JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يظهر هنا بروتوكول لاختبار التعب الميكانيكي في حالة خلايا الدم الحمراء البشرية باستخدام نهج التشوه الكهربائي المعدل السعة. يمكن استخدام هذا النهج العام لقياس التغيرات المنهجية في الخصائص المورفولوجية والميكانيكية الحيوية للخلايا البيولوجية في تعليق من التشوه الدوري.

Abstract

تشتهر خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) بتشوهها الملحوظ. يتعرضون مرارا وتكرارا لتشوه كبير عند المرور عبر دوران الأوعية الدقيقة. يظهر انخفاض التشوه في كرات الدم الحمراء المسنة من الناحية الفسيولوجية. لا يمكن بسهولة استخدام التقنيات الحالية لقياس تشوه الخلايا لقياس التعب ، والتدهور التدريجي في أغشية الخلايا الناجم عن الأحمال الدورية. نقدم بروتوكولا لتقييم التدهور الميكانيكي في كرات الدم الحمراء من إجهادات القص الدورية باستخدام التشوه الكهربائي القائم على تعديل مفتاح إزاحة السعة (ASK) في قناة الموائع الدقيقة. باختصار ، يتم إثارة الأقطاب الكهربائية المتداخلة في قناة الموائع الدقيقة بتيار متناوب منخفض الجهد عند ترددات الراديو باستخدام مولد إشارة. تستجيب كرات الدم الحمراء المعلقة للمجال الكهربائي وتظهر رحلان كهربائي إيجابي (DEP) ، والذي ينقل الخلايا إلى حواف القطب. ثم تتمدد الخلايا بسبب القوى الكهربائية التي تمارس على نصفي الخليتين ، مما يؤدي إلى تمدد أحادي المحور ، يعرف باسم التشوه الكهربائي. يمكن تعديل مستوى إجهاد القص والتشوه الناتج بسهولة عن طريق تغيير سعة موجة الإثارة. وهذا يتيح تحديد كميات التشوه غير الخطي لكرات الدم الحمراء استجابة للتشوهات الصغيرة والكبيرة عند الإنتاجية العالية. يؤدي تعديل موجة الإثارة باستخدام إستراتيجية ASK إلى حدوث تشوه كهربائي دوري بمعدلات تحميل وترددات قابلة للبرمجة. هذا يوفر طريقة مريحة لتوصيف التعب كرات الدم الحمراء. يتيح نهج التشوه الكهربائي المعدل ASK الخاص بنا ، لأول مرة ، قياسا مباشرا لإجهاد كرات الدم الحمراء من الأحمال الدورية. يمكن استخدامه كأداة للاختبار الميكانيكي الحيوي العام ، لتحليل تشوه الخلايا والتعب في أنواع الخلايا الأخرى والظروف المرضية ، ويمكن أيضا دمجه مع استراتيجيات للتحكم في البيئة المكروية للخلايا ، مثل توتر الأكسجين والإشارات البيولوجية والكيميائية.

Introduction

خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) هي أكثر الخلايا تشوها في جسم الإنسان1. ترتبط قابليتها للتشوه ارتباطا مباشرا بوظائفها في حمل الأكسجين. تم العثور على انخفاض التشوه في كرات الدم الحمراء ليرتبط مع التسبب في العديد من اضطرابات كرات الدمالحمراء 2. قادتنا قياسات التشوه إلى فهم أفضل للأمراض المرتبطة بكرات الدم الحمراء3. يمكن أن يختلف العمر الطبيعي لكرات الدم الحمراء من 70 إلى 140 يوما4. لذلك ، من المهم قياس كيفية انخفاض قابليتها للتشوه جنبا إلى جنب مع عملية الشيخوخة ، على سبيل المثال ، سلوك التعب بسبب إجهادات القص الدورية3.

يعد قياس تشوه كرات الدم الحمراء عند الإنتاجية العالية أمرا صعبا بسبب قوى مقياس piconewton (~ 10-12 N) التي يتم تطبيقها على الخلايا الفردية. على مدى العقد الماضي ، تم تطوير العديد من التقنيات لقياس تشوه الخلايا5. يمكن إجراء قياسات تشوه كرات الدم الحمراء على مستوى الخلية الواحدة عن طريق شفط الماصة والملاقط البصرية ، بينما يتم إجراء التحليلات السائبة عن طريق قياس التدرج التناضحي. توفر تحليلات قياس كتكتاوات الدم وفرة من البيانات ، مما يوفر فرصة لتشخيص اضطرابات الدم 6,7. يمكن أيضا تحليل تشوه كرات الدم الحمراء باستخدام نظرية المرونة اللزجة بواسطة مجهر القوة الذرية للمسبار الغرواني. في هذه الطريقة ، يتم تطبيق التحليل الحسابي لتقدير معامل المرونة لكرات الدم الحمراء ، مع الأخذ في الاعتبار كل من الاستجابات المعتمدة على الوقت والحالة المستقرة. يمكن قياس تشوه كرات الدم الحمراء الفردية باستخدام طريقة صفيف الغرفة الدقيقة أحادية الخلية. تحلل هذه الطريقة كل خلية من خلال الغشاء وعلامات الفلورسنت الخلوية لتوفير معلومات عن تشوه كرات الدم الحمراء وتوزيع الخصائص الخلوية في مجموعات كرات الدم الحمراء المعقدة للكشف عن الاضطرابات الدموية8.

التعب هو عامل رئيسي في تدهور خصائص المواد الهندسية والمواد الحيوية. يتيح اختبار التعب إجراء تحليل كمي لسلامة وطول عمر الهيكل المعرض للتحميل الدوري. لطالما تم إعاقة تحليل التعب في الخلايا البيولوجية بسبب عدم وجود طريقة عامة وقابلة للتطبيق بسهولة وإنتاجية عالية وكمية لتنفيذ التشوه الدوري في أغشية الخلايا. هذا ممكن مع استخدام تعديل الإشارة الكهربائية وتقنيات التشوه الكهربائي المنفذة في بيئة الموائع الدقيقة. يتم تطبيق تقنية مفتاح إزاحة السعة (ASK) كتعديل رقمي من خلال تعديل مفتاح On-Off (OOK) في هذه المقالة. يشير مفهوم المفاتيح إلى إرسال الإشارات الرقمية عبر القناة ، الأمر الذي يتطلب إشارة حاملة موجة جيبية لتعمل9. يمكن ضبط أوقات التشغيل والإيقاف على قدم المساواة. تحت ON-keying ، تدخل كرات الدم الحمراء في حالة مشوهة أثناء تعرضها لقوة تشوه كهربائي خارجي (Fdep) 10 تم إنشاؤها بواسطة المجال الكهربائي غير المنتظم. تحت OFF-keying ، تكون كرات الدم الحمراء في حالة استرخاء. نلاحظ إجهاد كرات الدم الحمراء ، أي التدهور التدريجي في قدرتها على التمدد مع زيادة دورات التحميل. يمكن أن يوفر فقدان التشوه الناجم عن التعب في كرات الدم الحمراء نظرة ثاقبة على تلف الغشاء المتراكم أثناء الدورة الدموية ، مما يمكننا من إجراء مزيد من التحقيق في الروابط بين إجهاد الخلايا وحالات المرض.

نقدم هنا إجراءات خطوة بخطوة حول كيفية تنفيذ اختبار التعب لكرات الدم الحمراء في جهاز الموائع الدقيقة عبر التشوه الكهربائي المعدل ASK وإعدادات النظام مثل جهاز الموائع الدقيقة ، والتحميل الميكانيكي ، والتخيل المجهري لتوصيف التدهور التدريجي في التشوه الميكانيكي لكرات الدم الحمراء.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تم الحصول على الدم البشري الكامل غير المحدد تجاريا. وأجري العمل المتعلق بعينات الدم في مختبر من المستوى 2 للسلامة الأحيائية باستخدام البروتوكولات التي وافقت عليها اللجنة المؤسسية للسلامة الأحيائية في جامعة فلوريدا أتلانتيك.

1. إعداد جهاز الموائع الدقيقة

  1. قم بلصق رقاقة السيليكون الرئيسية SU-8 لتصميم قناة الموائع الدقيقة داخل طبق بتري بلاستيكي مقاس 14 سم وقم بتنظيفه بغاز N2 .
  2. تزن 60 جم من قاعدة polydimethylsiloxane (PDMS) و 6 جم من عامل معالجة PDMS في كوب ورقي. اخلطي الجزأين باستخدام ملعقة خشبية حتى يصبح الخليط أبيض غائم.
  3. صب خليط PDMS في طبق بتري البلاستيكي الذي يحتوي على رقاقة السيليكون. ضع طبق بتري في مجفف مفرغ مع محبس 3 اتجاهات. أدر صمام المحبس لتوصيل الفراغ بغرفة التجفيف لإزالة فقاعات الهواء من PDMS.
  4. أعد إدخال الهواء إلى حجرة التجفيف عن طريق ضبط صمام المحبس لتوصيل غرفة المجفف بالمحيط في حوالي 5 دقائق دورات. كرر حتى تتم إزالة جميع فقاعات الهواء من ميزات القنوات.
  5. ضع طبق بتري داخل فرن على حرارة 70 درجة مئوية لمدة 4 ساعات. بمجرد انقضاء الوقت ، قم بإزالة طبق بتري ، واتركه يبرد إلى درجة حرارة الغرفة ، وضعه على حصيرة تقطيع.
  6. باستخدام مشرط ، اقطع جزء PDMS فوق رقاقة السيليكون. ضع PDMS المقطوع بين ورقتي فيلم تغليف المختبر. تسهل الفجوة المتكونة بين المسافة البادئة للقناة الدقيقة والفيلم شبه الشفاف تحديد موقع قناة الموائع الدقيقة بالإضافة إلى مدخلها ومخرجها.
  7. باستخدام شفرة حلاقة ، قم بقطع قناة فردية من PDMS الكبير. قم بثقب مدخل 3 مم وفتحة مخرج 1.5 مم باستخدام لكمات الخزعة الخاصة بالحجمين (الشكل 1 أ).
  8. ضع القناة المثقوبة ، بحيث يكون جانب القناة متجها لأعلى ، على شريحة زجاجية نظيفة. ضع ركيزة زجاجية مقاس 20 مم × 15 مم تحتوي على أقطاب كهربائية متداخلة من أكسيد القصدير الإنديوم (ITO) ذات الأغشية الرقيقة على نفس الشريحة الزجاجية مع توجيه الأقطاب الكهربائية لأعلى.
  9. ضع الشريحة الزجاجية برفق مع PDMS والركيزة في منظف البلازما. أغلق صمام الغاز ، وقم بتشغيل مفتاح المضخة ، وانتظر 2 دقيقة للحصول على قراءة مستشعر من 600 - 800 mTorr.
  10. قم بتشغيل مفتاح الطاقة وانتظر 30 ثانية. أدر مقبض طاقة التردد اللاسلكي من منخفض إلى مرتفع وانتظر لمدة 1 دقيقة.
  11. بعد ذلك ، اعكس التسلسل عن طريق تدوير مقبض التردد اللاسلكي إلى المستوى المنخفض ، ومفتاح الطاقة إلى OFF ، ومفتاح المضخة إلى OFF ، وفتح صمام الغاز.
  12. مباشرة بعد فتح حجرة منظف البلازما ، ارفع وتدوير PDMS بحيث يكون جانب القناة متجها لأسفل (180 درجة). ضع القناة أعلى ركيزة ITO. بدأت عملية الترابط.
  13. باستخدام الملقط ، اضغط برفق على زوايا PDMS لمدة 3 ثوان تقريبا. تجنب الضغط على القناة نفسها.
    ملاحظة: تحدث عملية الترابط تلقائيا عند الاتصال الجسدي بين السطحين المعالجين.
  14. قم بتحميل وسيط التحضير في حقنة سعة 1 مل بإبرة 23 جرام. بلل القناة بعناية عن طريق إدخال الإبرة مباشرة في بئر المدخل ثم تحرير الوسيط. تعمل ببطء. لا تدخل فقاعات الهواء. احتضان لمدة 3 دقائق على الأقل.
  15. قم بإزالة الوسط الرئيسي باستخدام طرف ماصة 10 ميكرولتر. اغسل القناة بوسيط DEP 3 مرات عن طريق إدخال وسيط DEP في القناة. حافظ على القناة رطبة في جميع الأوقات.

2. اختبار لاعبا اساسيا

ملاحظة: تم تصميم تركيبات الاختبار باستخدام برنامج 3D CAD وتتضمن وحدة سكنية أساسية ووحدة علوية (الشكل 1B). بعد ذلك ، يتم تصنيعها باستخدام آلة طحن CNC ذات 3 محاور مع حد تسامح قياسي يبلغ حوالي ± يتم فحص أبعاد 0.005 بوصة من تركيبات الاختبار باستخدام الفرجار الإلكتروني (غير معروض). عقم لاعبا اساسيا غير مطلوب للاختبار الميكانيكي الحيوي في المختبر.

  1. أسلاك ما قبل اللحام في نهايات كوب اللحام لمجموعتين من موصلات المكبس الزنبركية.
  2. أدخل موصلات مكبس الزنبرك في الوحدة العلوية وقم بإنشاء رابطة دائمة عن طريق إضافة قطرة من غراء الإيبوكسي.

3. إعداد العازلة للعمل التشوه الكهربائي

  1. لتحضير وسط DEP ، قم بوزن 12.75 جم من السكروز و 0.45 جم من سكر العنب باستخدام الميزان.
  2. قم بإذابة كلا المساحيق في وعاء واحد يحتوي على 150 مل من الماء منزوع الأيونات (DI) و 3.5 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
  3. باستخدام جهاز اختبار الموصلية منخفضة المدى ، قم بقياس الموصلية وتأكد من أنها 0.04 ثانية / م (الشكل 2).
    ملاحظة: يمكن استخدام قيمة توصيل مختلفة ، والتي يمكن أن تغير علامة وحجم قوة DEP الناتجة11. ومع ذلك ، يتطلب التشوه الكهربائي قوة DEP موجبة.
  4. باستخدام مقياس الأسموزية ، تأكد من أن الأسمولية ضمن المعدل الطبيعي لبلازما الدم ، 275 إلى 295 mOsm / kg من الماء (الشكل 3). يحفظ في درجة حرارة 4 درجة مئوية. تم إعداد وسيط DEP الآن.
  5. في أنبوب سعة 15 مل ، قم بإذابة 0.5 جم من ألبومين مصل الأبقار (BSA) في 10 مل من وسط DEP. تخلط جيدا. تم الآن إعداد الوسيط الرئيسي للجهاز.

4. إعداد تعليق الخلية

  1. اغسل 20 ميكرولتر من الدم الكامل عن طريق الطرد المركزي للدم باستخدام 1 مل من PBS عند 268 × جم لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية.
  2. أعد تعليق كرات الدم الحمراء في 1 مل من PBS. ماصة بلطف لخلط. اغسل كرات الدم الحمراء لمدة 3 دقائق عند 268 × جم وتخلص من المادة الطافية.
  3. استخرج 5 ميكرولتر من حبيبات كرات الدم الحمراء باستخدام طرف ماصة صغيرة سعة 10 ميكرولتر ووزعها بالكامل في 1 مل من وسط DEP. اغسل الخلايا بالطرد المركزي عند 268 × جم لمدة 3 دقائق.
  4. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق كرات الدم الحمراء في 1 مل من وسط DEP. ماصة بلطف لخلط.
  5. اغسل كرات الدم الحمراء لمدة 3 دقائق عند 268 × جم وتخلص من المادة الطافية. ماصة 2 ميكرولتر من حبيبات كرات الدم الحمراء إلى 500 ميكرولتر من وسط DEP. يتم الآن تحضير معلق الخلية بتركيز في نطاق 62 - 104 خلية / ميكرولتر12 ، والتي يمكن تأكيدها باستخدام شريحة عد الخلايا القياسية.

5. إعداد التشوه الكهربائي واختبار التعب

  1. ضع جهاز الموائع الدقيقة في الجزء السفلي من تركيبات الاختبار. قم بمحاذاة الجزء العلوي من التركيب مع الجهاز وقم بتجميع الجزأين باستخدام مجموعتين من مسامير وصواميل النايلون (الشكل 4).
  2. ضع تركيبات الاختبار على مرحلة المجهر. حدد موقع مجموعة واحدة مرغوبة من الأقطاب الكهربائية تحت المجهر.
  3. قم بتوصيل الزوج المقابل من أسلاك القطب الكهربائي التي تطابق مجموعة القطب الموجودة بطرف الإخراج لمولد الوظيفة (الشكل 4).
  4. قم بإزالة 5 ميكرولتر من وسط DEP من مدخل 3 مم لقناة الموائع الدقيقة. قم بتحميل 5 ميكرولتر ببطء من تعليق الخلية في المدخل باستخدام طرف ماصة 10 ميكرولتر.
  5. السماح للخلايا لتستقر لمدة 1 دقيقة. إذا لزم الأمر ، أضف وسيط DEP إضافيا إلى المدخل لدفع الخلايا إلى القناة.
  6. راقب القناة تحت تكبير 20x. استخدم مرشح تمرير النطاق 414/46 نانومتر لتحسين تباين التصوير.
  7. اضغط على زر الجيب وحدد موجة جيبية بسعة 2 فولتRMS بتردد 3 ميجاهرتز. اضغط على زر Mod لتمكين التعديل. قم بتغيير وضع الموجة إلى ASK بالضغط على خيار النوع .
  8. اضبط تردد التعديل على 250 ميجاهرتز ، وهو ما يتوافق مع فترة تحميل وتفريغ 4 ثوان (الشكل 5 أ). قم بتشغيل إخراج مولد الوظائف.
  9. سجل مقطع فيديو مدته 1 دقيقة كل 10 دقائق بمعدل 30 إطارا لكل ثانية (fps).

6. توصيف تشوه كرات الدم الحمراء

  1. باستخدام تطبيق تحرير الفيديو ، افتح .avi الملفات المسجلة في الخطوة السابقة بالضغط على Ctrl + O. استخدم المخطط الزمني لاختيار إطار اهتمام وقم بتعيين إطارات بداية التحديد ونهايته لتكون متطابقة بالضغط على مفتاح Home ثم مفتاح الإنهاء على لوحة المفاتيح.
  2. تصدير إطار الصورة. حدد تنسيق الإخراج ليكون JPEG واضغط على موافق.
  3. افتح تطبيق ImageJ وقم بتحميل الصور المحفوظة في الخطوة السابقة. ابدأ بتعيين القياسات المطلوبة بالضغط على تحليل > تعيين القياسات والتأكد من تحديد خانات الاختيار الخاصة بالمنطقة والمحيط واحتواء القطع الناقص . اضغط على موافق.
  4. بعد ذلك، قم بتحويل الصورة إلى درجات رمادية باختيار نوع > الصورة > 8 بت.
  5. ثم قم بتحويل الصورة إلى ثنائية باستخدام Image > ضبط > Thresholding. في شاشة العتبة، اضبط منزلقي التمرير حسب الحاجة. اضغط على تطبيق ثم أغلق مربع الحوار عتبة.
  6. اختر تحليل أدوات > > مدير عائد الاستثمار. في مدير عائد الاستثمار، اضغط على مربع الاختيار المسمى إظهار الكل. لا تغلق هذا المربع.
  7. حدد أداة العصا (التتبع)، وحدد خلية قابلة للتطبيق في الصورة، واضغط على T على لوحة المفاتيح. سيتم ترقيم الخلية المحددة. يمكن تحديد خلية جديدة مرة أخرى. حدد جميع الخلايا القابلة للتطبيق المراد قياسها. يتم تحديد الخلايا القابلة للتطبيق على أنها تلك المعزولة عن الخلايا الأخرى. يمكن أن يتراوح عدد هذه الخلايا من 50 إلى 200 في مجال رؤية واحد.
  8. ارجع إلى مربع مدير عائد الاستثمار واضغط على قياس. يؤدي هذا إلى فتح مربع النتائج. الأعمدة المسماة الرئيسية والصغرى هي أطوال المحاور الرئيسية والثانوية القطعية المجهزة (بالبكسل) ، على التوالي. اختر ملف > حفظ باسم لتصدير القياسات كملف بتنسيق CSV.
  9. باستخدام أي برنامج تحليل حسابي مناسب ، احسب حاصل قسمة التخصص الرئيسي والثانوي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

عندما تم تحميل تعليق الخلية في قناة الموائع الدقيقة ، لوحظ توزيع موحد نسبيا للخلايا. عند خرج الإشارة (على سبيل المثال ، موجة جيبية بسيطة أو مرحلة On-Keying من ASK) من مولد الوظائف ، ولدت الأقطاب الكهربائية ذات الأغشية الرقيقة المتداخلة مجالا كهربائيا غير منتظم للتيار المتردد. استجابت الخلايا ال?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

يمكن استخدام تعديل ASK OOK لموجة جيبية تحفز قوة DEP لاختبار التعب الميكانيكي لكرات الدم الحمراء على مدى فترة طويلة من الزمن. في هذا البروتوكول ، قصرنا اختبار التعب في المختبر على 1 ساعة لمنع الآثار الأيضية الضارة المحتملة على تشوه الخلية. يمكن برمجة ظروف اختبار التعب الشاملة باستخدام تقنية الت...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم تمويل هذا البحث من قبل NSF / CMMI Mechanobiology لناقلات الأكسجين الاصطناعي القائمة على الهيموجلوبين (# 1941655) و NSF / CMMI التحليل الديناميكي والتعب لخلايا الدم الحمراء الصحية والمريضة (# 1635312).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Balance ScaleViBRAHT-224R
Bandpass filterBRIGHTLINE414/46 BrightLine HC
BD Disposable Syringes with Luer-Lok™ Tips, 1 mLFisher Scientific14-823-30
Biopsy Punches with Plunger System, 1.5 mmFisher Scientific12-460-403
Biopsy Punches with Plunger System, 3 mmFisher Scientific12-460-4071.5 mm and 3 mm diameter
Blunt needle, 23-gaugeBSTEANX001308N97
Bovin Serum AlbuminRMBIOBSA-BSH
CentrifugeSCILOGEX911015119999
Conical Tube, 50 mLFisher Scientific05-539-13
DextroseFisher ScientificMDX01455MilliporeSigma™
EC Low Conductivity meterecoTestr358/03
Eppendorf   Snap-Cap MicrocentrifugeTubeswww.eppendorf.com05-402-25
ExcelMicrosoft Graph plotting
Function GeneratorSIGLENTSDG830
Glass/ITO Electrode SubstrateOSSILAS161
ImageJNIHhttps://imagej.nih.gov/ij/
Inverted MicroscopeOLYMPUSIX81 - SN9E07015
Lab OvenQUINCY LAB (QL)MODEL 30GCEDigital Model
MatlabMathWorksGraph plotting
Micro Osmometer - Model 3300Advanced Instruments Inc.S/N: 03050397P
Parafilm Laboratory Wrapping FilmFisher Scientific13-374-12
Petri dishFALCONSKU=351006ICSI/Biopsydish 50*9 mm
Phosphate Buffered Saline (PBS)LONZA04-479Q
Plasma CleanerHarrick plasma PDCOOLNC0301989
SolidworksDassault SystemesCAD software
SucroseFisher Scientific50-188-2419
Vacuum DesiccatorSPBEL-ARTF42400-2121
Wooden spatulaFisher ScientificNC0304136Tongue Depressors Wood NS 6"

References

  1. Kim, Y., Kim, K., Park, Y. Measurement techniques for red blood cell deformability: recent advances. Blood Cell—An Overview of Studies in Hematology. 10, 167-194 (2012).
  2. Safeukui, I., et al. Quantitative assessment of sensing and sequestration of spherocytic erythrocytes by the human spleen. Blood, The Journal of the American Society of Hematology. 120 (2), 424-430 (2012).
  3. Naghedi-Baghdar, H., et al. Effect of diet on blood viscosity in healthy humans: a systematic review. Electronic physician. 10 (3), 6563(2018).
  4. Franco, R. S. Measurement of red cell lifespan and aging. Transfusion Medicine and Hemotherapy. 39 (5), 302-307 (2012).
  5. Matthews, K., Lamoureux, E. S., Myrand-Lapierre, M. -E., Duffy, S. P., Ma, H. Technologies for measuring red blood cell deformability. Lab on a Chip. 22, 1254-1274 (2022).
  6. Kim, J., Lee, H., Shin, S. Advances in the measurement of red blood cell deformability: A brief review. Journal of Cellular Biotechnology. 1 (1), 63-79 (2015).
  7. Varga, A., Matrai, A. A., Barath, B., Deak, A., Horvath, L., Nemeth, N. Interspecies diversity of osmotic gradient deformability of red blood cells in human and seven vertebrate animal species. Cells. 11 (8), 1351(2022).
  8. Doh, I., Lee, W. C., Cho, Y. -H., Pisano, A. P., Kuypers, F. A. Deformation measurement of individual cells in large populations using a single-cell microchamber array chip. Applied Physics Letters. 100 (17), 173702(2012).
  9. Toward digital transmitters with amplitude shift keying and quadrature amplitude modulators implementation examples. Al Safi, A., Bazuin, B. 2017 IEEE 7th Annual Computing and Communication Workshop and Conference (CCWC), , 1-7 (2017).
  10. Zhang, J., Chen, K., Fan, Z. H. Circulating tumor cell isolation and analysis. Advances in Clinical Chemistry. 75, 1-31 (2016).
  11. Cottet, J., Fabregue, O., Berger, C., Buret, F., Renaud, P., Frénéa-Robin, M. MyDEP: a new computational tool for dielectric modeling of particles and cells. Biophysical Journal. 116 (1), 12-18 (2019).
  12. Haywood, M. Interpreting the full blood count. InnovAiT. 15 (3), 131-137 (2022).
  13. Qiang, Y., Liu, J., Dao, M., Suresh, S., Du, E. Mechanical fatigue of human red blood cells. Proceedings of the National Academy of Sciences. 116 (40), 19828-19834 (2019).
  14. Gharaibeh, B., et al. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nature Protocols. 3 (9), 1501-1509 (2008).
  15. Qiang, Y., Liu, J., Dao, M., Du, E. In vitro assay for single-cell characterization of impaired deformability in red blood cells under recurrent episodes of hypoxia. Lab on a Chip. 21 (18), 3458-3470 (2021).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 200

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved