Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
* Эти авторы внесли равный вклад
В данном протоколе описана методика многоцветной иммунофлюоресценции для оценки модели аллергического ринита у крыс.
Аллергический ринит (АР) – это хроническое неинфекционное воспалительное заболевание слизистой оболочки носа, в основном опосредованное специфическим иммуноглобулином Е (IgE), поражающее примерно 10-20% населения мира. В то время как иммунофлуоресцентное (ИФ) окрашивание уже давно является стандартным методом обнаружения специфической для заболевания экспрессии белков, традиционные методы ИФ ограничены в своей способности обнаруживать уровни экспрессии трех или более белков в одном образце. В связи с этим в последние годы были разработаны многоцветные методы ПЧ, которые позволяют одновременно маркировать несколько мишеней в клетках или тканях.
В этом протоколе представлен всесторонний обзор процесса создания модели АР на крысах, получения образцов слизистой оболочки носа и технических процедур многоцветной иммунофлюоресценции. Все крысы в группе AR демонстрировали типичные симптомы, такие как чихание, насморк и зуд в носу, при этом поведенческие наблюдения набрали ≥5 балла. Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) выявило увеличение количества воспалительных клеток и нарушение целостности слизистой оболочки носа в группе АР. Многоцветная иммунофлуоресценция (mIF) демонстрировала повышенную экспрессию RORγt и TICAM-1, в то время как экспрессия Foxp3 снижалась в ткани слизистой оболочки носа крыс с АР.
Аллергический ринит (АР) – это хроническое неинфекционное воспалительное заболевание слизистой оболочки носа, преимущественно опосредованное специфическим иммуноглобулином Е (IgE)1,2. Для него характерны такие симптомы, как чихание, насморк, заложенность носа и зуд в носу. По мере индустриализации и урбанизации распространенность АР постепенно увеличивается, затрагивая примерно 10–20% населения мира1. Метод иммунофлуоресценции (ИФ) представляет собой метод флуоресцентного окрашивания, в котором используется реакция связывания антитело-антиген. Он может быть использован для обнаружения и....
Протокол эксперимента и процедуры получили одобрение Административного комитета и комитета по исследованиям на животных Университета традиционной китайской медицины Чэнду (регистрационный номер: 2022DL-010). Восьминедельные крысы-самцы Sprague Dawley (SD) массой 180-200 г были получены в промышленных масштабах (см. таблицу материалов) и содержались в естественном цикле света/темноты с контролируемой температурой (23 ± 2 °C) и относительной влажностью (55% ± 10%). Двенадцать крыс были случайным образом разделены на две группы: контрольную группу и группу AR. Все крысы были акклиматизированы к этим условиям и обеспечены свободным доступом к пище и воде ....
Шесть крыс SD были успешно индуцированы в модель AR с помощью внутрибрюшинной инъекции OVA и назального вызова. АР индуцировали у всех крыс в группе АР, что составляет 100% группы. У всех крыс в группе AR наблюдались типичные симптомы, такие как чихание, насморк и зуд в носу. Все поведенческие н?.......
Аллергический ринит (АР) – это неинфекционное воспалительное заболевание слизистой оболочки носа, возникающее в результате сочетания экологических и генетических факторов. Это стало глобальной проблемой здравоохранения, влияя на эффективность работы, снижая качество жизни, ухудшая .......
Авторам нечего раскрывать.
Эта работа была поддержана Департаментом науки и технологий провинции Сычуань (2021YJ0175).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Al(OH)3 | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A7130 | |
75% ethanol | Anhui Yiren An Co., Ltd | 20210107 | |
Ammonia | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
Anhydrous ethanol | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 | |
Anti-fluorescence quenching sealer | SouthernBiotech | 0100-01 | |
Automatic dyeing machine | Thermo scientific | Varistain Gemini ES | |
Carrier slides | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
Citrate-phosphate buffer | Servicebio biotechnology co., Ltd | G1201 | |
Citric acid antigen repair solution (PH 6.0) | Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1201 | |
Coverslip | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co. | 220518001 | |
Coverslip | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | CS01-2450 | |
CY3-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1223-50UL | |
DAPI | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1012 | |
Decoloring shaker | SCILOGEX | S1010E | |
EDTA decalcification solution | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | CR2203047 | |
Electric heating blast dryer | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
Embedding box marking machine | Thermo scientific | PrintMate AS | |
Embedding machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
Fast tissue dewatering machine | Thermo scientific | STP420 ES | |
Film sealer | Thermo scientific | Autostainer 360 | |
FITC-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1222-50UL | |
Fluorescence microscope | Sunny Optical Technology Co.Ltd | CX40 | |
Foxp3 | Affinity Biosciences Co., Ltd | bs-10211R | |
Freezing table | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) | Liankebio Co., Ltd | GAR0072 | |
Goat serum | Biosharp | BL210A | |
H&E staining kit | Leagene | DH0020 | |
Hemostatic forceps | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J31010 | |
Hydrochloric acid | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
Immunohistochemical pen | Biosharp | BC004 | |
Microwave oven | Midea | M1-L213B | |
Neutral gum | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd | 10004160 | |
Ovalbumin | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A804010 | |
Oven | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
Palm centrifuge | SCILOGEX | D1008E | |
Paraformaldehyde | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0099-100ml | |
Pathology section scanner | 3DHISTECH Kft | Pannoramic SCAN | |
PBS buffer | Biosharp | G4202 | |
Pipette | Dragon | KE0003087/KA0056573 | |
Rorγt | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF3196 | |
Scalpel | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
Self-fluorescent quenching agent Sudan Black B | Bioengineering Co., Ltd | A602008-0025 | |
Slicer | Thermo scientific | HM325 | |
Slicing machine | Thermo scientific | HM325 | |
Slide | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | PC2-301 | |
Sprague Dawley rats | Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine | SYX ![]() | |
TICAM-1 | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF6289 | |
Tissue scissors | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J22120 | |
Tissue spreading baking sheet machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
TYR-690 fluorescent dyes | Shanghai Rutron Biotechnology Co., Ltd | RC0086-34RM | |
Vortex mixer | SCILOGEX | SLK-O3000-S | |
Water bath-slide drier | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
Wax trimmer | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
Xylene | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены