Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В данном протоколе описана методика многоцветной иммунофлюоресценции для оценки модели аллергического ринита у крыс.

Аннотация

Аллергический ринит (АР) – это хроническое неинфекционное воспалительное заболевание слизистой оболочки носа, в основном опосредованное специфическим иммуноглобулином Е (IgE), поражающее примерно 10-20% населения мира. В то время как иммунофлуоресцентное (ИФ) окрашивание уже давно является стандартным методом обнаружения специфической для заболевания экспрессии белков, традиционные методы ИФ ограничены в своей способности обнаруживать уровни экспрессии трех или более белков в одном образце. В связи с этим в последние годы были разработаны многоцветные методы ПЧ, которые позволяют одновременно маркировать несколько мишеней в клетках или тканях.

В этом протоколе представлен всесторонний обзор процесса создания модели АР на крысах, получения образцов слизистой оболочки носа и технических процедур многоцветной иммунофлюоресценции. Все крысы в группе AR демонстрировали типичные симптомы, такие как чихание, насморк и зуд в носу, при этом поведенческие наблюдения набрали ≥5 балла. Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) выявило увеличение количества воспалительных клеток и нарушение целостности слизистой оболочки носа в группе АР. Многоцветная иммунофлуоресценция (mIF) демонстрировала повышенную экспрессию RORγt и TICAM-1, в то время как экспрессия Foxp3 снижалась в ткани слизистой оболочки носа крыс с АР.

Введение

Аллергический ринит (АР) – это хроническое неинфекционное воспалительное заболевание слизистой оболочки носа, преимущественно опосредованное специфическим иммуноглобулином Е (IgE)1,2. Для него характерны такие симптомы, как чихание, насморк, заложенность носа и зуд в носу. По мере индустриализации и урбанизации распространенность АР постепенно увеличивается, затрагивая примерно 10–20% населения мира1. Метод иммунофлуоресценции (ИФ) представляет собой метод флуоресцентного окрашивания, в котором используется реакция связывания антитело-антиген. Он может быть использован для обнаружения и....

протокол

Протокол эксперимента и процедуры получили одобрение Административного комитета и комитета по исследованиям на животных Университета традиционной китайской медицины Чэнду (регистрационный номер: 2022DL-010). Восьминедельные крысы-самцы Sprague Dawley (SD) массой 180-200 г были получены в промышленных масштабах (см. таблицу материалов) и содержались в естественном цикле света/темноты с контролируемой температурой (23 ± 2 °C) и относительной влажностью (55% ± 10%). Двенадцать крыс были случайным образом разделены на две группы: контрольную группу и группу AR. Все крысы были акклиматизированы к этим условиям и обеспечены свободным доступом к пище и воде ....

Результаты

Шесть крыс SD были успешно индуцированы в модель AR с помощью внутрибрюшинной инъекции OVA и назального вызова. АР индуцировали у всех крыс в группе АР, что составляет 100% группы. У всех крыс в группе AR наблюдались типичные симптомы, такие как чихание, насморк и зуд в носу. Все поведенческие н?.......

Обсуждение

Аллергический ринит (АР) – это неинфекционное воспалительное заболевание слизистой оболочки носа, возникающее в результате сочетания экологических и генетических факторов. Это стало глобальной проблемой здравоохранения, влияя на эффективность работы, снижая качество жизни, ухудшая .......

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Департаментом науки и технологий провинции Сычуань (2021YJ0175).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Al(OH)3Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA7130
75% ethanolAnhui Yiren An Co., Ltd20210107
AmmoniaChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2021070101
Anhydrous ethanolChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022070501
Anti-fluorescence quenching sealerSouthernBiotech0100-01
Automatic dyeing machineThermo scientificVaristain Gemini ES
Carrier slidesNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd220518001
Citrate-phosphate buffer Servicebio biotechnology co., LtdG1201
Citric acid antigen repair solution (PH 6.0)Xavier Biotechnology Co., LtdG1201
CoverslipNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co.220518001
CoverslipNantong Mewtech Life Science Co., LtdCS01-2450
CY3-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1223-50UL
DAPISawell Biotechnology Co., LtdG1012
Decoloring shakerSCILOGEXS1010E
EDTA decalcification solutionWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdCR2203047
Electric heating blast dryer Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
Embedding box marking machineThermo scientific PrintMate AS
Embedding machineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5
Fast tissue dewatering machineThermo scientificSTP420 ES
Film sealerThermo scientificAutostainer 360
FITC-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1222-50UL
Fluorescence microscopeSunny Optical Technology Co.LtdCX40
Foxp3Affinity Biosciences Co., Ltdbs-10211R
Freezing tableWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5
Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP)Liankebio Co., LtdGAR0072
Goat serumBiosharpBL210A
H&E staining kitLeageneDH0020
Hemostatic forcepsShanghai Medical Devices Co., LtdJ31010
Hydrochloric acidSichuan Xilong Science Co., Ltd210608
Immunohistochemical penBiosharpBC004
Microwave ovenMideaM1-L213B
Neutral gumSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd10004160
Ovalbumin Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA804010
OvenShanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
Palm centrifugeSCILOGEXD1008E
ParaformaldehydeBeyotime Biotechnology Co., LtdP0099-100ml
Pathology section scanner3DHISTECH KftPannoramic SCAN 
PBS bufferBiosharpG4202
Pipette DragonKE0003087/KA0056573
RorγtAffinity Biosciences Co., LtdDF3196
ScalpelQuanzhou Excellence Medical Co., Ltd20170022
Self-fluorescent quenching agent Sudan Black BBioengineering Co., LtdA602008-0025
SlicerThermo scientificHM325
Slicing machineThermo scientificHM325
SlideNantong Mewtech Life Science Co., LtdPC2-301
Sprague Dawley ratsSichuan Academy of Traditional Chinese MedicineSYX figure-materials-5554 2023-0100
TICAM-1Affinity Biosciences Co., LtdDF6289
Tissue scissorsShanghai Medical Devices Co., LtdJ22120
Tissue spreading baking sheet machineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
TYR-690 fluorescent dyesShanghai Rutron Biotechnology Co., LtdRC0086-34RM
Vortex mixerSCILOGEXSLK-O3000-S
Water bath-slide drierWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
Wax trimmerWuhan Junjie Electronics Co., LtdJXL-818
XyleneChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022051901

Ссылки

  1. Brożek, J. L., et al. Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).
  2. Maurer, M., Zuberbier, T.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

IFIFARROR tTICAM 1Foxp3

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены