A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول تقنية التألق المناعي متعدد الألوان لتقييم نموذج الفئران لالتهاب الأنف التحسسي.

Abstract

التهاب الأنف التحسسي (AR) هو مرض التهابي مزمن غير معدي يصيب الغشاء المخاطي للأنف ، ويتوسط فيه في المقام الأول الغلوبولين المناعي المحدد E (IgE) ، ويؤثر على حوالي 10٪ -20٪ من سكان العالم. في حين أن التلوين المناعي (IF) كان منذ فترة طويلة تقنية قياسية للكشف عن تعبير البروتين الخاص بالمرض ، فإن تقنيات IF التقليدية محدودة في قدرتها على اكتشاف مستويات التعبير لثلاثة بروتينات أو أكثر في نفس العينة. وبالتالي ، تم تطوير تقنيات IF متعددة الألوان في السنوات الأخيرة ، والتي تسمح بوضع العلامات المتزامنة لأهداف متعددة في الخلايا أو الأنسجة.

يوفر هذا البروتوكول نظرة عامة شاملة على عملية إنشاء نموذج الفئران من AR ، والحصول على عينات الغشاء المخاطي للأنف ، والإجراءات الفنية للتألق المناعي متعدد الألوان. أظهرت جميع الفئران في مجموعة AR أعراضا نموذجية مثل العطس وسيلان الأنف وحكة الأنف ، مع تسجيل الملاحظات السلوكية ≥5 نقطة. كشف تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين (H&E) عن زيادة عدد الخلايا الالتهابية وتعطيل سلامة الغشاء المخاطي للأنف في مجموعة AR. أظهر التألق المناعي متعدد الألوان (mIF) زيادة في التعبير عن RORγt و TICAM-1 ، بينما انخفض تعبير Foxp3 في أنسجة الغشاء المخاطي للأنف لفئران AR.

Introduction

التهاب الأنف التحسسي (AR) هو مرض التهابي مزمن غير معدي يصيب الغشاء المخاطي للأنف بوساطة الغلوبولين المناعي المحدد E (IgE) 1,2. يتميز بأعراض مثل العطس وسيلان الأنف واحتقان الأنف وحكة الأنف. مع التصنيع والتحضر ، يتزايد انتشار AR تدريجيا ، مما يؤثر على حوالي 10٪ -20٪ من سكان العالم1. تقنية التألق المناعي (IF) هي طريقة تلطيخ الفلورسنت التي تستخدم تفاعل ربط الأجسام المضادة والمستضد. يمكن استخدامه للكشف عن وقياس مستويات التوزيع والتعبير لبروتينات معينة في الأنسجة أو الخلايا البيولوجية. في أبحاث الواقع المعزز ، يمكن ل IF اكتشاف أهداف متعددة في وقت واحد ، بما في ذلك السيتوكينات المرتبطة بالواقع....

Protocol

حصل البروتوكول والإجراءات التجريبية على موافقة من لجنة البحوث الإدارية والحيوانية بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم السجل: 2022DL-010). تم الحصول على ذكور فئران Sprague Dawley (SD) البالغة من العمر ثمانية أسابيع ، والتي يتراوح وزنها بين 180 و 200 جم ، تجاريا (انظر جدول المواد) وتم وضعها تحت دورة الضوء / الظلام الطبيعية مع درجة حرارة مضبوطة (23 ± 2 درجة مئوية) ورطوبة نسبية (55٪ ± 10٪). تم تقسيم اثني عشر فأرا بشكل عشوائي إلى مجموعتين: المجموعة الضابطة ومجموعة AR. تأقلمت جميع الفئران مع هذه الظروف وزودت بحرية الوصول إلى الطعام والماء لمدة أسبوع واحد قبل التجربة.

1. إنشاء نموذج الفئران من AR

  1. تحض....

النتائج

تم حث ستة فئران SD بنجاح في نموذج AR من خلال حقن OVA داخل الصفاق وتحدي الأنف. تم تحفيز AR في جميع الفئران في مجموعة AR ، وهو ما يمثل 100 ٪ من المجموعة. أظهرت جميع الفئران في مجموعة AR أعراضا نموذجية مثل العطس وسيلان الأنف وحكة في الأنف. سجلت جميع الملاحظات السلوكية ≥5 نقطة (الجدول 2).

Discussion

التهاب الأنف التحسسي (AR) هو مرض التهابي غير معدي في الغشاء المخاطي للأنف ناتج عن مجموعة من العوامل البيئية والوراثية. لقد أصبح مصدر قلق صحي عالمي ، مما يؤثر على كفاءة العمل ، ويقلل من نوعية الحياة ، ويضعف النوم ، والوظيفة الإدراكية ، ويسبب التهيج والتعب. يؤثر الواقع المعزز على 10٪ -20٪ من سكان .......

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من قبل إدارة العلوم والتكنولوجيا بمقاطعة سيتشوان (2021YJ0175).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Al(OH)3Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA7130
75% ethanolAnhui Yiren An Co., Ltd20210107
AmmoniaChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2021070101
Anhydrous ethanolChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022070501
Anti-fluorescence quenching sealerSouthernBiotech0100-01
Automatic dyeing machineThermo scientificVaristain Gemini ES
Carrier slidesNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd220518001
Citrate-phosphate buffer Servicebio biotechnology co., LtdG1201
Citric acid antigen repair solution (PH 6.0)Xavier Biotechnology Co., LtdG1201
CoverslipNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co.220518001
CoverslipNantong Mewtech Life Science Co., LtdCS01-2450
CY3-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1223-50UL
DAPISawell Biotechnology Co., LtdG1012
Decoloring shakerSCILOGEXS1010E
EDTA decalcification solutionWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdCR2203047
Electric heating blast dryer Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
Embedding box marking machineThermo scientific PrintMate AS
Embedding machineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5
Fast tissue dewatering machineThermo scientificSTP420 ES
Film sealerThermo scientificAutostainer 360
FITC-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1222-50UL
Fluorescence microscopeSunny Optical Technology Co.LtdCX40
Foxp3Affinity Biosciences Co., Ltdbs-10211R
Freezing tableWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5
Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP)Liankebio Co., LtdGAR0072
Goat serumBiosharpBL210A
H&E staining kitLeageneDH0020
Hemostatic forcepsShanghai Medical Devices Co., LtdJ31010
Hydrochloric acidSichuan Xilong Science Co., Ltd210608
Immunohistochemical penBiosharpBC004
Microwave ovenMideaM1-L213B
Neutral gumSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd10004160
Ovalbumin Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA804010
OvenShanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
Palm centrifugeSCILOGEXD1008E
ParaformaldehydeBeyotime Biotechnology Co., LtdP0099-100ml
Pathology section scanner3DHISTECH KftPannoramic SCAN 
PBS bufferBiosharpG4202
Pipette DragonKE0003087/KA0056573
RorγtAffinity Biosciences Co., LtdDF3196
ScalpelQuanzhou Excellence Medical Co., Ltd20170022
Self-fluorescent quenching agent Sudan Black BBioengineering Co., LtdA602008-0025
SlicerThermo scientificHM325
Slicing machineThermo scientificHM325
SlideNantong Mewtech Life Science Co., LtdPC2-301
Sprague Dawley ratsSichuan Academy of Traditional Chinese MedicineSYX figure-materials-5554 2023-0100
TICAM-1Affinity Biosciences Co., LtdDF6289
Tissue scissorsShanghai Medical Devices Co., LtdJ22120
Tissue spreading baking sheet machineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
TYR-690 fluorescent dyesShanghai Rutron Biotechnology Co., LtdRC0086-34RM
Vortex mixerSCILOGEXSLK-O3000-S
Water bath-slide drierWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
Wax trimmerWuhan Junjie Electronics Co., LtdJXL-818
XyleneChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022051901

References

  1. Brożek, J. L., et al. Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).
  2. Maurer, M., Zuberbier, T.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

E IF IF AR ROR t TICAM 1 Foxp3

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved