JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يتم هنا عرض بروتوكول لمقايسة وظيفية ديناميكية متعددة المعلمات للصفائح الدموية باستخدام مستشعر حيوي سعوي. يوفر هذا النهج ، المصمم داخل بيئة مكروية شبه صلبة لتعزيز الأهمية الفسيولوجية ، ثلاث معلمات إخراج حساسة لعدد الصفائح الدموية ، وقوة التحفيز ، ومسارات التنشيط.

Abstract

تلعب الصفائح الدموية دورا أساسيا في تخثر الدم من خلال سلسلة من الاستجابات المنظمة ، بما في ذلك الالتصاق والانتشار والإفراز الحبيبي والتراكم وتقلص الهيكل الخلوي. ومع ذلك ، تقتصر المقايسات الحالية على التحليل الجزئي لوظيفة الصفائح الدموية في ظل ظروف غير فسيولوجية. وبالتالي ، من الضروري إجراء فحص محسن يعكس الطبيعة الديناميكية والمتعددة الأوجه لوظيفة الصفائح الدموية في الإعدادات الفسيولوجية. في هذا السياق ، يتم تقديم نهج جديد لقياس العديد من المعلمات الرئيسية المتعلقة بوظيفة الصفائح الدموية في بيئة مكروية شبه صلبة خارج الجسم الحي أكثر صلة من الناحية الفسيولوجية مقارنة بالمقايسات التقليدية. تستخدم هذه الطريقة مستشعر حيويا كهربائيا متقدما ، وهو مستشعر السعة الغشائية (MCS) ، والذي يوفر رؤى فريدة لعملية التخثر من خلال ثلاث قراءات متميزة. هذه القراءات حساسة للغاية للاختلافات في عدد الصفائح الدموية وشدة التحفيز ومسارات التنشيط المحددة. كمنصة استشعار كهربائية بحتة ، تظهر MCS إمكانات كبيرة كأداة تشخيصية للكشف عن اضطرابات وظائف مرقئ الأولية ، وتقييم فعالية العلاجات العلاجية ، وتعزيز الفهم الأوسع لأدوار الصفائح الدموية في الإرقاء والتخثر.

Introduction

الصفائح الدموية ، خلايا الدم المتخصصة ، محورية في تنظيم استجابة مرقئ لوقف النزيف بعد الإصابة وفي تسهيل التئام الأوعيةالدموية 1. بالإضافة إلى ذلك ، فهي تعمل أيضا كوسطاء أساسيين في تجلط الدم ، وهو سبب رئيسي للوفيات المرتبطة بمرض الجلطات الدموية على مستوىالعالم 2،3،4،5،6. عند حدوث إصابة في الأوعية الدموية ، تخضع الصفائح الدموية لسلسلة من العمليات الوظيفية المعقدة والمنظمة ومتعددة المراحل. وتشمل هذه الالتصاق بالمصفوفة الحميمة ، وتدفق الكالسيوم داخل الخلايا مما يؤدي إلى تغيرات توافقية في الصفائح الدموية ، والتنشيط ، وإفراز الحبيبات ، والتجميع ، وتقلص الهيكل الخلوي ، مما يؤدي في النهاية إلى تشكيل وتثبيت سدادات مرقئ لإغلاق المواقع التالفة ومنع النزيف7،8. على الرغم من التقدم الكبير في الأدوية المضادة للصفيحات والاستراتيجيات العلاجية9،10،11 ، إلا أن خطر تجلط الدم لا يزال قائما. تمثل إدارة العلاج المضاد للصفيحات تحديات ، بما في ذلك خطر النزيف علاجي المنشأ ، وصعوبة تحقيق فعالية مضادة للتخثر مع الحفاظ على الإرقاء ، والتباين في استجابة المريض ، بما في ذلك مقاومة الأدوية12،13.

على الرغم من أن الآليات الجزيئية التي تحكم مراحل استجابة الصفائح الدموية موثقة جيدا ، إلا أن الطرق الحالية لاختبار وظيفة الصفائح الدموية لا تزال دون المستوى الأمثل. غالبا ما تكون الاختبارات التقليدية القائمة على المختبر قاصرة لأنها تقيم فقط جوانب محدودة من نشاط الصفائح الدموية في المرحلة المبكرة إلى المتوسطة ، مثل الالتصاق أو التجميع أو لزوجةالجلطة 7،14،15،16،17،18. يمكن أن يؤدي هذا التحليل الجزئي إلى عدم كفاية المعلومات. علاوة على ذلك ، لا تقدم هذه الاختبارات تقييما متزامنا ومستمرا وسريعا للعديد من العناصر الوظيفية الحاسمة للصفائح الدموية في اختبار واحد. وبالتالي ، فإن هذا القيد يعيق التقدم في كل من أمراض الدم السريرية والتجريبية. بمرور الوقت ، تم تطوير عدد كبير من أجهزة الاستشعار المعوقة أو السعوية لمختلف التطبيقات الطبية الحيوية19،20،21،22،23،24،25،26،27،28.

هنا ، نقدم بروتوكول تقييم وظيفة الصفائح الدموية متعددة الإرسال باستخدام مستشعر حيوي سعوي. يوفر النهج المقترح ميزة جذابة من خلال المراقبة الديناميكية بحساسية في مجموعة واسعة من وظائف الصفائح الدموية على المستوى الخلوي. يستخدم النهج المقدم مستشعر حيويا يتكون من شريحتين دقيقتين: شريحة سيليكون علوية ، يمكن التخلص منها ، وتتميز بعينة جيدة للبلازما الغنية بالصفائح الدموية الاستقراضية وقطب استشعار مطلي بفيبرونيكتين بشري لتسهيل التصاق الصفائح الدموية ، جنبا إلى جنب مع شريحة سيليكون سفلية قابلة لإعادة الاستخدام تحتوي على قطب مرجعي. يتيح القياس المستمر لتغيرات السعة الديناميكية أثناء عملية التخثر بأكملها ، بما في ذلك التصاق الصفائح الدموية ، والتنشيط ، وما بعد التنشيط ، التحليل الحساس المرتبط بالاختلافات في عدد الصفائح الدموية ، ومستويات تنشيط الصفائح الدموية ، وتثبيط مسارات التنشيط. تم عرض الجدوى السريرية وفائدة هذه الطريقة باستخدام عينات البلازما البشرية ذات الصلة ، مما يؤكد قدرتها على تقييم قوي لوظيفة الصفائح الدموية في البيئات السريرية.

Protocol

تمت الموافقة على اقتراح الدراسة من قبل قسم الموضوعات البشرية (HSD) في مجلس المراجعة الداخلية بجامعة واشنطن (UW-IRB; معرف الدراسة: STUDY00005211). قدم جميع الأشخاص المتطوعين الذين شاركوا في الدراسة موافقة خطية مستنيرة. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. خطوات تصنيع المستشعر السعوي الغشائي (MCS)

ملاحظة: تم تصنيع مستشعر MCS باستخدام تقنيات التصنيع الدقيق التقليدية. يتكون هذا المستشعر الحيوي من شريحة سعة غشائية علوية (T-) وسفلية (B-) (MCC). باختصار ، يتم عرض خطوات التصنيع في الشكل 1.

  1. خطوات التصنيع الدقيق ل T-MCC (الشكل 1 أ)
    1. صمم تخطيط T-MCC باستخدام برنامج تخطيط CAD القياسي لركيزة رقاقة السيليكون مقاس 4 بوصات.
    2. انقل التصميم إلى قناع ضوئي من زجاج الكروم باستخدام عملية تصنيع القناع القياسية29,30.
    3. على ركيزة سيليكون مصقولة نظيفة مزدوجة الجانب (بسمك 400 ميكرومتر) ، قم بإيداع سمك 500 نانومتر من Si3N4 باستخدام تقنية ترسيب البخار الكيميائي منخفض الضغط القياسية (LPCVD)31. معطف تدور 12 ميكرومتر من AZ 9260 مقاوم للضوء عند 2000 دورة في الدقيقة لمدة 25 ثانية باستخدام طلاء يدوي يدور.
    4. باستخدام تقنية الطباعة الحجرية الضوئية للأشعة فوق البنفسجيةالقياسية 32 ، قم بتصميم مقاومة الضوء ، والتي تتضمن تعريض المقاومة الضوئية باستخدام قناع ضوئي زجاجي من الكروم في محاذاة للأشعة فوق البنفسجية ، وتطوير المقاومة في حل مطور لإزالة المنطقة المعرضة للأشعة فوق البنفسجية من المقاومة.
    5. قم بتصميم طبقة نيتريد السيليكون الأساسية بسماكة 500 نانومتر باستخدام عملية نقش أيوني تفاعلية ، والتي تعرض ركيزة السيليكون.
    6. قم بإزالة ركيزة السيليكون المكشوفة بسمك 400 ميكرومتر باستخدام عملية Bosch القياسية: عملية Si Etch Ion Reaction العميقة33.
    7. احسب العدد المطلوب من دورات الحفر لإزالة 400 ميكرومتر من السيليكون.
      ملاحظة: سيختلف هذا اعتمادا على الأداة المستخدمة في العملية ، لأنها ستؤثر على معدل الحفر (في هذه الحالة ، كان 1.8 ميكرومتر / دورة).
    8. لمنع النقش عن طريق الخطأ في طبقة Si3N4 ، أوقف النقش الجاف بمقدار 10 ميكرومتر على الأقل من قبل (أي عند 390 ميكرومتر). قم بإزالة السيليكون المتبقي باستخدام KOH التقليدي عالي الانتقائية عند 80 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    9. قم بإيداع 20 نانومتر من الكروم و 150 نانومتر من طبقات معدن Au على التوالي باستخدام عملية تبخر الشعاعالإلكتروني 34 وقناع الظل لتصنيع قطب الاستشعار في T-MCC.
    10. في هذه المرحلة ، سيتم توصيل T-MCCs في الرقاقة بواسطة حوامل سيليكون صغيرة. افصل T-MCCs عن طريق ثقب الحوامل الصغيرة بعناية.
  2. خطوات التصنيع الدقيق ل B-MCC (الشكل 1 ب)
    1. على ركيزة سيليكون نظيفة مؤكسدة حراريا (بسمك 400 ميكرومتر) ، قم بإيداع طبقات معدنية Cr / Au (20 نانومتر ، 150 نانومتر) باستخدام قناع الظل ، على غرار الخطوة 1.1.9.
    2. استخدم الطباعة الحجرية الضوئيةالقياسية 32 مع محاذاة المؤخرة ، متبوعة بخطوة النقش الرطب KOH لتحرير B-MCCs.
      ملاحظة: يحتوي كل من T- و B-MCC على وسادات تلامس مقاس 2.5 × 1.5 سم.

2. الوظيفة الحيوية للمستشعر السعوي

ملاحظة: باختصار ، تتعلق هذه الخطوة بطلاء قطب T-MCC ب Human Fibronectin (Fn) لتسهيل توصيل الصفائح الدموية بالمستشعر.

  1. قبل الطلاء الجزيئي الحيوي ، قم بتنظيف قطب الاستشعار ببلازما الأكسجين لمدة 45 ثانية عند 100 واط.
  2. أضف 1-دوديكانيثيول (1 ملليمتر) في الإيثانول 200 إلى العينة جيدا على T-MCCs.
  3. ضع T-MCCs في وعاء مملوء بالنيتروجين الجاف ، محكم الغلق ، وملفوف بالبارافيلم لمدة 24-48 ساعة.
  4. اشطف سطح الذهب بالماء منزوع الأيونات والإيثانول 200 ، متبوعا بتجفيف النيتروجين في درجة حرارة الغرفة. في هذه المرحلة ، قم بتخزين المستشعرات عند 2-8 درجة مئوية في جو نيتروجين جاف حتى الخطوات التالية.
  5. أضف محلول Fn في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS ، 50 ميكروغرام / مل) إلى البئر قبل 12 ساعة من القياس واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 2-8 ساعات.

3. إعداد مستشعر السعة

ملاحظة: يمثل الشكل 2 صورة الإعداد التجريبي.

  1. استخدم مقياس LCR مع محددات الموضع الدقيقة ومجسات الإبرة لإجراء اتصال كهربائي بالمستشعر.
  2. استخدم تركيبات بلاستيكية مطبوعة ثلاثية الأبعاد (انظر جدول المواد) لوضع T- و B-MCC بشكل آمن. تم تجهيز التركيبات السفلية بسدادات على المحور xy لضمان محاذاة دقيقة ل T-MCC فوق B-MCC لتشكيل مكثف.
    ملاحظة: جميع الطابعات ثلاثية الأبعاد المستخدمة كانت من جامعة واشنطن.
  3. قم بتطبيق إشارة جيبية (0.5 فولت) عند 100 كيلو هرتز ومعدل أخذ عينات 8 هرتز.

4. تحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية (c-PRP)

ملاحظة: كانت جميع عينات الدم من متطوعين شاركوا في هذا البحث. لم يكن لدى أي من المشاركين شذوذ أو اضطراب تخثر معروف سابقا في الصفائح الدموية ، ولم يتناولوا أي أدوية للصفائح الدموية ، بما في ذلك الأدوية غير الستيرويدية المضادة للالتهابات (NSAIDs) ، في الأسبوعين اللذين سبقا جمع العينات. أجرى أخصائي الفصد المرخص سحب دم باستخدام إبرة 21 جم إلى أنابيب سترات قياسية 3.2٪. تم التخلص من أول 1 مل لتجنب تلوث عامل الأنسجة. تم نقل العينات في حاوية من البوليسترين ، وتم إجراء جميع القياسات في غضون 6 ساعات من سحب الدم.

  1. الطرد المركزي عينة الدم الكاملة عند 200 × جم لمدة 10 دقائق عند 20 درجة مئوية للحصول على c-PRP.
  2. انقل c-PRP إلى حاوية معقمة وقم بإجراء عدد الصفائح الدموية. بالنسبة لدراسات المثبطات ، احتضن c-PRP بتركيز محدد مسبقا للدواء في المخزن المؤقت ل Tyrode (انظر قسم النتائج للحصول على التفاصيل).

5. الفحص الوظيفي للصفائح الدموية

ملاحظة: يظهر التخطيطي للمقايسة الوظيفية للصفائح الدموية المقدمة في الشكل 3.

  1. قم بتجميع T- و B-MCC في التركيبات المطبوعة ثلاثية الأبعاد.
  2. قم بقياس قياس السعة الأساسية لمدة 5 دقائق ، ثم أضف 45 ميكرولتر من c-PRP إلى العينة جيدا في T-MCC.
  3. انتظر لمدة 30 دقيقة حتى تلتصق الصفائح الدموية بالقطب المطلي بالجبهة الوطنية في T-MCC.
  4. قم بإزالة 30 ميكرولتر من c-PRP بعناية دون لمس الصفائح الدموية المتصلة بالغشاء ، وقم بتجديدها على الفور باستخدام عازلة Tyrode. كرر الغسيل 5 مرات على الأقل بفاصل زمني 20 ثانية لضمان عدم هبوط الصفائح الدموية أو الركام الكبير الإضافي على قطب الاستشعار بعد التنشيط.
  5. أضف 10 ميكرولتر من المحلول الناهض (الثرومبين أو ADP) بالتركيز المطلوب. اترك 80 دقيقة من وقت التوازن.

6. البيانات والتحليل الإحصائي لعلامات الإشارة

ملاحظة: يتم قياس السعة بشكل مستمر من الخطوات 5.2-5.5.

  1. بالنسبة لإشارة السعة أثناء مرحلة الالتصاق (الخطوة 5.3) ، قم بقياس الحد الأقصى للتغيير في السعة بعد وقت التوازن البالغ 30 دقيقة ، والذي يشار إليه باسم ΔCadh.
  2. وبالمثل ، بالنسبة لمرحلة التنشيط (الخطوة 5.5) ، قم بقياس الحد الأقصى للتغيير في السعة ، والذي يشار إليه باسم Δ C act ، وميل المنحنى بين 200-300 ثانية بعد التنشيط ، والذي يشار إليه باسم S act.
  3. استخدم تحليل التباين (ANOVA) مع Post-hoc الخاص ب Tukey لمقارنة النتائج بين المجموعات. استخدم Shapiro-Wilk Goodness of Fit لتحليل التوزيع الطبيعي.

النتائج

تهدف هذه الدراسة إلى إجراء تقييم ديناميكي لوظيفة الصفائح الدموية. باتباع البروتوكول الموضح أعلاه ، تم تحضير محلول c-PRP ، وتم زرع الصفائح الدموية على القطب الكهربائي المطلي بالجبهة الوطنية في T-MCC. تم غسل الصفائح الدموية العائمة بحرية من خلال خطوة الغسيل ، وتمت إضافة ناهض ل...

Discussion

كانت هذه الدراسة رائدة في طريقة جديدة قائمة على السعة لتقييم وظيفة الصفائح الدموية ، والتي تقيم كلا من ديناميكيات الصفائح الدموية الالتصاقية وما بعد التنشيط داخل جهاز واحد ، مما يمثل أول مثال تم الإبلاغ عنه لمثل هذا النهج. يقدم البروتوكول التجريبي الجديد تقنية مباشرة ن?...

Disclosures

ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح متضاربة.

Acknowledgements

يعرب المؤلفون عن امتنانهم للدكتور موريتز ستولا والدكتور جيسون أكير على مناقشاتهما القيمة ومساعدتهما الفنية. كما أنهم يعترفون بمرفق التصوير البيولوجي في جامعة واشنطن لبنيتها التحتية ودعمها. تلقى هذا العمل تمويلا جزئيا من صندوق CoMotion للابتكار في جامعة واشنطن (المنحة رقم 682548 ، D.Y.G.).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1-DodecanethiolSigma-Aldrich, MO, U.S.A471364-100ML1 mM
200-proof ethanolSigma-Aldrich, MO, U.S.AEX0276-1
3D printerShenzhen Creality 3D Technology Co, Ltd.Ender-3 V3
3D printing materialHATCHBOX 3D, CA, U.S.A3D PLA-1KG-1.75
Adenosine 5′-diphosphateSigma Aldrich, U.S.A01905-250MG-FADP
Aspirin Sigma-Aldrich, MO, U.S.AA2093-100G
Deep Reactive Ion EtchingOmega Engineering, Inc.SPTS Rapier DRIE
Dimethyl SulfoxideSigma-Aldrich, MO, U.S.AD8418-50MLDMSO
High Vacuum Deposition SystemsCHA SEC-600
Human FibronectinSigma-Aldrich, MO, U.S.ACLS356008-1EAFn
KOHSigma-Aldrich, MO, U.S.AP1767-250G
LCR meter Keithley Instruments, Inc., OH, U.S.AKeithley EL 4980AL
LCR meter holdersSignatone Corporation, CA, U.S.ASCA-50-4
Mask Aligner SystemABM, U.S.A, Inc.ABM/6/350/NUV/DCCD/SA
Micro-positionersSignatone, CA, U.S.AS-725
needle probeSignatone Corporation, CA, U.S.ASCAT5T-412.5 μm radius
Phosphate Buffered SalineSigma-Aldrich, MO, U.S.AP4474-1LPBS, pH 7.4
Reactive Ion EtchingPlasma-Therm,U.S.ARIE Vision 320
silicon substrateWafer World IncSKU# 1766
Standard 3.2% citrate tubesTiger Medical, NJ, U.S.A.Covidien / Cardinal Health 8881340478 Monoject
ThrombinEnzyme Research Laboratories, U.S.AHT 1002a
TicagrelorSigma-Aldrich, MO, U.S.APHR2788-400MG
Tyrode’s bufferBoston Bioproducts, U.S.ABSS-375
UV photoresistAZ electronic materials, NC, U.S.A.AZ 926015um

References

  1. George, J. N. Platelets. Lancet. 355 (9214), 1531-1539 (2000).
  2. Wendelboe, A. M., Raskob, G. E. Global burden of thrombosis: Epidemiologic aspects. Circ Res. 118 (9), 1340-1347 (2016).
  3. Heit, J. A. Epidemiology of venous thromboembolism. Nat Rev Cardiol. 12 (8), 464-474 (2015).
  4. Moran, A. E., et al. The global burden of ischemic heart disease in 1990 and 2010: The global burden of disease 2010 study. Circulation. 129 (14), 1493-1501 (2014).
  5. Campbell, B. C. V., et al. Ischaemic stroke. Nat Rev Dis Primers. 5 (1), 70 (2019).
  6. Ruggeri, Z. M. Platelets in atherothrombosis. Nat Med. 8 (11), 1227-1234 (2002).
  7. Harrison, P. Platelet function analysis. Blood Rev. 19 (2), 111-123 (2005).
  8. Van Der Meijden, P. E. J., Heemskerk, J. W. M. Platelet biology and functions: New concepts and clinical perspectives. Nat Rev Cardiol. 16 (3), 166-179 (2019).
  9. Bhatt, D. L., Topol, E. J. Scientific and therapeutic advances in antiplatelet therapy. Nat Rev Drug Discov. 2 (1), 15-28 (2003).
  10. Mcfadyen, J. D., Schaff, M., Peter, K. Current and future antiplatelet therapies: Emphasis on preserving hemostasis. Nat Rev Cardiol. 15 (3), 181-191 (2018).
  11. Michelson, A. D. Advances in antiplatelet therapy. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2011, 62-69 (2011).
  12. Sweeny, J. M., Gorog, D. A., Fuster, V. Antiplatelet drug 'resistance'. Part 1: Mechanisms and clinical measurements. Nat Rev Cardiol. 6 (4), 273-282 (2009).
  13. Mega, J. L., Simon, T. Pharmacology of antithrombotic drugs: An assessment of oral antiplatelet and anticoagulant treatments. Lancet. 386 (9990), 281-291 (2015).
  14. Carr, M. E. Development of platelet contractile force as a research and clinical measure of platelet function. Cell Biochem Biophys. 38 (1), 55-78 (2003).
  15. Gresele, P., Bury, L., Mezzasoma, A. M., Falcinelli, E. Platelet function assays in diagnosis: An update. Expert Rev Hematol. 12 (1), 29-46 (2019).
  16. Pakala, R., Waksman, R. Currently available methods for platelet function analysis: Advantages and disadvantages. Cardiovasc Revasc Med. 12 (5), 312-322 (2011).
  17. Paniccia, R., Priora, R., Liotta, A. A., Abbate, R. Platelet function tests: A comparative review. Vasc Health Risk Manag. 11, 133-148 (2015).
  18. Rand, M. L., Leung, R., Packham, M. A. Platelet function assays. Transfus Apher Sci. 28 (3), 307-317 (2003).
  19. Alafeef, M., Dighe, K., Moitra, P., Pan, D. Rapid, ultrasensitive, and quantitative detection of sars-cov-2 using antisense oligonucleotides directed electrochemical biosensor chip. ACS Nano. 14 (12), 17028-17045 (2020).
  20. Chowdhury, A. D., Takemura, K., Li, T. C., Suzuki, T., Park, E. Y. Electrical pulse-induced electrochemical biosensor for hepatitis e virus detection. Nat Commun. 10 (1), 3737 (2019).
  21. Park, J. H., et al. Capacitive biosensor based on vertically paired electrodes for the detection of sars-cov-2. Biosens Bioelectron. 202, 113975 (2022).
  22. Qureshi, A., Pandey, A., Chouhan, R. S., Gurbuz, Y., Niazi, J. H. Whole-cell based label-free capacitive biosensor for rapid nanosize-dependent toxicity detection. Biosens Bioelectron. 67, 100-106 (2015).
  23. Rassaei, L., Mathwig, K., Kang, S., Heering, H. A., Lemay, S. G. Integrated biodetection in a nanofluidic device. ACS Nano. 8 (8), 8278-8284 (2014).
  24. Wang, L., et al. A sensitive DNA capacitive biosensor using interdigitated electrodes. Biosens Bioelectron. 87, 646-653 (2017).
  25. Zhurauski, P., et al. Sensitive and selective affimer-functionalized interdigitated electrode-based capacitive biosensor for her4 protein tumor biomarker detection. Biosens Bioelectron. 108, 1-8 (2018).
  26. Pourang, S., et al. Assessment of fibrinolytic status in whole blood using a dielectric coagulometry microsensor. Biosens Bioelectron. 210, 114299 (2022).
  27. Sekar, P. K., et al. Simultaneous multiparameter whole blood hemostasis assessment using a carbon nanotube-paper composite capacitance sensor. Biosens Bioelectron. 197, 113786 (2022).
  28. P, K. S., et al. Comprehensive multiparameter evaluation of platelet function using a highly sensitive membrane capacitance sensor. Biosens Bioelectron. 228, 115192 (2023).
  29. Franssila, S. . Introduction to microfabrication. , (2010).
  30. Syed Rizvi, S. R. . Handbook of photomask manufacturing technology. , (2018).
  31. Yota, J., Hander, J., Saleh, A. A. A comparative study on inductively-coupled plasma high-density plasma, plasma-enhanced, and low pressure chemical vapor deposition silicon nitride films. J Vacuum Sci Technol A. 18 (2), 372-376 (2000).
  32. Thompson, L. F. An introduction to lithography. ACS Symp Series. 219, 1-13 (1983).
  33. Laermer, F., Urban, A. Challenges, developments and applications of silicon deep reactive ion etching. Microelectron Eng. 67 - 8, 349-355 (2003).
  34. Harsha, K. S. . Principles of vapor deposition of thin films. , (2005).
  35. Lea-Henry, T. N., Carland, J. E., Stocker, S. L., Sevastos, J., Roberts, D. M. Clinical pharmacokinetics in kidney disease: Fundamental principles. Clin J Am Soc Nephrol. 13 (7), 1085-1095 (2018).
  36. Offermanns, S. Activation of platelet function through g protein-coupled receptors. Circ Res. 99 (12), 1293-1304 (2006).
  37. Trejo-Velasco, B., et al. Impact of comorbidities and antiplatelet regimen on platelet reactivity levels in patients undergoing transcatheter aortic valve implantation. J Cardiovasc Pharmacol. 78 (3), 463-473 (2021).
  38. Violi, F., Pignatelli, P., Basili, S. Nutrition, supplements, and vitamins in platelet function and bleeding. Circulation. 121 (8), 1033-1044 (2010).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved