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا لعينات الفكاهة الزجاجية والمائية لتشخيص ومراقبة سرطان الغدد الليمفاوية في الشبكية والجسم الزجاجي

Summary

تم إنشاء إجراء لاستخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا من الفكاهة الزجاجية والمائية لإجراء دراسات جزيئية لتشخيص سرطان الغدد الليمفاوية في الشبكية والجسم الزجاجي. توفر الطريقة القدرة على استخراج الحمض النووي بشكل متزامن من المكون الخلوي للعينة أو حجزه للاختبار الإضافي.

Abstract

يمثل سرطان الغدد الليمفاوية الشبكية والجسم الزجاجي (VRL) سرطان الغدد الليمفاوية العدواني ، وغالبا ما يصنف على أنه سرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية الكبيرة المنتشرة في الجهاز العصبي المركزي الأساسي. لتشخيص VRL ، يتم جمع عينات مثل الفكاهة الزجاجية ، ومؤخرا ، الفكاهة المائية. يشمل الاختبار التشخيصي ل VRL على هذه العينات علم الخلايا وقياس التدفق الخلوي والاختبار الجزيئي. ومع ذلك ، فإن كل من علم الأمراض الخلوي وقياس التدفق الخلوي ، إلى جانب الاختبار الجزيئي باستخدام الحمض النووي الخلوي ، يستلزم خلايا كاملة سليمة. يكمن التحدي في حقيقة أن الفكاهة الزجاجية والمائية عادة ما يكون لها خلوية منخفضة ، ويتم تدمير العديد من الخلايا أثناء الجمع والتخزين والمعالجة. علاوة على ذلك ، تشكل هذه العينات صعوبات إضافية للاختبار الجزيئي بسبب اللزوجة العالية للفكاهة الزجاجية وانخفاض حجم كل من الفكاهة الزجاجية والمائية. تقترح هذه الدراسة طريقة لاستخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا من العينات الزجاجية والمائية. يكمل هذا النهج استخراج الحمض النووي الخلوي أو يسمح باستخدام المكون الخلوي لهذه العينات في طرق التشخيص الأخرى ، بما في ذلك علم الخلايا وقياس التدفق الخلوي.

Introduction

سرطان الغدد الليمفاوية الشبكية والجسم الزجاجي (VRL) هو سرطان الغدد الليمفاوية العدواني المرتبط بسرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية الكبيرة المنتشرة في الجهاز العصبي المركزي^{الأولي 1،2،3}. عادة ما يكون VRL قاتلا بسبب تورطه في الجهاز العصبي المركزي ^1,2. على الرغم من ندرته^1,4 ، إلا أن VRL غالبا ما يظهر بأعراض مشابهة لالتهاب القزحية الخلفي وأمراض الشبكية والجسم الزجاجي الأخرى ^4,5. وبالتالي ، فإن المرضى ا....

Protocol

يتبع البروتوكول الحالي إرشادات الرعاية البشرية وبموافقة مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) بجامعة ميشيغان. تم الحصول على تنازل عن الموافقة المستنيرة لهذا من IRB. لا توجد معايير إدراج أو استبعاد ذات صلة للمرضى المعنيين.

1. فصل المكونات الخلوية والخالية من الخلايا

ملاحظة: يمكن استلام ثلاثة أنواع من العينات للاختبار التشخيصي VRL: الجسم الزجاجي (غير مخفف ؛ سائل من استئصال الزجاجية تم جمعه قبل بدء التسريب) ، الجسم الزجاجي المخفف داخل كيس كاسيت (الشكل 1) ، والخلط المائي (سائل من الغرفة الأمامية للعين).

1. بالنسبة للسائل الزجاجي غير المخفف ، وهو لزج جدا ، قم بتخفيفه باستخد....

النتائج

تم إجراء طرق الاستخراج هذه على عدد محدود من الحالات لضمان العائد الكافي وقابلية التضخيم للحمض النووي الخالي من الخلايا مقارنة بالحمض النووي الخلوي من العينات الزجاجية (أربعة) والمائية (أربعة). من هذه العينات ، تتشابه إنتاجية الحمض النووي من المكون الخالي من الخلايا لهذه السوائل مع تلك الم.......

Discussion

سرطان الغدد الليمفاوية الشبكية والجسم الزجاجي (VRL) هو سرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية الكبيرة^{العدوانية 1}،^2،3 التي يمكن أن تحاكي أعراضها أمراض الشبكية والجسم الزجاجي الأخرى ^4,5. أصبح الاختبار الجزيئي .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-Propanol (Isopropanol)	Fischer	A415-500
DNA Clean & Concentrator-10	Zymo Research	D4011
DNA Clean & Concentrator-5	Zymo Research	D4003
Gentra Puregene Cell Lysis Solution	Qiagen	158906
Gentra Puregene DNA Hydration Solution	Qiagen	158916
Gentra Puregene Protein Precipitation Solution	Qiagen	158912
Phosphate Buffered Saline (PBS)	Sigma	P-4417
Quick-DNA Urine Kit	Zymo Research	D3061	Conditioning buffer; also includes clearing beads, Proteinase K and spin columns
Ultrapure Glycogen, 20 µg/µL (20 mg/mL)	Thermo Fisher/Invitrogen	10814010