A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
توضح هذه المقالة بروتوكولا لاستخراج الحمض النووي للدياتوم باستخدام مجموعة استخراج الحمض النووي الشائعة المعدلة.
اختبار الدياتوم هو وسيلة مساعدة أساسية في ممارسة الطب الشرعي لتحديد ما إذا كانت الجثة قد غرقت في الماء واستنتاج موقع الغرق. اختبار الدياتوم هو أيضا محتوى بحثي مهم في مجال البيئة والعوالق. تعد تقنية اختبار البيولوجيا الجزيئية للدياتوم ، والتي تركز على الحمض النووي للدياتوم ككائن بحثي أساسي ، طريقة جديدة لاختبار الدياتوم. استخراج الحمض النووي للدياتوم هو أساس الاختبار الجزيئي للدياتوم. في الوقت الحاضر ، تعتبر المجموعات المستخدمة بشكل شائع لاستخراج الحمض النووي للدياتوم باهظة الثمن ، مما يزيد من تكلفة إجراء البحوث ذات الصلة. قام مختبرنا بتحسين مجموعة الاستخراج السريع للحمض النووي لجينوم الدم الكامل العام وحصل على تأثير استخراج الحمض النووي للدياتوم بشكل مرض ، وبالتالي توفير حل بديل اقتصادي وبأسعار معقولة لاستخراج الحمض النووي يعتمد على الخرز الزجاجي للأبحاث ذات الصلة. يمكن أن يلبي الحمض النووي للدياتوم المستخرج باستخدام هذا البروتوكول العديد من التطبيقات النهائية ، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل والتسلسل.
في ممارسة الطب الشرعي ، يعد تحديد ما إذا كانت الجثة التي تم العثور عليها في الماء تغرق أو ألقيت في الماء بعد الوفاة أمرا ضروريا للحل المناسب للقضية1. كما أنها واحدة من القضايا الصعبة التي تحتاج إلى حل عاجل في ممارسة الطبالشرعي 2. الدياتومات وفيرة في البيئة الطبيعية (خاصة في الماء)3,4. في عملية الغرق ، بسبب نقص الأكسجة والاستجابة للإجهاد ، سيكون لدى الناس حركات تنفس مكثفة ويستنشقون كمية كبيرة من سائل الغرق. لذلك ، تدخل الدياتومات الموجودة في الماء إلى الرئة بسائل الغرق ، ويمكن لبعض الدياتومات أن تدخل الدورة الدموية من خلال الحاجز السنخي الشعري وتنتشر إلى الأعضاء ا....
تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة هاينان الطبية. لا تعتبر عينات الأنسجة المستخدمة في هذه الدراسة دراسات تشمل أشخاصا. تم الحصول على هذه العينات لغرض التشخيص المرضي الشرعي ، وتم استخدام الباقي لاستخراج الحمض النووي للدياتوم في هذه التجربة. لا يمكن للباحثين تحديد الأفراد بسهولة للحصول على موافقة مستنيرة من أصحاب المصلحة المعنيين.
ملاحظة: لضمان التطبيق العام لطريقة البحث المبلغ عنها في هذه التجربة ، اتبعت هذه التجربة بشكل أساسي تعليمات التشغيل الخاصة بالمجموعة المستخدمة ، وتم تعديل بعض الخطوات فقط. أخذت عينات المياه المستخدمة في هذه التجربة عشوائيا من البرك القريبة من المختبر (الشكل التكميلي 1 أ). في هذ....
نظرا لأن محلول الحمض النووي المستخرج بواسطة طريقة استخراج الحمض النووي المستخدمة حاليا يحتوي على جميع مكونات الحمض النووي من مصادر مختلفة في العينة ، فإن الحمض النووي الذي تم الحصول عليه بواسطة هذا البروتوكول لم يكن استثناء. لذلك ، لم يكن محلول الحمض النووي مجرد محلول للحمض النووي الجيني.......
خلايا المشطورة محمية بجدران الخلايا السيليسية الصلبة17 ، ويجب تدمير هذا الهيكل لاستخراج الحمض النووي للدياتوم. المجموعات العادية لا تدمر بسهولة القشرة السيليسية للدياتومات ؛ وبالتالي من الصعب استخراج الحمض النووي للدياتوم21 بنجاح. قام مختبرنا بتحسين مجموعة است?.......
ويعلن صاحبا البلاغ أنه ليس لهما مصالح مالية متنافسة.
يتم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82060341،81560304) ومشروع البحث العلمي لمنصة الابتكار الأكاديمي في مقاطعة هاينان (YSPTZX202134).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Binding Buffer | BioTeke | B010006022 | rapidly lysing cells |
ChemoHS qPCR Mix | Monad | 00007547-120506 | qPCR Mix |
D2000 DNA ladder | Real-Times(Beijing) Biotechnology | RTM415 | Measure the position of electrophoretic bands |
D512 | Taihe Biotechnology | TW21109196 | forword primer |
D978 | Taihe Biotechnology | TW21109197 | reverse primer |
Elution buffer | BioTeke | B010006022 | A low-salt elution buffer washes off the DNA |
Glass bead | Yingxu Chemical Machinery(Shanghai) | 70181000 | Special glass beads for dispersing and grinding |
Import adsorption column | BioTeke | B2008006022 | Adsorption column with silica matrix membrane |
Inhibitor Removal Buffer | BioTeke | B010006022 | Removal of Inhibitors in DNA Extraction |
Isopropanol | BioTeke | B010006022 | Precipitate or isolate DNA |
MIX-30S Mini Mixer | Miulab | MUC881206 | oscillatory action |
Proteinase K | BioTeke | B010006022 | Inactivation of intracellular nucleases and other proteins |
Rotor-Gene Q 5plex HRM | Qiagen | R1116175 | real-time fluorescence quantification PCR |
Speed Micro-Centrifuge | Scilogex | 9013001121 | centrifuge |
Tanon 3500R Gel Imager | Tanon | 16T5553R-455 | gel imaging |
Taq Mix Pro | Monad | 00007808-140534 | PCR Mix |
Thermo Cycler | Zhuhai Hema | VRB020A | ordinary PCR |
Wash Buffer | BioTeke | B010006022 | Remove impurities such as cell metabolites |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved