JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Kapasitif bir biyosensör kullanan yeni bir dinamik çok parametreli trombosit fonksiyonel testi için bir protokol burada sunulmaktadır. Fizyolojik alaka düzeyini artırmak için yarı katı bir mikro ortam içinde tasarlanan bu yaklaşım, trombosit sayısına, stimülasyon güçlerine ve aktivasyon yollarına duyarlı üç çıktı parametresi sağlar.

Özet

Trombositler, yapışma, yayılma, granüler sekresyon, agregasyon ve hücre iskeleti kasılması dahil olmak üzere bir dizi düzenlenmiş yanıt yoluyla kanın pıhtılaşmasında temel bir rol oynar. Bununla birlikte, mevcut tahliller, fizyolojik olmayan koşullar altında trombosit fonksiyonunun kısmi analizi ile sınırlıdır. Bu nedenle, fizyolojik ortamlarda trombosit fonksiyonunun dinamik ve çok yönlü doğasını yansıtan gelişmiş bir test gereklidir. Bu bağlamda, geleneksel tahlillere kıyasla fizyolojik olarak daha ilgili ex vivo yarı sert bir mikro ortamda trombosit fonksiyonu ile ilgili birkaç anahtar parametreyi ölçmek için yeni bir yaklaşım tanıtılmıştır. Bu yöntem, üç farklı okuma yoluyla pıhtılaşma sürecine ilişkin benzersiz bilgiler sağlayan gelişmiş bir elektrikli biyosensör olan membran kapasitans sensörünü (MCS) kullanır. Bu okumalar, trombosit sayısı, stimülasyon yoğunluğu ve spesifik aktivasyon yollarındaki değişikliklere karşı oldukça hassastır. Tamamen elektriksel bir algılama platformu olarak MCS, primer hemostatik fonksiyon bozukluklarını tespit etmek, terapötik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek ve trombositlerin hemostaz ve trombozdaki rollerinin daha geniş bir şekilde anlaşılmasını sağlamak için bir tanı aracı olarak önemli bir potansiyel göstermektedir.

Giriş

Özel kan hücreleri olan trombositler, yaralanmayı takiben kanamayı durdurmak için hemostatik yanıtı düzenlemede ve kan damarlarının iyileşmesini kolaylaştırmada çok önemlidir1. Ek olarak, küresel olarak tromboembolik hastalığa bağlı ölümlerin önde gelen nedenlerinden biri olan trombozda da çok önemli aracılar olarak hizmet ederler 2,3,4,5,6. Vasküler bir yaralanma meydana geldiğinde, trombositler bir dizi karmaşık, düzenlenmiş ve çok aşamalı fonksiyonel süreçten geçer. Bunlar, intimal matrise yapışmayı, trombosit konformasyon değişikliklerini tetikleyen hücre içi kalsiyum akışını, aktivasyonu, granül salgılanmasını, agregasyonu ve hücre iskeleti kasılmasını, sonuçta hasarlı bölgeleri kapatmak ve kanamayı önlemek için hemostatik tıkaçların oluşturulmasını ve stabilize edilmesini içerir 7,8. Antiplatelet ilaçlar ve terapötik stratejilerdeki önemli gelişmelere rağmen 9,10,11, tromboz riski devam etmektedir. Antiplatelet tedavi yönetimi, iyatrojenik kanama riski, hemostazı sürdürürken antitrombotik etkinlik elde etmede zorluk ve ilaç direnci de dahil olmak üzere hasta yanıtında değişkenlik gibi zorluklar sunar12,13.

Trombosit yanıt fazlarını yöneten moleküler mekanizmalar iyi belgelenmiş olsa da, trombosit fonksiyonunu test etmek için mevcut yöntemler yetersiz kalmaktadır. Geleneksel laboratuvar tabanlı testler, yapışma, agregasyon veya pıhtı viskozitesi 7,14,15,16,17,18 gibi erken ve orta evre trombosit aktivitesinin yalnızca sınırlı yönlerini değerlendirdikleri için genellikle yetersiz kalır. Bu kısmi analiz yetersiz bilgiye yol açabilir. Ayrıca, bu testler tek bir tahlilde birden fazla önemli trombosit fonksiyonel unsurunun eşzamanlı, sürekli ve hızlı bir şekilde değerlendirilmesini sağlamaz. Sonuç olarak, bu sınırlama hem klinik hem de deneysel hematolojideki ilerlemeleri engellemektedir. Zamanla, çeşitli biyomedikal uygulamalar için çok sayıda impedimetrik veya kapasitif sensör geliştirilmiştir 19,20,21,22,23,24,25,26,27,28.

Burada, kapasitif bir biyosensör kullanılarak çoğullanmış trombosit fonksiyon değerlendirmesi için protokolü sunuyoruz. Önerilen yaklaşım, hücresel düzeyde geniş bir trombosit fonksiyon spektrumundaki dinamik değişiklikleri hassas bir şekilde izleyerek çekici bir özellik sunmaktadır. Sunulan yaklaşım, iki mikroçipten oluşan bir biyosensör kullanır: sitratlı trombositten zengin plazma için bir numune kuyusu ve trombosit yapışmasını kolaylaştırmak için insan Fibronektini ile kaplanmış bir algılama elektrotu içeren tek kullanımlık bir üst silikon çip ve bir referans elektrodu barındıran yeniden kullanılabilir bir alt silikon çip. Trombosit yapışması, aktivasyonu ve aktivasyon sonrasını kapsayan tüm pıhtılaşma süreci boyunca dinamik kapasitans değişikliklerinin sürekli ölçümü, trombosit sayımlarındaki varyasyonlar, trombosit aktivasyon seviyeleri ve aktivasyon yollarının inhibisyonu ile bağlantılı hassas analizlere olanak tanır. Bu yöntemin klinik fizibilitesi ve kullanışlılığı, ilgili insan plazma örnekleri kullanılarak gösterildi ve klinik ortamlarda sağlam trombosit fonksiyonu değerlendirmesi potansiyelinin altını çizdi.

Protokol

Çalışma önerisi, Washington Üniversitesi İç İnceleme Kurulu'ndaki (UW-IRB) İnsan Denekleri Bölümü (HSD) tarafından onaylandı; Çalışma ID: STUDY00005211). Çalışmaya katılan tüm gönüllü denekler yazılı bilgilendirilmiş onam verdiler. Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Membran kapasitif sensör (MCS) için üretim adımları

NOT: MCS sensörü, geleneksel mikrofabrikasyon teknikleri kullanılarak üretilmiştir. Bu biyosensör, bir üst (T-) ve alt (B-) membran kapasitans çipinden (MCC) oluşuyordu. Kısaca imalat aşamaları Şekil 1'de gösterilmiştir.

  1. T-MCC için mikrofabrikasyon adımları (Şekil 1A)
    1. 4 inçlik bir silikon gofret alt tabakası için standart CAD yerleşim yazılımını kullanarak T-MCC'nin düzenini tasarlayın.
    2. Standart maske üretim sürecini29,30 kullanarak tasarımı bir krom cam fotomaske üzerine aktarın.
    3. Temiz, çift taraflı cilalı silikon alt tabaka (400μm kalınlığında) üzerinde, standart düşük basınçlı kimyasal buhar biriktirme (LPCVD) tekniğini31 kullanarak 500 nm kalınlığında Si3N4 biriktirin. Manuel bir sıkma kaplayıcı kullanarak 25 s boyunca 2000 rpm'de 12 μm AZ 9260 fotorezist sıkın.
    4. Standart UV fotolitografi tekniğini32 kullanarak, fotorezistin bir UV hizalayıcıda krom cam fotomaske ile açığa çıkarılmasını ve direncin UV'ye maruz kalan bölgesini çıkarmak için direncin bir geliştirici solüsyonda geliştirilmesini içeren fotorezisti modelleyin.
    5. Altta yatan 500 nm kalınlığındaki silikon nitrür katmanını, silikon alt tabakayı açığa çıkaran reaktif bir iyon aşındırma işlemi kullanarak modelleyin.
    6. Açıkta kalan 400μm kalınlığındaki silikon alt tabakayı standart bir Bosch işlemi kullanarak çıkarın: Derin Reaktif İyon Si Aşındırma işlemi33.
    7. 400 μm silikonu çıkarmak için istenen aşındırma döngüsü sayısını hesaplayın.
      NOT: Bu, aşındırma oranını etkileyeceği için işlem için kullanılan alete bağlı olarak değişecektir (bu durumda 1,8 μm/döngü idi).
    8. Si3N4 tabakasının yanlışlıkla aşındırılmasını önlemek için, kuru aşındırmayı en az 10 μm önce (yani 390 μm'de) durdurun. Kalan silikonu, 5 dakika boyunca 80 ° C'de geleneksel oldukça seçici KOH kullanarak çıkarın.
    9. T-MCC'de algılama elektrodunu imal etmek için bir E-ışını buharlaştırma işlemi34 ve bir gölge maskesi kullanarak art arda 20 nm Cr ve 150 nm Au metal katmanları biriktirin.
    10. Bu aşamada, yonga plakasındaki T-MCC'ler küçük silikon tutucularla bağlanacaktır. Küçük tutucuları dikkatlice delerek T-MCC'leri ayırın.
  2. B-MCC için mikrofabrikasyon adımları (Şekil 1B)
    1. Temiz, termal olarak oksitlenmiş bir silikon substrat (400μm kalınlığında) üzerinde, adım 1.1.9'a benzer şekilde bir gölge maskesi kullanarak Cr/Au (20 nm, 150 nm) metal katmanları biriktirin.
    2. B-MCC'leri serbest bırakmak için arka hizalamalı standart fotolitografi32'yi ve ardından bir KOH ıslak aşındırma adımını kullanın.
      NOT: T ve B-MCC'de 2.5 x 1.5 cm temas pedleri bulunur.

2. Kapasitif sensörün biyofonksiyonelleştirilmesi

NOT: Kısaca bu adım, trombositin sensöre bağlanmasını kolaylaştırmak için T-MCC elektrodunun İnsan Fibronektini (Fn) ile kaplanması ile ilgilidir.

  1. Biyomoleküler kaplamalardan önce, algılama elektrodunu 100 W'ta 45 saniye boyunca oksijen plazması ile temizleyin.
  2. T-MCC'lerdeki numune kuyucuğuna 200 geçirmez etanol içinde 1-Dodekanetiol (1 mM) ekleyin.
  3. T-MCC'leri kuru nitrojenle doldurulmuş, sızdırmaz hale getirilmiş ve 24-48 saat boyunca parafilm ile sarılmış bir kaba koyun.
  4. Altın yüzeyi deiyonize su ve 200 geçirmez etanol ile durulayın, ardından oda sıcaklığında nitrojen kurutun. Bu aşamada, sensörleri bir sonraki adımlara kadar kuru bir nitrojen atmosferinde 2-8 °C'de saklayın.
  5. Ölçümden 12 saat önce kuyuya fosfat tamponlu tuzlu su içinde (PBS, 50 μg/mL) Fn çözeltisi ekleyin ve 37 ° C'de 2-8 saat inkübe edin.

3. Kapasitans sensörü kurulumu

NOT: Şekil 2 , deney düzeneğinin fotoğrafını temsil etmektedir.

  1. Sensörle elektrik teması kurmak için mikro konumlandırıcılara ve iğne problarına sahip bir LCR ölçer kullanın.
  2. T ve B-MCC'yi güvenli bir şekilde yerleştirmek için 3D baskılı plastik armatürler ( Malzeme Tablosuna bakın) kullanın. Alt fikstür, bir kondansatör oluşturmak için T-MCC'nin B-MCC üzerinde hassas bir şekilde hizalanmasını sağlamak için xy ekseninde durdurucularla donatılmıştır.
    NOT: Kullanılan tüm 3D yazıcılar Washington Üniversitesi'ndendi.
  3. 0.5 kHz'de sinüzoidal bir sinyal (100 V) ve 8 Hz örnekleme hızı uygulayın.

4. Sitratlı trombositten zengin plazma (c-PRP) hazırlanması

NOT: Tüm kan örnekleri bu araştırmaya katılan gönüllülerden alınmıştır. Katılımcıların hiçbirinde daha önce bilinen bir trombosit anormalliği veya pıhtılaşma bozukluğu yoktu ve numune toplamaya kadar geçen iki hafta içinde Steroid Olmayan Antienflamatuar İlaçlar (NSAID'ler) dahil olmak üzere herhangi bir trombosit ilacı almamışlardı. Lisanslı bir flebotomist, standart% 3.2 sitrat tüplerine 21 G'lik bir iğne kullanarak kan alımı yaptı. Doku faktörü kontaminasyonunu önlemek için ilk 1 mL atıldı. Numuneler polistiren bir kapta taşındı ve tüm ölçümler kan alımından sonraki 6 saat içinde yapıldı.

  1. C-PRP elde etmek için tam kan örneğini 200 ° C'de 10 dakika boyunca 200 x g'da santrifüjleyin.
  2. C-PRP'yi steril bir kaba aktarın ve trombosit sayımını yapın. İnhibitör çalışmaları için, c-PRP'yi Tyrode tamponunda ilacın önceden tanımlanmış bir konsantrasyonu ile inkübe edin (ayrıntılar için Sonuçlar bölümüne bakın).

5. Trombosit fonksiyonel tahlili

NOT: Sunulan trombosit fonksiyonel testi için şematik Şekil 3'te gösterilmiştir.

  1. T ve B-MCC'yi 3D baskılı armatürlere monte edin.
  2. Temel kapasitans ölçümünü 5 dakika boyunca ölçün, ardından T-MCC'deki numune kuyucuğuna 45 μL c-PRP ekleyin.
  3. Trombositlerin T-MCC'deki Fn kaplı elektroda yapışması için 30 dakika bekleyin.
  4. Membrana bağlı trombositlere dokunmadan 30 μL c-PRP'yi dikkatlice çıkarın ve hemen Tyrode tamponu ile doldurun. Aktivasyondan sonra algılama elektroduna ek trombosit veya makro agrega gelmediğinden emin olmak için yıkamayı 20 saniye arayla en az 5 kez tekrarlayın.
  5. İstenilen konsantrasyonda 10 μL agonist solüsyon (Trombin veya ADP) ekleyin. 80 dakikalık dengeleme süresine izin verin.

6. Sinyal işaretleri için veri ve istatistiksel analiz

NOT: Kapasitans, 5.2-5.5 adımlarından itibaren sürekli olarak ölçülür.

  1. Yapışma fazı sırasında kapasitans sinyali için (adım 5.3), ΔCadh olarak adlandırılan 30 dakikalık dengeleme süresinden sonra kapasitanstaki maksimum değişikliği ölçün.
  2. Benzer şekilde, aktivasyon aşaması için (adım 5.5), ΔCeylemi olarak adlandırılan kapasitanstaki maksimum değişikliği ve aktivasyondan sonra 200-300 s arasındaki eğrinin eğimini ölçün, bu da Syasası olarak adlandırılır.
  3. Gruplar arasındaki sonuçları karşılaştırmak için Tukey'in post-hoc ile varyans analizi (ANOVA) kullanın. Normal dağılım analizi için Shapiro-Wilk Goodness of Fit'i kullanın.

Sonuçlar

Bu çalışmanın amacı trombosit fonksiyonunun dinamik bir değerlendirmesini yapmaktır. Yukarıda tarif edilen protokolü takiben, c-PRP çözeltisi hazırlandı ve trombositler T-MCC'de Fn kaplı elektrot üzerine tohumlandı. Serbest yüzen trombositler yıkama aşaması ile yıkandı ve bağlı trombositleri aktive etmek için bir agonist eklendi. Ayrıntılı sonuçlar ve tartışma önceki raporumuzda bulunabilir28.

Tartışmalar

Bu çalışma, tek bir cihazda hem yapışmayı hem de aktivasyon sonrası trombosit dinamiklerini değerlendiren trombosit fonksiyonunu değerlendirmek için yeni bir kapasitans tabanlı yönteme öncülük etti ve böyle bir yaklaşımın ilk bildirilen örneğini işaret etti. Yeni deneysel protokol, bir yıkama prosedürü yoluyla fibrin oluşumu ve plazma pıhtılaşma faktörlerinin etkilerine karşı koymak için nispeten basit bir teknik sunar. Bu, trombosit fonksiyonunu etkileye...

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rekabet çıkarı beyan etmezler.

Teşekkürler

Yazarlar, değerli tartışmaları ve teknik yardımları için Dr. Moritz Stolla ve Dr. Jason Acker'e şükranlarını sunarlar. Ayrıca Washington Üniversitesi'ndeki Biyoloji Görüntüleme Tesisine altyapısı ve desteği için teşekkür ederler. Bu çalışma, Washington Üniversitesi'ndeki CoMotion İnovasyon Fonu'ndan kısmi fon aldı (Hibe No. 682548, DYG).

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
1-DodecanethiolSigma-Aldrich, MO, U.S.A471364-100ML1 mM
200-proof ethanolSigma-Aldrich, MO, U.S.AEX0276-1
3D printerShenzhen Creality 3D Technology Co, Ltd.Ender-3 V3
3D printing materialHATCHBOX 3D, CA, U.S.A3D PLA-1KG-1.75
Adenosine 5′-diphosphateSigma Aldrich, U.S.A01905-250MG-FADP
Aspirin Sigma-Aldrich, MO, U.S.AA2093-100G
Deep Reactive Ion EtchingOmega Engineering, Inc.SPTS Rapier DRIE
Dimethyl SulfoxideSigma-Aldrich, MO, U.S.AD8418-50MLDMSO
High Vacuum Deposition SystemsCHA SEC-600
Human FibronectinSigma-Aldrich, MO, U.S.ACLS356008-1EAFn
KOHSigma-Aldrich, MO, U.S.AP1767-250G
LCR meter Keithley Instruments, Inc., OH, U.S.AKeithley EL 4980AL
LCR meter holdersSignatone Corporation, CA, U.S.ASCA-50-4
Mask Aligner SystemABM, U.S.A, Inc.ABM/6/350/NUV/DCCD/SA
Micro-positionersSignatone, CA, U.S.AS-725
needle probeSignatone Corporation, CA, U.S.ASCAT5T-412.5 μm radius
Phosphate Buffered SalineSigma-Aldrich, MO, U.S.AP4474-1LPBS, pH 7.4
Reactive Ion EtchingPlasma-Therm,U.S.ARIE Vision 320
silicon substrateWafer World IncSKU# 1766
Standard 3.2% citrate tubesTiger Medical, NJ, U.S.A.Covidien / Cardinal Health 8881340478 Monoject
ThrombinEnzyme Research Laboratories, U.S.AHT 1002a
TicagrelorSigma-Aldrich, MO, U.S.APHR2788-400MG
Tyrode’s bufferBoston Bioproducts, U.S.ABSS-375
UV photoresistAZ electronic materials, NC, U.S.A.AZ 926015um

Referanslar

  1. George, J. N. Platelets. Lancet. 355 (9214), 1531-1539 (2000).
  2. Wendelboe, A. M., Raskob, G. E. Global burden of thrombosis: Epidemiologic aspects. Circ Res. 118 (9), 1340-1347 (2016).
  3. Heit, J. A. Epidemiology of venous thromboembolism. Nat Rev Cardiol. 12 (8), 464-474 (2015).
  4. Moran, A. E., et al. The global burden of ischemic heart disease in 1990 and 2010: The global burden of disease 2010 study. Circulation. 129 (14), 1493-1501 (2014).
  5. Campbell, B. C. V., et al. Ischaemic stroke. Nat Rev Dis Primers. 5 (1), 70 (2019).
  6. Ruggeri, Z. M. Platelets in atherothrombosis. Nat Med. 8 (11), 1227-1234 (2002).
  7. Harrison, P. Platelet function analysis. Blood Rev. 19 (2), 111-123 (2005).
  8. Van Der Meijden, P. E. J., Heemskerk, J. W. M. Platelet biology and functions: New concepts and clinical perspectives. Nat Rev Cardiol. 16 (3), 166-179 (2019).
  9. Bhatt, D. L., Topol, E. J. Scientific and therapeutic advances in antiplatelet therapy. Nat Rev Drug Discov. 2 (1), 15-28 (2003).
  10. Mcfadyen, J. D., Schaff, M., Peter, K. Current and future antiplatelet therapies: Emphasis on preserving hemostasis. Nat Rev Cardiol. 15 (3), 181-191 (2018).
  11. Michelson, A. D. Advances in antiplatelet therapy. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2011, 62-69 (2011).
  12. Sweeny, J. M., Gorog, D. A., Fuster, V. Antiplatelet drug 'resistance'. Part 1: Mechanisms and clinical measurements. Nat Rev Cardiol. 6 (4), 273-282 (2009).
  13. Mega, J. L., Simon, T. Pharmacology of antithrombotic drugs: An assessment of oral antiplatelet and anticoagulant treatments. Lancet. 386 (9990), 281-291 (2015).
  14. Carr, M. E. Development of platelet contractile force as a research and clinical measure of platelet function. Cell Biochem Biophys. 38 (1), 55-78 (2003).
  15. Gresele, P., Bury, L., Mezzasoma, A. M., Falcinelli, E. Platelet function assays in diagnosis: An update. Expert Rev Hematol. 12 (1), 29-46 (2019).
  16. Pakala, R., Waksman, R. Currently available methods for platelet function analysis: Advantages and disadvantages. Cardiovasc Revasc Med. 12 (5), 312-322 (2011).
  17. Paniccia, R., Priora, R., Liotta, A. A., Abbate, R. Platelet function tests: A comparative review. Vasc Health Risk Manag. 11, 133-148 (2015).
  18. Rand, M. L., Leung, R., Packham, M. A. Platelet function assays. Transfus Apher Sci. 28 (3), 307-317 (2003).
  19. Alafeef, M., Dighe, K., Moitra, P., Pan, D. Rapid, ultrasensitive, and quantitative detection of sars-cov-2 using antisense oligonucleotides directed electrochemical biosensor chip. ACS Nano. 14 (12), 17028-17045 (2020).
  20. Chowdhury, A. D., Takemura, K., Li, T. C., Suzuki, T., Park, E. Y. Electrical pulse-induced electrochemical biosensor for hepatitis e virus detection. Nat Commun. 10 (1), 3737 (2019).
  21. Park, J. H., et al. Capacitive biosensor based on vertically paired electrodes for the detection of sars-cov-2. Biosens Bioelectron. 202, 113975 (2022).
  22. Qureshi, A., Pandey, A., Chouhan, R. S., Gurbuz, Y., Niazi, J. H. Whole-cell based label-free capacitive biosensor for rapid nanosize-dependent toxicity detection. Biosens Bioelectron. 67, 100-106 (2015).
  23. Rassaei, L., Mathwig, K., Kang, S., Heering, H. A., Lemay, S. G. Integrated biodetection in a nanofluidic device. ACS Nano. 8 (8), 8278-8284 (2014).
  24. Wang, L., et al. A sensitive DNA capacitive biosensor using interdigitated electrodes. Biosens Bioelectron. 87, 646-653 (2017).
  25. Zhurauski, P., et al. Sensitive and selective affimer-functionalized interdigitated electrode-based capacitive biosensor for her4 protein tumor biomarker detection. Biosens Bioelectron. 108, 1-8 (2018).
  26. Pourang, S., et al. Assessment of fibrinolytic status in whole blood using a dielectric coagulometry microsensor. Biosens Bioelectron. 210, 114299 (2022).
  27. Sekar, P. K., et al. Simultaneous multiparameter whole blood hemostasis assessment using a carbon nanotube-paper composite capacitance sensor. Biosens Bioelectron. 197, 113786 (2022).
  28. P, K. S., et al. Comprehensive multiparameter evaluation of platelet function using a highly sensitive membrane capacitance sensor. Biosens Bioelectron. 228, 115192 (2023).
  29. Franssila, S. . Introduction to microfabrication. , (2010).
  30. Syed Rizvi, S. R. . Handbook of photomask manufacturing technology. , (2018).
  31. Yota, J., Hander, J., Saleh, A. A. A comparative study on inductively-coupled plasma high-density plasma, plasma-enhanced, and low pressure chemical vapor deposition silicon nitride films. J Vacuum Sci Technol A. 18 (2), 372-376 (2000).
  32. Thompson, L. F. An introduction to lithography. ACS Symp Series. 219, 1-13 (1983).
  33. Laermer, F., Urban, A. Challenges, developments and applications of silicon deep reactive ion etching. Microelectron Eng. 67 - 8, 349-355 (2003).
  34. Harsha, K. S. . Principles of vapor deposition of thin films. , (2005).
  35. Lea-Henry, T. N., Carland, J. E., Stocker, S. L., Sevastos, J., Roberts, D. M. Clinical pharmacokinetics in kidney disease: Fundamental principles. Clin J Am Soc Nephrol. 13 (7), 1085-1095 (2018).
  36. Offermanns, S. Activation of platelet function through g protein-coupled receptors. Circ Res. 99 (12), 1293-1304 (2006).
  37. Trejo-Velasco, B., et al. Impact of comorbidities and antiplatelet regimen on platelet reactivity levels in patients undergoing transcatheter aortic valve implantation. J Cardiovasc Pharmacol. 78 (3), 463-473 (2021).
  38. Violi, F., Pignatelli, P., Basili, S. Nutrition, supplements, and vitamins in platelet function and bleeding. Circulation. 121 (8), 1033-1044 (2010).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

JoVE de Bu AySay 219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır