A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מתאר טכניקה אימונופלואורסצנטית צבעונית להערכת מודל החולדה של נזלת אלרגית.

Abstract

נזלת אלרגית (AR) היא מחלה דלקתית כרונית ולא זיהומית של רירית האף, המתווכת בעיקר על ידי אימונוגלובולין E ספציפי (IgE), המשפיעה על כ -10%-20% מאוכלוסיית העולם. בעוד צביעת אימונופלואורסנציה (IF) היא כבר מזמן טכניקה סטנדרטית לזיהוי ביטוי חלבונים ספציפיים למחלה, טכניקות IF קונבנציונליות מוגבלות ביכולתן לזהות את רמות הביטוי של שלושה חלבונים או יותר באותה דגימה. כתוצאה מכך, פותחו בשנים האחרונות טכניקות IF צבעוניות, המאפשרות תיוג סימולטני של מטרות מרובות בתאים או ברקמות.

פרוטוקול זה מספק סקירה מקיפה של תהליך הקמת מודל חולדה של AR, קבלת דגימות רירית האף, וההליכים הטכניים עבור immunofluorescence צבעוני. כל החולדות בקבוצת המציאות הרבודה הציגו תסמינים אופייניים כגון התעטשות, נזלת ואף מגרד, כאשר תצפיות התנהגותיות קיבלו ציון של ≥5 נקודות. צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E) חשפה ספירה מוגברת של תאים דלקתיים ושיבשה את שלמות רירית האף בקבוצת AR. אימונופלואורסצנטיות צבעונית (mIF) הדגימה ביטוי מוגבר של RORγt ו-TICAM-1, בעוד שביטוי Foxp3 ירד ברקמת רירית האף של חולדות AR.

Introduction

נזלת אלרגית (AR) היא מחלה דלקתית כרונית ולא זיהומית של רירית האף המתווכת בעיקר על ידי אימונוגלובולין E ספציפי (IgE)1,2. הוא מאופיין בתסמינים כגון התעטשות, נזלת, גודש באף וגירוד באף. עם התיעוש והעיור, השכיחות של AR עולה בהדרגה, ומשפיעה על כ 10%-20% מאוכלוסיית העולם1. טכניקת האימונופלואורסנציה (IF) היא שיטת צביעה פלואורסצנטית המשתמשת בתגובת קישור נוגדן-אנטיגן. ניתן להשתמש בו כדי לזהות ולכמת את רמות ההתפלגות והביטוי של חלבונים ספציפיים ברקמות או תאים ביולוגיים. במחקר AR, IF יכול לזהות בו זמנית מטרות מרובות, כולל ציטוקינים הקשורים ל- AR, תאים דלקתיים, קולטנים ועוד, מה שמקל על חקר פתוגנזה של....

Protocol

פרוטוקול הניסוי ונהלי הניסוי קיבלו אישור מהוועדה המנהלית והמחקר בבעלי חיים של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (מספר שיא: 2022DL-010). חולדות Sprague Dawley (SD) זכרים בני שמונה שבועות, במשקל 180-200 גרם, הושגו באופן מסחרי (ראו טבלת חומרים) ושוכנו תחת מחזור אור טבעי / חושך עם טמפרטורה מבוקרת (23 ± 2 מעלות צלזיוס) ולחות יחסית (55% ± 10%). שתים עשרה חולדות חולקו באופן אקראי לשתי קבוצות: קבוצת הביקורת וקבוצת המציאות הרבודה. כל החולדות התאקלמו לתנאים אלה וקיבלו גישה חופשית למזון ומים במשך שבוע לפני הניסוי.

1. הקמת מודל חולדה של מציאות רבודה

  1. הכנת התמיסה הרגישה: להשהות 30 מ"ג של ovalbumin (OVA) ו ....

תוצאות

שש חולדות SD הושרו בהצלחה למודל AR באמצעות הזרקה תוך-צפקית של OVA ואתגר האף. AR הושרה בכל החולדות בקבוצת AR, והיוותה 100% מהקבוצה. כל החולדות בקבוצת AR הציגו תסמינים אופייניים כגון התעטשות, נזלת ואף מגרד. כל התצפיות ההתנהגותיות קיבלו ציון ≥5 נקודות (טבלה 2).

תוצאות צביעת H&E ביו.......

Discussion

נזלת אלרגית (AR) היא מחלה דלקתית לא זיהומית של רירית האף הנובעת משילוב של גורמים סביבתיים וגנטיים. היא הפכה לדאגה בריאותית עולמית, משפיעה על יעילות העבודה, פוגעת באיכות החיים, פוגעת בשינה, בתפקוד הקוגניטיבי וגורמת לעצבנות ועייפות. מציאות רבודה משפיעה על 10%-20% מאוכלוסיית העולם¹ ונושאת עלויות .......

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2021YJ0175).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Al(OH)3Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA7130
75% ethanolAnhui Yiren An Co., Ltd20210107
AmmoniaChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2021070101
Anhydrous ethanolChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022070501
Anti-fluorescence quenching sealerSouthernBiotech0100-01
Automatic dyeing machineThermo scientificVaristain Gemini ES
Carrier slidesNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd220518001
Citrate-phosphate buffer Servicebio biotechnology co., LtdG1201
Citric acid antigen repair solution (PH 6.0)Xavier Biotechnology Co., LtdG1201
CoverslipNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co.220518001
CoverslipNantong Mewtech Life Science Co., LtdCS01-2450
CY3-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1223-50UL
DAPISawell Biotechnology Co., LtdG1012
Decoloring shakerSCILOGEXS1010E
EDTA decalcification solutionWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdCR2203047
Electric heating blast dryer Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
Embedding box marking machineThermo scientific PrintMate AS
Embedding machineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5
Fast tissue dewatering machineThermo scientificSTP420 ES
Film sealerThermo scientificAutostainer 360
FITC-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1222-50UL
Fluorescence microscopeSunny Optical Technology Co.LtdCX40
Foxp3Affinity Biosciences Co., Ltdbs-10211R
Freezing tableWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5
Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP)Liankebio Co., LtdGAR0072
Goat serumBiosharpBL210A
H&E staining kitLeageneDH0020
Hemostatic forcepsShanghai Medical Devices Co., LtdJ31010
Hydrochloric acidSichuan Xilong Science Co., Ltd210608
Immunohistochemical penBiosharpBC004
Microwave ovenMideaM1-L213B
Neutral gumSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd10004160
Ovalbumin Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA804010
OvenShanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
Palm centrifugeSCILOGEXD1008E
ParaformaldehydeBeyotime Biotechnology Co., LtdP0099-100ml
Pathology section scanner3DHISTECH KftPannoramic SCAN 
PBS bufferBiosharpG4202
Pipette DragonKE0003087/KA0056573
RorγtAffinity Biosciences Co., LtdDF3196
ScalpelQuanzhou Excellence Medical Co., Ltd20170022
Self-fluorescent quenching agent Sudan Black BBioengineering Co., LtdA602008-0025
SlicerThermo scientificHM325
Slicing machineThermo scientificHM325
SlideNantong Mewtech Life Science Co., LtdPC2-301
Sprague Dawley ratsSichuan Academy of Traditional Chinese MedicineSYX figure-materials-5554 2023-0100
TICAM-1Affinity Biosciences Co., LtdDF6289
Tissue scissorsShanghai Medical Devices Co., LtdJ22120
Tissue spreading baking sheet machineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
TYR-690 fluorescent dyesShanghai Rutron Biotechnology Co., LtdRC0086-34RM
Vortex mixerSCILOGEXSLK-O3000-S
Water bath-slide drierWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
Wax trimmerWuhan Junjie Electronics Co., LtdJXL-818
XyleneChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022051901

References

  1. Brożek, J. L., et al. Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).
  2. Maurer, M., Zuberbier, T.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

EIFIFARARROR tTICAM 1Foxp3

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved