A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
يقدم هذا البروتوكول دليلا تفصيليا للباحثين لإجراء إجراء انسداد الشريان الدماغي الأوسط على الفئران باستخدام طريقة الشريان السباتي الخارجي Longa المعدلة. تهدف التعديلات المقدمة في هذه المقالة إلى زيادة دقة انسداد الشريان الدماغي الأوسط وضمان إعادة التروية الكاملة.
يعمل نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط كنموذج حيواني أساسي لدراسة السكتة الدماغية. على الرغم من استخدامه في البحث لأكثر من ثلاثة عقود ، إلا أن توحيده لا يزال غير كاف. ويشكل هذا الإجراء، الذي يتم إجراؤه في الغالب على الجرذان والفئران، تحديات بسبب طبيعة الفئران الأصغر والأكثر هشاشة. على عكس طريقة الشريان السباتي الشائعة Koizumi ، فإن الشريان السباتي الخارجي Longa هو نموذج السكتة الدماغية الوحيد داخل اللمعة الذي يضمن إعادة التروية الكاملة بعد نقص التروية. يحمل هذا الجانب أهمية حاسمة للدراسات التي تبحث في ظواهر التروية. تضمن التعديلات الجراحية الموضحة في هذه المقالة استمرار تدفق الدم من الشريان السباتي المشترك طوال المرحلة الإقفارية وبعد بداية التروية. الهدف من هذه التعديلات هو انسداد الشريان الدماغي الأوسط بشكل انتقائي عن طريق الحفاظ على التروية دون انقطاع في الفروع القريبة من الشريان الدماغي الأوسط خلال فترة نقص التروية. علاوة على ذلك ، فإن بداية إعادة التروية مفاجئة ويمكن التحكم فيها بدقة ، وبالتالي نمذجة استئصال الخثرة داخل الأوعية الدموية في الطب البشري بشكل أكثر دقة. هدفنا من تقديم مقالة الفيديو الشاملة هذه هو تسهيل تدريب الجراحين الجدد وتعزيز توحيد الإجراءات الجراحية داخل المجتمع العلمي.
تصنف السكتة الدماغية كسبب رئيسي ثان للوفاة والسبب الرئيسي الثالث للوفاة والعجزمجتمعين 1. من خلال سببها ، يمكن أن تكون السكتة الدماغية إقفارية أو نزفية ، مع كون السكتة الدماغية الإقفارية أكثر انتشارا في الممارسة السريرية. تنشأ السكتة الدماغية الإقفارية من انسداد في الشريان الذي يمد أنسجة المخ بالدم ، مما يؤدي إلى نقص التروية وموت الخلايا والالتهابات. منذ ظهور علاجات إعادة التروية مثل انحلال الخثرة واستئصال الخثرة الميكانيكية ، تم إحراز تقدم كبير في علاج السكتة الدماغية. ومع ذلك ، فإن جميع علاجات إعادة التروية تحمل خطر تفاقم حالة المريض عن طريق التسبب في ما يشار إليه عادة باسم إصابة إعادة التروية2. لا تزال الآلية الدقيقة لإصابة إعادة التروية غير واضحة ، والأمر متروك للدراسات قبل السريرية لتحديد الأسباب المحتملة والتدابير الوقائية. لهذا الغرض ، يصبح تطوير نموذج حيواني ذي صلة لإصابة التروية التي تلي السكتة الدماغية الإقفارية أمرا بالغ الأهمية.
انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) هو النموذج الحيواني الأكثر استخداما لدراسة السكتة الدماغية. يتم إجراؤه في الغالب في القوارض وله العديد من المتغيرات المختلفة الموصوفة في الأدبيات العلمية حتى الآن 3,4. يختلف النوعان الرئيسيان ، Koizumi و Longa ، المعروفان باسم الشريان السباتي المشترك (CCA) ومتغيرات الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، تقنيا حسب موقع بضع الشرايين لإدخال الخيوط 5,6. في مقالتنا الأخيرة ، من خلال مراقبة التروية الوعائية في الجسم الحي ، أظهرنا أن طريقة Longa فقط هي التي يمكن اعتبارها حقا نموذج نقص تروية الدماغ / إعادة التروية7. يتضمن الإجراء إدخال الفتيل في ECA ، ودفعه عبر ICA ، وتثبيته عند نقطة التفرع من الشريان الدماغي الأوسط (MCA) للحث على نقص تروية أنسجة المخ. بعد فترة محددة مسبقا من نقص التروية ، يسمح سحب الفتيل بإعادة التروية ، ومحاكاة نقص تروية الدماغ العابر. بعد بداية السكتة الدماغية ، غالبا ما يكون متغير النتيجة الأولية المستخدم في البحث هو حجم الآفة المحتشدة ، والتي يمكن قياسها إما باستخدام الأنسجة خارج الجسم الحي أو في مسح الدماغ في الجسم الحي. تدور التحديات في نماذج MCAO حول قابلية التكاثر المنخفضة المنسوبة إلى الاختلافات بين المتغيرات وبين المشغلين وبين الموضوعات ، حيث تشكل الأخيرة قيودا كبيرة في أبحاث السكتة الدماغية قبل السريرية4.
علاوة على ذلك ، فإن المناطق المحتشدة التي تتبع MCAO في القوارض ضخمة بالنسبة لحجم دماغ القوارض. بالإضافة إلى ذلك ، غالبا ما يتم تجنيد المناطق الخلفية الحصينية من الدماغ في حجم الاحتشاء على الرغم من أن تلك المناطق تعتمد بشكل أساسي على تدفق الدم من الشريان الدماغي الخلفي (PCA) ، وليس MCA8. كما هو الحال في كل من طرق Koizumi و Longa الموصوفة في الأدبيات ، يتم الاحتفاظ ب CCA مرتبطا خلال فترة نقص التروية بسبب المباح غير المكتمل لدائرة ويليس في الفئران ، مما يؤدي إلى تحريض نقص التروية في منطقة أوسع بكثير من المقصود5،6،9. حتى في الطرق التي يتم فيها إعادة فتح CCA أو إصلاحه بعد فترة نقص التروية ، فإن 30-60 دقيقة المعتادة من نقص التروية تؤدي إلى إصابة أنسجة لا رجعة فيها في المناطق غير MCA10. علاوة على ذلك ، على عكس التوقعات ، أظهرت الأبحاث السابقة أن طول طلاء السيليكون للخيوط ليس له أي تأثير على حجم الآفة11. ومع ذلك ، تم تناول اختيار طول طلاء السيليكون للخيوط فقط في النماذج ذات CCA المربوط خلال فترة الانسداد.
كان الهدف من هذه الطريقة هو تعديل طريقة Longa MCAO في الفئران لتمكين تدفق الدم دون انقطاع من CCA خلال فترة نقص التروية ، وبالتالي زيادة انتقائية MCAO ، وكذلك ضمان إعادة التروية الكاملة للمنطقة المحتشدة بعد العملية. ستفيد هذه التعديلات بشكل كبير الدراسات الطولية التي تبحث في إصابة نقص التروية في الفئران عن طريق خفض معدل الوفيات وتقليل التباين بين الموضوعات.
تمت الموافقة على جميع مناولة وإجراءاتها من قبل لجنة ترخيص الأخلاقيات التابعة لكلية الطب بجامعة زغرب ولجنة الأخلاقيات لحماية المستخدمة للأغراض العلمية التابعة لوزارة الزراعة في جمهورية كرواتيا. تم إجراء الإجراءات التجريبية وفقا لقانون حماية الكرواتي (NN 102/17 ، 32/19) ، والتعديلات على قانون حماية (NN 37/13) والمبادئ التوجيهية لحماية المستخدمة للأغراض العلمية (NN 55/13) والتي تتماشى مع الدليل الأوروبي لرعاية واستخدام المختبر (التوجيه 2010/63 / EU).
1. إعداد وموقع الجراحة
2. جراحة تحريض نقص التروية
الشكل 1: رسم توضيحي لتقدم خيوط انسداد الشريان الدماغي الأوسط بعد نقطة تفرع الشريان الجناحية الحنكية. يتم تحقيق التقدم المناسب للخيوط (على اليسار) من خلال توجيه خيوط MCAO بطريقة تجعلها تتراجع عن الجدار الجانبي ل ICA وتنحني بعيدا عن نقطة تفرع PPA. يمكن أن يؤدي عدم القيام بذلك (على اليمين) إلى دخول خيوط إلى PPA وعدم التسبب في السكتة الدماغية. في الحالة الأخيرة ، لن يكون الفتيل قادرا على التقدم بقدر ما ينبغي ويجب على الجراح سحب الفتيل حتى تصبح نهايته مرئية عند نقطة تفرع ICA والبدء في دفع الفتيل مرة أخرى. تمثل الشرايين ذات اللون الأخضر الشرايين المتصلة الخلفية (PcomA) ، ومعظمها غير حاصل على براءة اختراع في الفئران. تم إنشاؤها باستخدام BioRender.com. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
3. فترة نقص التروية
4. جراحة سحب الشعيرة
5. رعاية ما بعد الجراحة
يمكن أن تقدم فحوصات التصوير بالرنين المغناطيسي أثناء العملية الجراحية أو بعد الجراحة ، وتحديدا التصوير المرجح بالتروية (PWI) و / أو التصوير المرجح بالانتشار (DWI) (الشكل 2) دليلا قاطعا على نجاح الإجراء. يظهر PWI أثناء العملية نقص تروية حرج في منطقة MCA المماثلة م?...
MCAO هو إجراء متطلب للغاية للمشغل وعمل موهن للحيوان. لهذا السبب ، من الأهمية بمكان أن يكون لدى الباحثين إجراء تشغيل قياسي يقلل من شدة السكتة الدماغية ، ويقلل من الفشل الإجرائي ، ويحسن رفاهية بعد الإجراء. يسلط بروتوكول MCAO هذا الضوء على بعض الجوانب الرئيسية التي يجب مراعاتها...
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه. لا ينتمي المؤلفون إلى الأسماء التجارية والعلامات التجارية المذكورة في هذا العمل.
تم تمويل هذا العمل من قبل مشروع مؤسسة العلوم الكرواتية BRADISCHEMIA (UIP-2017-05-8082) ؛ GA KK01.1.1.01.0007 بتمويل من الاتحاد الأوروبي من خلال الصندوق الأوروبي للتنمية الإقليمية ومن الاتحاد الأوروبي من خلال الصندوق الأوروبي للتنمية الإقليمية بموجب اتفاقية المنحة رقم. KK.01.1.1.07.0071 ، مشروع "SineMozak. تم دعم عمل طلاب الدكتوراه روك إيستر ومارتا بونغراك بشكل كامل من خلال "مشروع التطوير الوظيفي للباحثين الشباب - تدريب طلاب الدكتوراه" التابع لمؤسسة العلوم الكرواتية بتمويل من الاتحاد الأوروبي من الصندوق الاجتماعي الأوروبي. تم تصوير الإجراء باستخدام هاتف ذكي يعمل بنظام Android مثبت على مجهر جراحي باستخدام حامل كاميرا عام. تم تحرير مواد الفيديو ، وتم تسجيل التعليق الصوتي باستخدام محرر فيديو Wondershare Filmora.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Betadine cutaneous solution 10g/100ml | Alkaloid Skopje | N/A | |
Braided silk suture | Fine Science Tools | 18020-60 | |
Dafilon suture 5/0 DS16 | B. Braun | C0936154 | |
Dolokain 20 mg/g gel | Jadran-Galenski Laboratorij | N/A | |
Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | 2 pieces |
Dumont #7 forceps | Fine Science Tools | 11271-30 | |
Dumont N0 self-closing forceps | Fine Science Tools | 11480-11 | |
Durapore Surgical Tape 1,25cm x 9,1m | 3M | 7100057169 | |
Durapore Surgical Tape 2,5cm x 9,1m | 3M | 7100057168 | |
External thermostat | Petnap | 1012536 | |
Halsey needle holders | Fine Science Tools | 12500-12 | |
Hot bead sterilizer | Fine Science Tools | 18000-50 | |
Iris scissors | Fine Science Tools | 14060-10 | |
Isoflurane USP | Piramal critical care | N/A | |
Laser Doppler Monitor | Moor | MOORVMS-LDF2 | |
Metal Pet Heat Pad | Petnap | 1012525 | |
Micro Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15000-00 | |
Mini-colibri retractor | Fine Science Tools | 17000-01 | |
Recugel eye ointment | Bausch&Lomb | N/A | |
S&T B-1 vessel micro clamp | Fine Science Tools | 00396-01 | 2 pieces |
S&T micro clamp applying forceps | Fine Science Tools | 00071-14 | |
Schwartz micro serrefines | Fine Science Tools | 18052-01 | |
Stemi DV4 Spot stereo microscope | Zeiss | 000000-1018-453 | |
Steri-Strip Reinforced Adhesive Skin Closures 3 mm x 75 mm | 3M | 7100236545 | |
Straight tissue forceps | Fine Science Tools | 11023-10 | |
SZX Stand Arm | Olympus | SZ2-STS | |
Tec III 300 series calibrated vaporizer | Vaporizer Sales and Service inc. | N/A | |
Universal Stand Type 2 | Olympus | SZ2-STU2 | |
VetFlo Six Channel Anesthesia Stand | Kent Scientific | VetFlo-1225 | Modified for O2/N2 mixing |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved