JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול לבדיקה פונקציונלית חדשה של טסיות דינמיות מרובות פרמטרים באמצעות חיישן ביולוגי קיבולי מוצג כאן. גישה זו, שתוכננה בתוך מיקרו-סביבה קשיחה למחצה כדי לשפר את הרלוונטיות הפיזיולוגית, מספקת שלושה פרמטרי פלט הרגישים לספירת טסיות הדם, עוצמות הגירוי ומסלולי ההפעלה.

Abstract

טסיות ממלאות תפקיד מהותי בקרישת הדם באמצעות סדרה של תגובות מווסתות, כולל הידבקות, התפשטות, הפרשת גרגירים, צבירה והתכווצות שלד תאים. עם זאת, הבדיקות הנוכחיות מוגבלות לניתוח חלקי של תפקוד טסיות הדם בתנאים לא פיזיולוגיים. לפיכך, יש צורך בבדיקה משופרת המשקפת את האופי הדינמי והרב-גוני של תפקוד טסיות הדם במסגרות פיזיולוגיות. בהקשר זה, מוצגת גישה חדשה למדידת מספר פרמטרים מרכזיים הקשורים לתפקוד טסיות הדם במיקרו-סביבה חצי קשיחה ex vivo רלוונטית יותר מבחינה פיזיולוגית בהשוואה למבחנים מסורתיים. שיטה זו משתמשת בחיישן ביולוגי חשמלי מתקדם, חיישן קיבול הממברנה (MCS), המספק תובנות ייחודיות על תהליך הקרישה באמצעות שלוש קריאות נפרדות. קריאות אלו רגישות מאוד לשינויים בספירת טסיות הדם, עוצמת הגירוי ומסלולי הפעלה ספציפיים. כפלטפורמת חישה חשמלית גרידא, ה-MCS מדגים פוטנציאל משמעותי ככלי אבחון לאיתור הפרעות תפקוד המוסטטיות ראשוניות, הערכת יעילות הטיפולים וקידום ההבנה הרחבה יותר של תפקידי טסיות הדם בהמוסטזיס ופקקת.

Introduction

טסיות דם, תאי דם מיוחדים, הן מרכזיות בתזמור התגובה ההמוסטטית לעצירת הדימום לאחר פציעה ובהקלה על ריפוי כלי הדם1. בנוסף, הם משמשים גם כמתווכים חיוניים בפקקת, גורם מוביל למקרי מוות הקשורים למחלות טרומבואמבוליות ברחבי העולם 2,3,4,5,6. כאשר מתרחשת פגיעה בכלי הדם, טסיות הדם עוברות סדרה של תהליכים תפקודיים מורכבים, מווסתים ורב-שלביים. אלה כוללים הידבקות למטריצה האינטימית, זרם של סידן תוך תאי המעורר שינויים בקונפורמציה של טסיות הדם, הפעלה, הפרשת גרגירים, צבירה והתכווצות שלד תאים, ובסופו של דבר יוצרים ומייצבים פקקים המוסטטיים כדי לאטום את האתרים הפגועים ולמנוע דימום 7,8. למרות התקדמות משמעותית בתרופות נוגדות טסיות ואסטרטגיות טיפוליות 9,10,11, הסיכון לפקקת נמשך. ניהול טיפול נוגד טסיות מציב אתגרים, כולל הסיכון לדימום יאטרוגני, קושי בהשגת יעילות אנטי-טרומבוטית תוך שמירה על המוסטזיס, ושונות בתגובת המטופל, כולל עמידות לתרופות12,13.

למרות שהמנגנונים המולקולריים השולטים בשלבי תגובת הטסיות מתועדים היטב, השיטות הנוכחיות לבדיקת תפקוד הטסיות נותרו תת-אופטימליות. בדיקות מסורתיות מבוססות מעבדה לרוב נופלות מכיוון שהן מעריכות רק היבטים מוגבלים של פעילות טסיות הדם בשלב מוקדם עד בינוני, כגון הידבקות, צבירה או צמיגות קרישים 7,14,15,16,17,18. ניתוח חלקי זה יכול להוביל למידע לא מספיק. יתר על כן, בדיקות אלו אינן מציעות הערכה בו-זמנית, רציפה ומהירה של מספר אלמנטים תפקודיים חיוניים של טסיות דם בבדיקה אחת. כתוצאה מכך, מגבלה זו מעכבת את ההתקדמות בהמטולוגיה הקלינית והניסויית כאחד. עם הזמן פותחו שפע של חיישנים אימפימטריים או קיבוליים ליישומים ביו-רפואיים שונים 19,20,21,22,23,24,25,26,27,28.

כאן, אנו מציגים את הפרוטוקול להערכת תפקוד טסיות מרובות באמצעות חיישן ביולוגי קיבולי. הגישה המוצעת מציעה תכונה אטרקטיבית על ידי ניטור רגיש של שינויים דינמיים בספקטרום רחב של תפקודי טסיות ברמה התאית. הגישה המוצגת משתמשת בחיישן ביולוגי המורכב משני שבבים: שבב סיליקון עליון, שהוא חד פעמי, הכולל באר דגימה לפלזמה עשירה בטסיות דם ואלקטרודת חישה המצופה בפיברונקטין אנושי כדי להקל על הידבקות טסיות הדם, לצד שבב סיליקון תחתון לשימוש חוזר המכיל אלקטרודת ייחוס. מדידה רציפה של שינויי קיבול דינמיים במהלך כל תהליך הקרישה, הכוללת הדבקה, הפעלה ופוסט-הפעלה של טסיות הדם, מאפשרת ניתוח רגיש הקשור לשינויים בספירת טסיות הדם, רמות הפעלת טסיות הדם ועיכוב מסלולי ההפעלה. ההיתכנות הקלינית והתועלת של שיטה זו הוכחו באמצעות דגימות פלזמה אנושיות רלוונטיות, מה שמדגיש את הפוטנציאל שלה להערכת תפקוד טסיות חזקה במסגרות קליניות.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

הצעת המחקר אושרה על ידי חטיבת הנבדקים האנושיים (HSD) במועצת הביקורת הפנימית של אוניברסיטת וושינגטון (UW-IRB; מזהה מחקר: STUDY00005211). כל הנבדקים המתנדבים שהשתתפו במחקר סיפקו הסכמה מדעת בכתב. פרטי הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. שלבי ייצור לחיישן קיבולי הממברנה (MCS)

הערה: חיישן ה-MCS יוצר תוך שימוש בטכניקות מיקרו-ייצור מסורתיות. חיישן ביולוגי זה הורכב משבב קיבול ממברנה עליון (T-) ותחתון (B-). בקצרה, שלבי הייצור מוצגים באיור 1.

  1. שלבי מיקרו-ייצור עבור T-MCC (איור 1A)
    1. תכנן את הפריסה של ה-T-MCC באמצעות תוכנת פריסת CAD סטנדרטית עבור מצע פרוסות סיליקון בגודל 4 אינץ'.
    2. העבירו את העיצוב למסכת צילום מזכוכית כרום באמצעות תהליך ייצור המסכה הסטנדרטי29,30.
    3. על מצע סיליקון מלוטש דו-צדדי נקי (בעובי 400 מיקרומטר), הפקידו בעובי 500 ננומטר של Si3N4 באמצעות טכניקת שקיעת אדים כימית סטנדרטית בלחץ נמוך (LPCVD)31. מעיל סיבוב 12 מיקרומטר של AZ 9260 photoresist ב-2000 סל"ד למשך 25 שניות באמצעות ציפוי ספין ידני.
    4. באמצעות טכניקת פוטוליתוגרפיה UV סטנדרטית32, דפוס הפוטו-רזיסט, הכולל חשיפת הפוטו-רזיסט עם מסיכת הפוטו מזכוכית כרום ביישור UV, ופיתוח ההתנגדות בפתרון מפתח להסרת האזור החשוף ל-UV של ההתנגדות.
    5. דפוס שכבת הסיליקון ניטריד הבסיסית בעובי 500 ננומטר באמצעות תהליך תחריט יונים תגובתי, החושף את מצע הסיליקון.
    6. הסר את מצע הסיליקון החשוף בעובי 400 מיקרומטר באמצעות תהליך Bosch סטנדרטי: תהליך Deep Reactive Ion Si Etch33.
    7. חשב את המספר הרצוי של מחזורי תחריט כדי להסיר 400 מיקרומטר של סיליקון.
      הערה: זה ישתנה בהתאם לכלי המשמש לתהליך, מכיוון שהם ישפיעו על קצב החריטה (במקרה זה, זה היה 1.8 מיקרומטר/מחזור).
    8. כדי למנוע חריטה בטעות של שכבת Si3N4 , הפסק את התחריט היבש לפחות 10 מיקרומטר לפני כן (כלומר ב-390 מיקרומטר). הסר את שארית הסיליקון באמצעות ה-KOH הסלקטיבי המסורתי ב-80 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
    9. הפקידו 20 ננומטר של Cr ו-150 ננומטר של שכבות מתכת Au ברציפות באמצעות תהליך אידוי קרן E34 ומסיכת צל לייצור אלקטרודת החישה ב-T-MCC.
    10. בשלב זה, ה-T-MCC בפרוסה יחוברו על ידי מחזיקי סיליקון זעירים. הפרד את ה-T-MCC על ידי ניקוב בזהירות של המחזיקים הזעירים.
  2. שלבי מיקרו-ייצור עבור B-MCC (איור 1B)
    1. על מצע סיליקון מחומצן תרמית נקי (בעובי 400 מיקרומטר), הפקידו שכבות מתכת Cr/Au (20 ננומטר, 150 ננומטר) באמצעות מסיכת צל, בדומה לשלב 1.1.9.
    2. השתמש בפוטוליתוגרפיה סטנדרטית32 עם יישור אחורי, ואחריו שלב תחריט רטוב KOH כדי לשחרר את ה-B-MCC.
      הערה: ל-T- ול-B-MCC יש רפידות מגע בגודל 2.5 x 1.5 ס"מ.

2. ביו-פונקציונליזציה של החיישן הקיבולי

הערה: בקצרה, שלב זה עוסק בציפוי האלקטרודה T-MCC בפיברונקטין אנושי (Fn) כדי להקל על הצמדת טסיות הדם לחיישן.

  1. לפני ציפויים ביומולקולריים, נקה את אלקטרודת החישה עם פלזמת חמצן למשך 45 שניות ב-100 וואט.
  2. הוסף 1-דודקנתיול (1 מ"מ) באתנול 200 הוכחה לבאר הדגימה ב-T-MCC.
  3. הנח את ה-T-MCC במיכל מלא בחנקן יבש, אטום ועטוף בפרפילם למשך 24-48 שעות.
  4. שטפו את משטח הזהב במים נטולי יונים ואתנול 200 חסין, ולאחר מכן ייבוש חנקן בטמפרטורת החדר. בשלב זה, אחסן את החיישנים בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס באטמוספירה של חנקן יבש עד לשלבים הבאים.
  5. הוסף תמיסת Fn בתמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS, 50 מיקרוגרם/מ"ל) לבאר 12 שעות לפני המדידה ודגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 2-8 שעות.

3. הגדרת חיישן קיבול

הערה: איור 2 מייצג את התצלום של מערך הניסוי.

  1. השתמש במד LCR עם מצבי מיקרו ובדיקות מחט כדי ליצור מגע חשמלי עם החיישן.
  2. השתמש בגופי פלסטיק מודפסים בתלת מימד (ראה טבלת חומרים) כדי למקם בצורה מאובטחת את ה-T וה-B-MCC. המתקן התחתון מצויד בפקקים על ציר ה-xy כדי להבטיח יישור מדויק של ה-T-MCC מעל ה-B-MCC ליצירת קבל.
    הערה: כל מדפסות התלת מימד ששימשו היו מאוניברסיטת וושינגטון.
  3. הפעל אות סינוסואידלי (0.5 V) ב-100 קילו-הרץ וקצב דגימה של 8 הרץ.

4. הכנת פלזמה עשירה בטסיות דם (c-PRP)

הערה: כל דגימות הדם היו ממתנדבים שהשתתפו במחקר זה. לאף אחד מהמשתתפים לא הייתה הפרעה בטסיות הדם או הפרעת קרישה ידועה בעבר, והם לא נטלו תרופות טסיות כלשהן, כולל תרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות (NSAIDs), בשבועיים שקדמו לאיסוף הדגימות. פלבוטומיסט מורשה ביצע לקיחת דם באמצעות מחט 21 גרם לצינורות ציטראט סטנדרטיים של 3.2%. 1 מ"ל הראשון הושלך כדי למנוע זיהום בגורם הרקמה. הדגימות הועברו במיכל פוליסטירן, וכל המדידות בוצעו תוך 6 שעות מרגע לקיחת הדם.

  1. צנטריפוגה דגימת הדם השלמה ב-200 x גרם למשך 10 דקות ב-20 מעלות צלזיוס כדי לקבל c-PRP.
  2. העבירו את ה-c-PRP למיכל סטרילי ובצעו את ספירת הטסיות. למחקרי מעכבים, דגרו את ה-c-PRP עם ריכוז מוגדר מראש של התרופה במאגר של Tyrode (ראו סעיף תוצאות לפרטים).

5. בדיקה פונקציונלית של טסיות דם

הערה: הסכימה עבור הבדיקה הפונקציונלית של טסיות הדם המוצגת מוצגת באיור 3.

  1. הרכיבו את ה-T וה-B-MCC בגופים המודפסים בתלת מימד.
  2. מדוד את מדידת הקיבול הבסיסית למשך 5 דקות, ולאחר מכן הוסף 45 מיקרוליטר של c-PRP לבאר הדגימה ב-T-MCC.
  3. המתן 30 דקות עד שטסיות הדם יידבקו לאלקטרודה המצופה Fn ב-T-MCC.
  4. הסר 30 מיקרוליטר מה-c-PRP בזהירות מבלי לגעת בטסיות הדם המחוברות לממברנה, ומיד מלא עם המאגר של Tyrode. חזור על הכביסה לפחות 5 פעמים במרווח של 20 שניות כדי להבטיח שלא ינחתו טסיות או מקרואגרגטים נוספים על אלקטרודת החישה לאחר ההפעלה.
  5. הוסף 10 מיקרוליטר מתמיסת האגוניסט (תרומבין או ADP) בריכוז הרצוי. אפשר זמן שיווי משקל של 80 דקות.

6. נתונים וניתוח סטטיסטי לסמני האותות

הערה: הקיבול נמדד ברציפות משלבים 5.2-5.5.

  1. עבור אות הקיבול במהלך שלב ההדבקה (שלב 5.3), מדוד את השינוי המקסימלי בקיבול לאחר זמן שיווי המשקל של 30 דקות, המכונה ΔCadh.
  2. באופן דומה, עבור שלב ההפעלה (שלב 5.5), מדוד את השינוי המרבי בקיבול, המכונה פעולת Δ C, ואת שיפוע העקומה בין 200-300 שניות לאחר ההפעלה, המכונה פעולת S.
  3. השתמש בניתוח שונות (ANOVA) עם הפוסט-הוק של טוקי כדי להשוות את התוצאות בין הקבוצות. השתמש ב-Shapiro-Wilk Goodness of Fit לניתוח התפלגות נורמלית.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

מחקר זה נועד לבצע הערכה דינמית של תפקוד טסיות הדם. בהתאם לפרוטוקול שתואר לעיל, הכינו את תמיסת ה-c-PRP, וטסיות הדם נזרעו על האלקטרודה המצופה Fn ב-T-MCC. הטסיות הצפות נשטפו החוצה בשלב הכביסה, ונוסף אגוניסט להפעלת הטסיות המחוברות. תוצאות מפורטות ודיון ניתן למצוא בדוח הקודם שלנו

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

מחקר זה היה חלוץ בשיטה חדשה מבוססת קיבול להערכת תפקוד טסיות הדם, המעריכה הן את דינמיקת ההידבקות והן את דינמיקת הטסיות לאחר ההפעלה בתוך מכשיר יחיד, ומסמנת את המופע המדווח הראשון של גישה כזו. פרוטוקול הניסוי החדש מציג טכניקה פשוטה יחסית לנטרול ההשפעות של היווצרות פיברין ו?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

Acknowledgements

המחברים מביעים את תודתם לד"ר מוריץ סטולה ולד"ר ג'ייסון אקר על הדיונים החשובים והסיוע הטכני שלהם. הם גם מודים למתקן ההדמיה הביולוגית באוניברסיטת וושינגטון על התשתית והתמיכה שלו. עבודה זו קיבלה מימון חלקי מקרן החדשנות CoMotion באוניברסיטת וושינגטון (מענק מס' 682548, D.Y.G).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1-DodecanethiolSigma-Aldrich, MO, U.S.A471364-100ML1 mM
200-proof ethanolSigma-Aldrich, MO, U.S.AEX0276-1
3D printerShenzhen Creality 3D Technology Co, Ltd.Ender-3 V3
3D printing materialHATCHBOX 3D, CA, U.S.A3D PLA-1KG-1.75
Adenosine 5′-diphosphateSigma Aldrich, U.S.A01905-250MG-FADP
Aspirin Sigma-Aldrich, MO, U.S.AA2093-100G
Deep Reactive Ion EtchingOmega Engineering, Inc.SPTS Rapier DRIE
Dimethyl SulfoxideSigma-Aldrich, MO, U.S.AD8418-50MLDMSO
High Vacuum Deposition SystemsCHA SEC-600
Human FibronectinSigma-Aldrich, MO, U.S.ACLS356008-1EAFn
KOHSigma-Aldrich, MO, U.S.AP1767-250G
LCR meter Keithley Instruments, Inc., OH, U.S.AKeithley EL 4980AL
LCR meter holdersSignatone Corporation, CA, U.S.ASCA-50-4
Mask Aligner SystemABM, U.S.A, Inc.ABM/6/350/NUV/DCCD/SA
Micro-positionersSignatone, CA, U.S.AS-725
needle probeSignatone Corporation, CA, U.S.ASCAT5T-412.5 μm radius
Phosphate Buffered SalineSigma-Aldrich, MO, U.S.AP4474-1LPBS, pH 7.4
Reactive Ion EtchingPlasma-Therm,U.S.ARIE Vision 320
silicon substrateWafer World IncSKU# 1766
Standard 3.2% citrate tubesTiger Medical, NJ, U.S.A.Covidien / Cardinal Health 8881340478 Monoject
ThrombinEnzyme Research Laboratories, U.S.AHT 1002a
TicagrelorSigma-Aldrich, MO, U.S.APHR2788-400MG
Tyrode’s bufferBoston Bioproducts, U.S.ABSS-375
UV photoresistAZ electronic materials, NC, U.S.A.AZ 926015um

References

  1. George, J. N. Platelets. Lancet. 355 (9214), 1531-1539 (2000).
  2. Wendelboe, A. M., Raskob, G. E. Global burden of thrombosis: Epidemiologic aspects. Circ Res. 118 (9), 1340-1347 (2016).
  3. Heit, J. A. Epidemiology of venous thromboembolism. Nat Rev Cardiol. 12 (8), 464-474 (2015).
  4. Moran, A. E., et al. The global burden of ischemic heart disease in 1990 and 2010: The global burden of disease 2010 study. Circulation. 129 (14), 1493-1501 (2014).
  5. Campbell, B. C. V., et al. Ischaemic stroke. Nat Rev Dis Primers. 5 (1), 70(2019).
  6. Ruggeri, Z. M. Platelets in atherothrombosis. Nat Med. 8 (11), 1227-1234 (2002).
  7. Harrison, P. Platelet function analysis. Blood Rev. 19 (2), 111-123 (2005).
  8. Van Der Meijden, P. E. J., Heemskerk, J. W. M. Platelet biology and functions: New concepts and clinical perspectives. Nat Rev Cardiol. 16 (3), 166-179 (2019).
  9. Bhatt, D. L., Topol, E. J. Scientific and therapeutic advances in antiplatelet therapy. Nat Rev Drug Discov. 2 (1), 15-28 (2003).
  10. Mcfadyen, J. D., Schaff, M., Peter, K. Current and future antiplatelet therapies: Emphasis on preserving hemostasis. Nat Rev Cardiol. 15 (3), 181-191 (2018).
  11. Michelson, A. D. Advances in antiplatelet therapy. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2011, 62-69 (2011).
  12. Sweeny, J. M., Gorog, D. A., Fuster, V. Antiplatelet drug 'resistance'. Part 1: Mechanisms and clinical measurements. Nat Rev Cardiol. 6 (4), 273-282 (2009).
  13. Mega, J. L., Simon, T. Pharmacology of antithrombotic drugs: An assessment of oral antiplatelet and anticoagulant treatments. Lancet. 386 (9990), 281-291 (2015).
  14. Carr, M. E. Development of platelet contractile force as a research and clinical measure of platelet function. Cell Biochem Biophys. 38 (1), 55-78 (2003).
  15. Gresele, P., Bury, L., Mezzasoma, A. M., Falcinelli, E. Platelet function assays in diagnosis: An update. Expert Rev Hematol. 12 (1), 29-46 (2019).
  16. Pakala, R., Waksman, R. Currently available methods for platelet function analysis: Advantages and disadvantages. Cardiovasc Revasc Med. 12 (5), 312-322 (2011).
  17. Paniccia, R., Priora, R., Liotta, A. A., Abbate, R. Platelet function tests: A comparative review. Vasc Health Risk Manag. 11, 133-148 (2015).
  18. Rand, M. L., Leung, R., Packham, M. A. Platelet function assays. Transfus Apher Sci. 28 (3), 307-317 (2003).
  19. Alafeef, M., Dighe, K., Moitra, P., Pan, D. Rapid, ultrasensitive, and quantitative detection of sars-cov-2 using antisense oligonucleotides directed electrochemical biosensor chip. ACS Nano. 14 (12), 17028-17045 (2020).
  20. Chowdhury, A. D., Takemura, K., Li, T. C., Suzuki, T., Park, E. Y. Electrical pulse-induced electrochemical biosensor for hepatitis e virus detection. Nat Commun. 10 (1), 3737(2019).
  21. Park, J. H., et al. Capacitive biosensor based on vertically paired electrodes for the detection of sars-cov-2. Biosens Bioelectron. 202, 113975(2022).
  22. Qureshi, A., Pandey, A., Chouhan, R. S., Gurbuz, Y., Niazi, J. H. Whole-cell based label-free capacitive biosensor for rapid nanosize-dependent toxicity detection. Biosens Bioelectron. 67, 100-106 (2015).
  23. Rassaei, L., Mathwig, K., Kang, S., Heering, H. A., Lemay, S. G. Integrated biodetection in a nanofluidic device. ACS Nano. 8 (8), 8278-8284 (2014).
  24. Wang, L., et al. A sensitive DNA capacitive biosensor using interdigitated electrodes. Biosens Bioelectron. 87, 646-653 (2017).
  25. Zhurauski, P., et al. Sensitive and selective affimer-functionalized interdigitated electrode-based capacitive biosensor for her4 protein tumor biomarker detection. Biosens Bioelectron. 108, 1-8 (2018).
  26. Pourang, S., et al. Assessment of fibrinolytic status in whole blood using a dielectric coagulometry microsensor. Biosens Bioelectron. 210, 114299(2022).
  27. Sekar, P. K., et al. Simultaneous multiparameter whole blood hemostasis assessment using a carbon nanotube-paper composite capacitance sensor. Biosens Bioelectron. 197, 113786(2022).
  28. P, K. S., et al. Comprehensive multiparameter evaluation of platelet function using a highly sensitive membrane capacitance sensor. Biosens Bioelectron. 228, 115192(2023).
  29. Franssila, S. Introduction to microfabrication. , 2nd edn, John Wiley & Sons. (2010).
  30. Syed Rizvi, S. R. Handbook of photomask manufacturing technology. , CRC Press. (2018).
  31. Yota, J., Hander, J., Saleh, A. A. A comparative study on inductively-coupled plasma high-density plasma, plasma-enhanced, and low pressure chemical vapor deposition silicon nitride films. J Vacuum Sci Technol A. 18 (2), 372-376 (2000).
  32. Thompson, L. F. An introduction to lithography. ACS Symp Series. 219, 1-13 (1983).
  33. Laermer, F., Urban, A. Challenges, developments and applications of silicon deep reactive ion etching. Microelectron Eng. 67 - 8, 349-355 (2003).
  34. Harsha, K. S. Principles of vapor deposition of thin films. , Elsevier. eBook ISBN: 9780080480312 (2005).
  35. Lea-Henry, T. N., Carland, J. E., Stocker, S. L., Sevastos, J., Roberts, D. M. Clinical pharmacokinetics in kidney disease: Fundamental principles. Clin J Am Soc Nephrol. 13 (7), 1085-1095 (2018).
  36. Offermanns, S. Activation of platelet function through g protein-coupled receptors. Circ Res. 99 (12), 1293-1304 (2006).
  37. Trejo-Velasco, B., et al. Impact of comorbidities and antiplatelet regimen on platelet reactivity levels in patients undergoing transcatheter aortic valve implantation. J Cardiovasc Pharmacol. 78 (3), 463-473 (2021).
  38. Violi, F., Pignatelli, P., Basili, S. Nutrition, supplements, and vitamins in platelet function and bleeding. Circulation. 121 (8), 1033-1044 (2010).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved