توفر هذه الدراسة بيانات تجريبية لعلاج اعتلال الكلية بالغلوبولين المناعي A (IgAN) باستخدام Dioscin (DIO) ، المكون النشط ل Dioscoreae Nipponicae Rhizoma (DNR) ، ونموذجا لدراسة تأثيرات الأدوية العشبية والآليات الأساسية في الجسم الحي وفي المختبر.
تحدث الزيادة في IgA1 (Gd-IgA1) الذي يعاني من نقص الجالاكتوز المنتشر بسبب التنشيط المفرط للخلايا الإفرازية الإيجابية IgA في عملية الاستجابات المناعية المخاطية ، وهو رابط مهم في التسبب في اعتلال الكلية IgA (IgAN). رقعة باير، المكان البارز الذي تتحول فيه الخلايا الليمفاوية البائية إلى خلايا بلازمية تفرز IgA، هي المصدر الرئيسي للغلوبولين المناعي A. بالإضافة إلى ذلك ، يرتبط التعبير السفلي للنواة 1β-1،3-galactosyltransferase (C1GalT1) ومرافقه الجزيئي ، المرافق الجزيئي الخاص ب C1GalT1 (Cosmc) ، بالجليكوزيل غير الطبيعي ل IgA1 في مرضى IgAN. تظهر تجربتنا السريرية أن الأدوية العشبية Dioscoreae Nipponicae Rhizoma (DNR) يمكن أن تخفف من البيلة البروتينية والبيلة الدموية وتحسن وظائف الكلى لدى مرضى IgAN. Dioscin (DIO) هو أحد المكونات النشطة الرئيسية ل DNR ، والتي لديها أنشطة دوائية مختلفة. تستكشف هذه الدراسة آلية DIO المحتملة في علاج IgAN.تم إنشاء فأر نموذج IgAN عن طريق الحث المناعي المخاطي. تم تقسيم الفئران إلى مجموعات التحكم والنموذج و DIO. تم الكشف عن ترسب IgA الكبيبي في الفئران ، والتغيرات المرضية الكلوية ، وعلامات الخلايا البائية CD20 و CXCR5 التعبير في رقعة باير عن طريق التألق المناعي والكيمياء المناعية. بعد تحفيز عديد السكاريد الشحمي (LPS) ، تمت دراسة تأثيرات DIO على تكاثر خلايا DAKIKI ، وإفراز IgA و Gd-IgA1 ، و C1GalT1 ، وتعبير Cosmc بواسطة اختبار مجموعة عد الخلايا -8 (CCK-8) ، واختبار مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) ، وتفاعل البوليميراز الكمي المتسلسل في الوقت الفعلي (QRT-PCR) ، والنشاف الغربي (WB). في الدراسات في الجسم الحي ، تم تخفيف ترسب IgA المصحوب بتضخم كبيبي متوسط اللون وزيادة التعبير عن CD20 و CXCR5 في رقعة باير في ماوس نموذج IgAN بواسطة DIO. أظهرت الدراسات في المختبر أن 0.25 ميكروغرام / مل إلى 1.0 ميكروغرام / مل DIO يثبط تكاثر خلايا DAKIKI الناجم عن LPS ، وإفراز IgA و Gd-IgA1 ، وينظم تعبير mRNA والبروتين ل C1GalT1 و Cosmc. توضح هذه الدراسة أن DIO قد يقلل من إنتاج Gd-IgA1 عن طريق تثبيط التنشيط المفرط للخلايا المفرزة ل IgA وتنظيم تعبير C1GALT1 / Cosmc.
اعتلال الكلية IgA (IgAN) هو النوع الأكثر شيوعا من التهاب كبيبات الكلى الأولي ، والذي لا يوجد علاج محدد له ، ولا يزال سببا مهما لمرض الكلى في المرحلة النهائية1. على الرغم من أن التسبب في IgAN لا يزال غير مفهوم تماما ، إلا أن "فرضية الضربات المتعددة" مقبولة بشكل عام وتدعمها مجموعة كبيرة من الأدلة البحثية السريرية والتجريبية2. يتضمن التسبب في IgAN تنشيط الخلايا البائية وإنتاج IgA1 (Gd-IgA1) الذي يعاني من نقص الجالاكتوز 3. الزيادة في تعميم Gd-IgA1 بسبب الانتشار المفرط وتنشيط الخلايا التي تفرز IgA أثناء الاستجابة المناعية المخاطية هي رابط حاسم في التسبب في IgAN4،5،6. باعتبارها المكان المركزي لتكاثر وتفعيل تحويل النمط الظاهري للخلايا اللمفاوية B إلى خلايا إفراز IgA ، فإن رقعة باير هي المصدر الرئيسي لإفراز IgA ، وترتبط ارتباطا وثيقا بحدوث وتطور IgAN 7,8. بالإضافة إلى ذلك ، ارتبط تكاثر الخلايا المفرزة ل IgA1 ، وكذلك التعبير عن Core 1β-1،3-galactosyltransferase (C1GalT1) و C1GalT1 المرافقة الجزيئية الخاصة (Cosmc) ، بالجليكوزيل غير الطبيعي ل IgA1 ، والذي يسبب إنتاج GD-IgA1 في مرضى IgAN 6,9.
تقدمت الدراسة السريرية على علاج IgAN بالأدوية العشبية في السنوات الأخيرة. Yiqi Qingjie Formula هي صيغة أساسية لعلاج IgAN من قبل قسم أمراض الكلى في مستشفى Guang'anmen. وجدت الدراسة السابقة لمجموعتنا أن Gd-IgA1 انخفض في مصل مرضى IgAN بعد العلاج بصيغة Yiqi Qingjie. باعتبارها واحدة من أكثر الأعشاب استخداما في صيغة Yiqi Qingjie ، فإن Dioscoreae Nipponicae Rhizoma (DNR) هي جذمور مجفف من Dioscorea Nipponica Makino ، والذي له وظائف مختلفة مثل تنظيم المناعة ، وقمع الالتهاب ، وتخفيف السعال والربو10,11. عالج العديد من العلماء IgAN مع DNR وحققوا نتائج جيدة12،13،14. باعتباره العنصر النشط الرئيسي في DNR15 ، يقلل Dioscin (DIO) من حمض اليوريك ، ويمنع التليف ، ويمنع الاستجابة الالتهابية ، والإجهاد المضاد للأكسدة16,17. لذلك ، قد يكون لدى DIO آلية عمل جديدة لمنع الإفراز الخلوي ل Gd-IgA1 المفرط وممارسة تأثيرات محددة لحماية الكلى. ومع ذلك ، لم يتم الإبلاغ عن أي دراسة حول آلية عمل DIO لعلاج IgAN.
لاستكشاف الآلية العلاجية المحتملة ل DIO على IgAN وتوفير طريقة جديدة لعلاج IgAN ، أجرينا تجارب للتأثيرات العلاجية ل DIO على IgAN في الجسم الحي وفي المختبر.
وافقت لجنة الأخلاقيات في مستشفى جوانجانمن على هذه التجربة (رقم الموافقة الأخلاقية للتجربة على: IACUC-GAMH-2023-003).
1. تحضير الفئران للإجراء التجريبي
2. التحليل النسيجي
3. التحليل الكيميائي المناعي لرقعة باير
4. التألق المناعي الكلوي IgA
5. ثقافة الخلية
6. مقايسات السمية الخلوية LDH لفحص التركيزات الآمنة ل DIO على خلايا DAKIKI الطبيعية
7. مقايسة CCK-8 للكشف عن تأثير DIO على تكاثر خلايا DAKIKI
8. ELISA للكشف عن تأثير DIO على إفراز IgA و Gd-IgA1 بواسطة خلايا DAKIKI
9.qRT-PCR للكشف عن تأثير DIO على مستويات C1GALT1 و Cosmc mRNA في خلايا DAKIKI
10. النشاف الغربي لفحص تأثير DIO على التعبير عن بروتينات C1GALT1 و Cosmc في خلايا DAKIKI
11. التحليل الإحصائي
تأثير DIO على أنسجة الكلى في نموذج الفئران IgAN
بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، كان لدى نموذج الفئران IgAN الناجم عن المناعة المخاطية (مجموعة النموذج) زيادة كبيرة في البيلة البروتينية (الشكل التكميلي 2) ، وكان ترسب IgA مرئيا في المنطقة المتوسطة ، وتم توزيع التألق بشكل موحد في مجموعات في جميع أنحاء المنطقة المتوسطة بأكملها (الشكل 1 أ) ، وأظهر تلطيخ PAS للأنسجة الكلوية تكاثر الخلايا المتوسطة وتضخم اللحمة (الشكل 1 ب)، والتي تم تخفيضها في مجموعة DIO gavage (مجموعة DIO).
تأثير DIO على الخلايا الليمفاوية B في رقعة باير
رقعة باير هي الموقع الرئيسي لتحويل الخلايا الليمفاوية البائية إلى خلايا تفرز IgA. أخذنا رقعة باير ككائن بحثي لمراقبة تأثير DIO على الخلايا الليمفاوية البائية من خلال الكشف عن تعبير علامات الخلايا البائية CD20 و CXCR5. أظهرت نتائج الكيمياء الهيستولوجية المناعية أن التعبير عن CD20 و CXCR5 كان أعلى بكثير في مجموعة النموذج مقارنة بالمجموعة الضابطة. يمكن أن يمنع DIO التعبير عن العلامات الجزيئية المذكورة أعلاه (الشكل 2A ، B).
نطاق التركيز الآمن ل DIO على خلايا DAKIKI
LDH هو علامة على سلامة غشاء البلازما ومؤشر على موت الخلايا ، مع ارتفاع معدلات إطلاق LDH مما يشير إلى تلف الخلايا الأكثر حدة. تم استخدام مقايسة إطلاق LDH لتحديد نطاق التركيز الآمن ل DIO. تم تحديد الحد الأقصى للتركيز الآمن ل DIO من خلال معدل إطلاق LDH أقل من 10٪. أظهرت النتائج (الشكل 3) عدم وجود سمية خلوية كبيرة ناتجة عن DIO بتركيزات من 0.25 إلى 1.0 ميكروغرام / مل. لذلك ، استخدمت الدراسة التالية 0.25 و 0.5 و 1.0 ميكروغرام / مل DIO كمستوى الجرعات.
آثار DIO على تكاثر خلايا داكيكي
أظهرت النتائج التجريبية (الشكل 4) أنه بالمقارنة مع مجموعة النموذج (المجموعة المحفزة LPS) ، قام DIO بتثبيط تكاثر خلايا DAKIKI التي يسببها LPS بطريقة تعتمد على التركيز. أدى DIO بتركيزات 0.5 و 1.0 ميكروغرام / مل إلى تثبيط تكاثر خلايا داكيكي التي يسببها LPS بشكل كبير (P < 0.01).
آثار DIO على الوظيفة الإفرازية لخلايا DAKIKI
ترتبط مستويات Gd-IgA1 ارتباطا وثيقا بالعملية المرضية ل IgAN، ويتم اختبار إجمالي IgA معا كمؤشر لوظيفة الإفراز الخلوي. تم استخدام اختبار ELISA للكشف عن محتوى IgA و Gd-IgA1 في المادة الطافية لمزرعة خلية DAKIKI. أظهرت النتائج (الشكل 5A ، B) أن خلايا DAKIKI التي حفزها LPS تفرز المزيد من IgA مقارنة بالمجموعة الضابطة (P < 0.01). وبالمقارنة ، قام DIO بتثبيط خلايا DAKIKI بشكل كبير من إفراز IgA (P < 0.01) بطريقة تعتمد على التركيز. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، فإن خلايا DAKIKI التي تم تحفيزها بواسطة LPS تفرز المزيد من Gd-IgA1 مع ميل إحصائي (P < 0.10) ، ويثبط DIO إفراز Gd-IgA1 من خلايا DAKIKI المحفزة ب LPS بطريقة تعتمد على التركيز (P < 0.05 و P < 0.01) ، من بينها DIO عند 1.0 ميكروغرام / مل يثبط بشكل كبير إفراز Gd-IgA1 بمعدل تثبيط 25٪.
آلية DIO تمنع إفراز Gd-IgA1 بواسطة خلايا DAKIKI
لمزيد من التحقيق في الآلية المحتملة لتثبيط DIO إفراز Gd-IgA1 المفرط بواسطة خلايا DAKIKI ، تم الكشف عن مستويات C1GALT1 الترانسفيراز الغليكوزيلاتي وبروتين chaperone Cosmc mRNA في خلايا DAKIKI بواسطة qRT-PCR ، وأظهرت النتائج (الشكل 6A ، B) أن تعبير mRNA النسبي ل C1GALT1 و Cosmc تم تنظيمه في خلايا DAKIKI في مجموعة النموذج مقارنة بمجموعة التحكم (P < 0.01). قام DIO بتنظيم تعبير mRNA النسبي ل C1GALT1 و Cosmc بدرجات مختلفة مقارنة بمجموعة النماذج ، حيث قام DIO 1.0 μg / mL بتنظيم تعبير mRNA النسبي ل C1GALT1 و Cosmc (P < 0.05).
في الوقت نفسه ، تم استخدام طريقة WB للكشف عن تأثير DIO على التعبير البروتيني ل C1GALT1 و Cosmc في خلايا DAKIKI. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، انخفض تعبير البروتين ل C1GALT1 و Cosmc في خلايا DAKIKI في المجموعة النموذجية بشكل واضح (P < 0.05). بالمقارنة مع مجموعة النماذج ، تم تنظيم التعبير البروتيني ل C1GALT1 و Cosmc بعد تدخل DIO. تم تنظيم التعبير البروتيني ل C1GALT1 و Cosmc بشكل كبير بواسطة DIO بتركيز 1.0 ميكروغرام / مل (P < 0.05) (الشكل 7A-C).
الشكل 1: التشريح المرضي للكلى. أ: مجهر التألق المناعي. تم تلطيخ أقسام الكلى من الفئران في كل مجموعة مع مكافحة IgA (الأخضر) و DAPI (الأزرق). شريط مقياس الصورة أعلاه = 200 ميكرومتر. شريط مقياس الصورة أدناه = 50 ميكرومتر. ن = 6 لكل مجموعة. (ب) صور تمثيلية لتلطيخ PAS لأنسجة الكلى من الفئران في مجموعات التحكم والنموذج و DIO. شريط المقياس = 30 ميكرومتر. يوضح السهم المتجه لأسفل الخلايا الوسيطة، ويوضح السهم المتجه لأعلى الستروما. شريط المقياس = 30 ميكرومتر. ن = 6 لكل مجموعة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: تأثير DIO على علامات الخلايا الليمفاوية B. أ: التعبير عن CD20 في رقعة باير. شريط المقياس = 200 ميكرومتر. ن = 6 لكل مجموعة. (ب) تعبير CXCR5 في رقعة باير. توجد أشرطة المقياس في الزاوية اليمنى السفلية من الصورة. شريط المقياس = 200 ميكرومتر. ن = 6 لكل مجموعة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. فحص التركيز الآمن ل DIO على خلايا DAKIKI. يتم التعبير عن القيم الإحصائية كمتوسط ± SD من ثلاث تجارب مستقلة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4. تركيزات مختلفة من DIO تؤثر على تكاثر خلايا DAKIKI. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ±SD. مقارنة مع المجموعة الضابطة ، ** P < 0.01 ؛ مقارنة بمجموعة النماذج ، #P < 0.05' ##P < 0.01 ؛ تكررت نتائج جميع التجارب ثلاث مرات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 5. يمنع DIO إفراز IgA و Gd-IgA1 بواسطة خلايا DAKIKI. (أ) اكتشفت طريقة ELISA تعبير IgA في كل مجموعة. (ب) اكتشفت طريقة ELISA تعبير Gd-IgA1 في كل مجموعة. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ± SD. مقارنة مع المجموعة الضابطة ، ** P < 0.01 ؛ مقارنة بمجموعة النماذج ، #P < 0.05 ، ##P < 0.01 ؛ تم تكرار جميع النتائج التجريبية ثلاث مرات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6. تمنع آلية DIO إفراز Gd-IgA1 المفرط بواسطة خلايا DAKIKI. (A) اكتشف QRT-PCR تعبير mRNA ل C1GALT1. (B) اكتشف QRT-PCR تعبير mRNA ل Cosmc. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ± SD. مقارنة بالمجموعة الضابطة ، ** P<0.01 ؛ مقارنة بمجموعة النماذج ، #P < 0.05 ، ##P < 0.01 ؛ تم تكرار جميع النتائج التجريبية ثلاث مرات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 7. يؤثر DIO على تعبير البروتين في C1GALT1 و Cosmc في خلايا DAKIKI. (أ) تحقق البنك الدولي من التنظيم الأعلى لتعبير البروتين في C1GALT1 و Cosmc بواسطة DIO. (ب) أجري تحليل شبه كمي لتعبير C1GALT1 باستخدام الصورة J. (ج) التحليل شبه الكمي لتعبير Cosmc باستخدام الصورة J. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ±SD. مقارنة مع المجموعة الضابطة ، * P < 0.05 ؛ بالمقارنة مع مجموعة النماذج ، #P < 0.05 ، ##P < 0.01 ، تم تكرار جميع النتائج التجريبية ثلاث مرات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل التكميلي 1. مخطط النموذج في الجسم الحي. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الرقم.
الشكل التكميلي 2. التغييرات في بروتينية. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ± SD. ن = 6 لكل مجموعة. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الرقم.
السمة المرضية المميزة ل IgAN هي ترسب المجمعات المناعية المحتوية على IgA1 و GD-IgA1 في المنطقة المتوسطة من الكبيبة21,22. الحد من تكوين المجمعات المناعية يمكن أن يقلل من إصابة الكلى ويخفف من الأعراض السريرية ل IgAN. في تجربة في الجسم الحي ، درسنا الآثار العلاجية ل DIO على IgAN، ووجدنا أن DIO يمكن أن يقلل من ترسب IgA في كلية الفئران النموذجية IgAN. ثبت أن تراكم الخلايا التي تفرز IgA في الكلى يرتبط بالتسبب في IgAN23. كموقع مهم لتكاثر وتنشيط الخلايا الليمفاوية B ، تعد رقعة باير مصدرا مهما للخلايا التي تفرز IgA ، لذلك قمنا بفحص التعبير عن علامات الخلايا الليمفاوية B (CD20 ، CXCR5) في رقعة باير ووجدنا أن DIO يمكن أن يمنع التعبير عن الخلايا الليمفاوية B في رقعة باير لنموذج الفئران IgAN. يمكن أن توفر هذه النتائج التجريبية أساسا لتطبيق DIO في علاج IgAN.
أجرينا التجارب التالية في المختبر لمزيد من التحقيق في آلية عمل DIO على IgAN. أولا ، لقد ثبت سابقا أن DAKIKI ، وهو خط خلايا بائية مخلد EBV يفرز IgA1 ، جزء منه هو GD-IgA124 ، مثالي للبحث في المختبر عن آلية عمل الدواء على IgAN. اخترنا خلايا DAKIKI للتحقيق في الآلية الجزيئية ل DIO في علاج IgAN. بالإضافة إلى ذلك ، تلعب الاستجابة المناعية الالتهابية المخاطية دورا أساسيا في التسبب في IgAN. كما ذكرنا أعلاه ، نستخدم LPS لتحفيز خلايا DAKIKI ، والتي يمكن أن تطلق عوامل مؤيدة للالتهابات وتتوسط الاستجابات الالتهابية ، والتي يمكن أن تحاكي بشكل أفضل آلية الاستجابات المناعية المخاطية في IgAN. قد يساعد النموذج الخلوي في المختبر في التحقيق في إمكانية وآلية الأدوية الأخرى لعلاج IgAN. أظهرت النتائج أن DIO يثبط تكاثر خلايا DAKIKI التي يحفزها LPS بطريقة تعتمد على التركيز. يمكن أن يمنع DIO إفراز IgA و Gd-IgA1 في خلايا DAKIKI الناتجة عن تحفيز LPS وتنظيم التعبير عن mRNA وبروتين C1GalT1 ومرافقه Cosmc في خلايا DAKIKI ، مما يشير إلى أن DIO يمكن أن يقلل من إفراز Gd-IgA1 عن طريق تنظيم تعبير C1GALT1 / Cosmc وبالتالي يمنع التنشيط المفرط لخلايا DAKIKI.
يجب ملاحظة الخطوات الرئيسية أثناء الإجراءات التجريبية. تركيز Gd-IgA1 في طافية خلية DAKIKI ليس ضمن نطاق الكشف عن مجموعة ELISA (1.56 ~ 100 نانوغرام / مل) ، ويجب طرد المادة الطافية المجمعة بواسطة أنبوب ترشيح فائق للحصول على Gd-IgA1 المركز. تأكد أيضا من أن حجم المادة الطافية التي تبدأ من كل مجموعة هو نفسه وأن الحجم النهائي للتركيز الذي تم الحصول عليه بعد الترشيح الفائق هو نفسه.
في هذه الدراسة ، استخدمنا طرقا في المختبر وفي الجسم الحي في وقت واحد ، والتي يمكن أن تدعم بعضها البعض في التأثيرات الدوائية وتقدم مثالا لدراسة تأثيرات وآلياتها في طب الأعشاب. يمكن تحسين بعض الأشياء في هذا البروتوكول. أولا ، لم نكتشف تركيزات الدم في مجموعة DIO gavage للفئران. لذلك ، لا يتم استخدام تركيز DIO المكافئ لتركيزات الدم في التجارب المختبرية . ثانيا ، تم التحقيق فقط في مونومر DIO ، المكون النشط ل DNR ؛ لا تزال تأثيرات المكونات الأخرى ل DNR على IgAN بحاجة إلى مزيد من الدراسة.
في الختام ، توفر هذه الدراسة أساسا تجريبيا لعلاج IgAN باستخدام DIO ، المكون النشط ل DNR. أنشأت هذه الدراسة نموذجا مرضيا خلويا ل IgAN من خلال محاكاة الاستجابة المناعية المخاطية ل IgAN في المختبر وفي الجسم الحي. يعطي فكرة جديدة لدراسة الطب الصيني التقليدي لمنع وعلاج IgAN.
ويعلن صاحبا البلاغ أنه ليس لهما مصالح مالية متنافسة.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81973675).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Anti-CD20/MS4A1 Antibody | Boster Biotechnology Company | A03780-3 | |
Antifade mounting medium | Beyotime, Shanghai, China | P0128S | |
Balb/c mice | Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | 110322220101424000 | |
blocking serum | Solarbio, Beijing, China | SL038 | |
Bovine gamma globulin | ShangHai YuanYe Biotechnology Company | S12031 | |
C1GALT1 polyclonal antibody | Proteintech Group, Inc,USA | 27569-1-AP | |
Citrate antigen retrieval solution(50×) | Phygene Biotechnology Company | PH0422 | |
COSMC polyclonal antibody | Proteintech Group, Inc,USA | 19254-1-AP | |
Cytotoxiciy detection kit | Roche Company | 4744926001 | |
Dako REAL EnVision detection system, Peroxidase/DAB+ | Dako | K5007 | |
DAPI | Invitrogen | D1306 | |
Dioscin | National Institute For Food and Drug Control | 111707-201703 | |
DIO tablets | Chengdu No 1 Pharmaceutical Co. Ltd. | H51023866 | |
ECL working solution | Merck Biotechnology, Inc | WBKLS0100 | |
Enhanced cell counting kit-8 | Beyotime, Shanghai, China | C0043 | |
Fasking one-step removal of gene cDNA first-strand synthesis premix | TIANGEN,Beijing, China | KR118-02 | |
Glycogen Periodic acid Schiff (PAS) stain kit | BaSO Biotechnology Company | BA4080A | |
Goat anti-mouse IgA-AF488 | SouthernBiotech | 1040-30 | |
Goat anti-rabbit IgG antibody (H+L), HRP conjugated | BeiJing Bioss Biotechnology Company | BS-0295G-HRP | |
Human Gd-IgA1 ELISA kit | IBL | 27600 | |
Human IgA ELISA kit | MultiSciences (LiankeBio) | 70-EK174-96 | |
Pierce BCA protein assay kit | Thermo Scientific | 23227 | |
PMSF solution | Beyotime, Shanghai, China | ST507 | |
Proteinase K | Phygene Biotechnology Company | PH1521 | |
Rabbit anti-CXCR5 polyclonal antibody | BeiJing Bioss Biotechnology Company | bs-23570R | |
RIPA lysis buffer | Beyotime, Shanghai, China | P0013B | |
RNAsimple total RNA extraction kit | TIANGEN,Beijing, China | DP419 | |
RPMI Medium 1640 | Solarbio, Beijing, China | 31800 | |
Super-Bradford protein assay kit | CWBIO, Beijing, China | CW0013 | |
Triton X-100 | Beyotime, Shanghai, China | ST795 | |
β-Actin Rabbit mAb | Abclonal, Wuhan, China | AC026 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved