Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь налажена процедура извлечения внеклеточной ДНК из стекловидного тела и водянистой влаги для проведения молекулярных исследований для диагностики витреоретинальной лимфомы. Метод позволяет одновременно извлекать ДНК из клеточного компонента образца или резервировать ее для вспомогательного тестирования.

Аннотация

Витреоретинальная лимфома (VRL) представляет собой агрессивную лимфому, часто классифицируемую как первичная диффузная В-крупноклеточная лимфома центральной нервной системы. Для диагностики VRL собираются такие образцы, как стекловидное тело и, в последнее время, водянистая влага. Диагностическое тестирование этих образцов на VRL включает цитологию, проточную цитометрию и молекулярное тестирование. Тем не менее, как цитопатология, так и проточная цитометрия, наряду с молекулярным тестированием с использованием клеточной ДНК, требуют неповрежденных цельных клеток. Проблема заключается в том, что стекловидное тело и водянистая влага, как правило, имеют низкую клеточность, и многие клетки разрушаются во время сбора, хранения и обработки. Кроме того, эти образцы представляют дополнительные трудности для молекулярного тестирования из-за высокой вязкости стекловидного тела и малого объема как стекловидного, так и водянистого влаги. В данном исследовании предложен метод извлечения внеклеточной ДНК из стекловидных и водных образцов. Этот подход дополняет выделение клеточной ДНК или позволяет использовать клеточный компонент этих образцов для других методов диагностики, включая цитологию и проточную цитометрию.

Введение

Витреоретинальная лимфома (VRL) – агрессивная лимфома, ассоциированная с первичной диффузной В-крупноклеточной лимфомой 1,2,3 в центральной нервной системе. VRL обычно приводит к летальному исходу из-за поражения центральной нервной системы 1,2. Несмотря на редкость1,4, VRL часто проявляется симптомами, сходными с задним увеитом и другими витреоретинальными заболеваниями 4,5. Следовательно, пациентам с....

протокол

Настоящий протокол соответствует руководящим принципам по уходу за людьми и одобрен институциональным наблюдательным советом (IRB) Мичиганского университета. На это было получено разрешение IRB об отказе от информированного согласия. Не существует соответствующих критериев включения или исключения пациентов, участвующих в исследовании.

1. Разделение клеточных и бесклеточных компонентов

ПРИМЕЧАНИЕ: Для диагностического исследования VRL можно получить три типа образцов: стекловидное тело (неразбавленное; жидкость от витрэктомии, собранная до начала инфузии), разбавленное стекловидное тело в кассетном....

Результаты

Эти методы экстракции были выполнены в ограниченном числе случаев для обеспечения адекватного выхода и амплифицируемости внеклеточной ДНК по сравнению с клеточной ДНК из стекловидного (четыре) и водного (четыре) образцов. Из этих образцов выход ДНК из бесклеточного компонента этих жи?.......

Обсуждение

Витреоретинальная лимфома (VRL) представляет собой агрессивную крупноклеточную В-клеточную лимфому 1,2,3, симптомы которой могут имитировать другие витреоретинальные заболевания 4,5. Молекулярное тестиров.......

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Тимоти Дэниелс (Timothy Daniels), MLS (ASCP), MB, QLS, и Хельмут Вайгелин (Helmut Weigelin), MLS (ASCP), сыграли важную роль в создании этого метода экстракции в нашей лаборатории.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
2-Propanol (Isopropanol)FischerA415-500
DNA Clean & Concentrator-10Zymo ResearchD4011
DNA Clean & Concentrator-5Zymo ResearchD4003
Gentra Puregene Cell Lysis SolutionQiagen158906
Gentra Puregene DNA Hydration SolutionQiagen158916
Gentra Puregene Protein Precipitation SolutionQiagen158912
Phosphate Buffered Saline (PBS)SigmaP-4417
Quick-DNA Urine KitZymo ResearchD3061Conditioning buffer; also includes clearing beads, Proteinase K and spin columns
Ultrapure Glycogen, 20 µg/µL (20 mg/mL)Thermo Fisher/Invitrogen10814010

Ссылки

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены