A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
פרוטוקול זה מתאר טכניקה אימונופלואורסצנטית צבעונית להערכת מודל החולדה של נזלת אלרגית.
נזלת אלרגית (AR) היא מחלה דלקתית כרונית ולא זיהומית של רירית האף, המתווכת בעיקר על ידי אימונוגלובולין E ספציפי (IgE), המשפיעה על כ -10%-20% מאוכלוסיית העולם. בעוד צביעת אימונופלואורסנציה (IF) היא כבר מזמן טכניקה סטנדרטית לזיהוי ביטוי חלבונים ספציפיים למחלה, טכניקות IF קונבנציונליות מוגבלות ביכולתן לזהות את רמות הביטוי של שלושה חלבונים או יותר באותה דגימה. כתוצאה מכך, פותחו בשנים האחרונות טכניקות IF צבעוניות, המאפשרות תיוג סימולטני של מטרות מרובות בתאים או ברקמות.
פרוטוקול זה מספק סקירה מקיפה של תהליך הקמת מודל חולדה של AR, קבלת דגימות רירית האף, וההליכים הטכניים עבור immunofluorescence צבעוני. כל החולדות בקבוצת המציאות הרבודה הציגו תסמינים אופייניים כגון התעטשות, נזלת ואף מגרד, כאשר תצפיות התנהגותיות קיבלו ציון של ≥5 נקודות. צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E) חשפה ספירה מוגברת של תאים דלקתיים ושיבשה את שלמות רירית האף בקבוצת AR. אימונופלואורסצנטיות צבעונית (mIF) הדגימה ביטוי מוגבר של RORγt ו-TICAM-1, בעוד שביטוי Foxp3 ירד ברקמת רירית האף של חולדות AR.
נזלת אלרגית (AR) היא מחלה דלקתית כרונית ולא זיהומית של רירית האף המתווכת בעיקר על ידי אימונוגלובולין E ספציפי (IgE)1,2. הוא מאופיין בתסמינים כגון התעטשות, נזלת, גודש באף וגירוד באף. עם התיעוש והעיור, השכיחות של AR עולה בהדרגה, ומשפיעה על כ 10%-20% מאוכלוסיית העולם1. טכניקת האימונופלואורסנציה (IF) היא שיטת צביעה פלואורסצנטית המשתמשת בתגובת קישור נוגדן-אנטיגן. ניתן להשתמש בו כדי לזהות ולכמת את רמות ההתפלגות והביטוי של חלבונים ספציפיים ברקמות או תאים ביולוגיים. במחקר AR, IF יכול לזהות בו זמנית מטרות מרובות, כולל ציטוקינים הקשורים ל- AR, תאים דלקתיים, קולטנים ועוד, מה שמקל על חקר פתוגנזה של....
פרוטוקול הניסוי ונהלי הניסוי קיבלו אישור מהוועדה המנהלית והמחקר בבעלי חיים של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (מספר שיא: 2022DL-010). חולדות Sprague Dawley (SD) זכרים בני שמונה שבועות, במשקל 180-200 גרם, הושגו באופן מסחרי (ראו טבלת חומרים) ושוכנו תחת מחזור אור טבעי / חושך עם טמפרטורה מבוקרת (23 ± 2 מעלות צלזיוס) ולחות יחסית (55% ± 10%). שתים עשרה חולדות חולקו באופן אקראי לשתי קבוצות: קבוצת הביקורת וקבוצת המציאות הרבודה. כל החולדות התאקלמו לתנאים אלה וקיבלו גישה חופשית למזון ומים במשך שבוע לפני הניסוי.
1. הקמת מודל חולדה של מציאות רבודה
שש חולדות SD הושרו בהצלחה למודל AR באמצעות הזרקה תוך-צפקית של OVA ואתגר האף. AR הושרה בכל החולדות בקבוצת AR, והיוותה 100% מהקבוצה. כל החולדות בקבוצת AR הציגו תסמינים אופייניים כגון התעטשות, נזלת ואף מגרד. כל התצפיות ההתנהגותיות קיבלו ציון ≥5 נקודות (טבלה 2).
תוצאות צביעת H&E ביו.......
נזלת אלרגית (AR) היא מחלה דלקתית לא זיהומית של רירית האף הנובעת משילוב של גורמים סביבתיים וגנטיים. היא הפכה לדאגה בריאותית עולמית, משפיעה על יעילות העבודה, פוגעת באיכות החיים, פוגעת בשינה, בתפקוד הקוגניטיבי וגורמת לעצבנות ועייפות. מציאות רבודה משפיעה על 10%-20% מאוכלוסיית העולם¹ ונושאת עלויות .......
למחברים אין מה לחשוף.
עבודה זו נתמכה על ידי מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2021YJ0175).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Al(OH)3 | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A7130 | |
75% ethanol | Anhui Yiren An Co., Ltd | 20210107 | |
Ammonia | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
Anhydrous ethanol | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 | |
Anti-fluorescence quenching sealer | SouthernBiotech | 0100-01 | |
Automatic dyeing machine | Thermo scientific | Varistain Gemini ES | |
Carrier slides | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
Citrate-phosphate buffer | Servicebio biotechnology co., Ltd | G1201 | |
Citric acid antigen repair solution (PH 6.0) | Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1201 | |
Coverslip | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co. | 220518001 | |
Coverslip | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | CS01-2450 | |
CY3-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1223-50UL | |
DAPI | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1012 | |
Decoloring shaker | SCILOGEX | S1010E | |
EDTA decalcification solution | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | CR2203047 | |
Electric heating blast dryer | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
Embedding box marking machine | Thermo scientific | PrintMate AS | |
Embedding machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
Fast tissue dewatering machine | Thermo scientific | STP420 ES | |
Film sealer | Thermo scientific | Autostainer 360 | |
FITC-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1222-50UL | |
Fluorescence microscope | Sunny Optical Technology Co.Ltd | CX40 | |
Foxp3 | Affinity Biosciences Co., Ltd | bs-10211R | |
Freezing table | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) | Liankebio Co., Ltd | GAR0072 | |
Goat serum | Biosharp | BL210A | |
H&E staining kit | Leagene | DH0020 | |
Hemostatic forceps | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J31010 | |
Hydrochloric acid | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
Immunohistochemical pen | Biosharp | BC004 | |
Microwave oven | Midea | M1-L213B | |
Neutral gum | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd | 10004160 | |
Ovalbumin | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A804010 | |
Oven | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
Palm centrifuge | SCILOGEX | D1008E | |
Paraformaldehyde | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0099-100ml | |
Pathology section scanner | 3DHISTECH Kft | Pannoramic SCAN | |
PBS buffer | Biosharp | G4202 | |
Pipette | Dragon | KE0003087/KA0056573 | |
Rorγt | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF3196 | |
Scalpel | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
Self-fluorescent quenching agent Sudan Black B | Bioengineering Co., Ltd | A602008-0025 | |
Slicer | Thermo scientific | HM325 | |
Slicing machine | Thermo scientific | HM325 | |
Slide | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | PC2-301 | |
Sprague Dawley rats | Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine | SYX ![]() | |
TICAM-1 | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF6289 | |
Tissue scissors | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J22120 | |
Tissue spreading baking sheet machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
TYR-690 fluorescent dyes | Shanghai Rutron Biotechnology Co., Ltd | RC0086-34RM | |
Vortex mixer | SCILOGEX | SLK-O3000-S | |
Water bath-slide drier | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
Wax trimmer | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
Xylene | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved