A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
تقدم هذه الدراسة مقايسة هجرة جرح الخدش ثنائية الأبعاد (2D) ومقايسة تنبت كروية ثلاثية الأبعاد (3D) ، جنبا إلى جنب مع طرق تحليل المصب الخاصة بكل منها ، بما في ذلك استخراج الحمض النووي الريبي والكيمياء المناعية ، كمقايسات مناسبة لدراسة تكوين الأوعية في المختبر.
يلعب تكوين الأوعية دورا حاسما في كل من العمليات الفسيولوجية والمرضية داخل الجسم بما في ذلك نمو الورم أو أمراض العين الوعائية الحديثة. يعد الفهم التفصيلي للآليات الجزيئية الأساسية ونماذج الفحص الموثوقة أمرا ضروريا لاستهداف الأمراض بشكل فعال وتطوير خيارات علاجية جديدة. تم تطوير العديد من المقايسات في المختبر لنمذجة تكوين الأوعية ، والاستفادة من الفرص التي توفرها البيئة الخاضعة للرقابة لتوضيح الدوافع الوعائية على المستوى الجزيئي وفحص الأهداف العلاجية.
تقدم هذه الدراسة سير العمل للتحقيق في تكوين الأوعية في المختبر باستخدام الخلايا البطانية للوريد السري البشري (HUVECs). نحن بالتفصيل مقايسة هجرة جرح الخدش باستخدام نظام تصوير الخلايا الحية الذي يقيس هجرة الخلايا البطانية في إعداد 2D ومقايسة تنبت كروية تقييم الخلايا البطانية تنبت في إعداد 3D التي توفرها مصفوفة الكولاجين. بالإضافة إلى ذلك ، نحدد استراتيجيات لإعداد العينات لتمكين المزيد من التحليلات الجزيئية مثل علم النسخ ، لا سيما في إعداد 3D ، بما في ذلك استخراج الحمض النووي الريبي وكذلك الكيمياء المناعية. إجمالا ، يوفر هذا الإطار للعلماء مجموعة أدوات موثوقة ومتعددة الاستخدامات لمتابعة استفساراتهم العلمية في مقايسات تكوين الأوعية في المختبر .
تكوين الأوعية الدموية ، الذي يشير إلى تكوين أوعية دموية جديدة من الأوعية الموجودة مسبقا1 ، هو عملية حاسمة أثناء التطور الفسيولوجي والظروف المرضية. لا غنى عنه لتوفير الطاقة للأنسجة النشطة للغاية في التمثيل الغذائي مثل شبكية العين2 أو الجهاز العصبي المركزي النامي3 وأثناء شفاء الأنسجة التالفة4. تولد الأوعية غير الطبيعي ، من ناحية أخرى ، هو الأساس للعديد من الأمراض. الأورام الصلبة ، مثل سرطان القولون والمستقيم أو سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة ، تسهل نموها وإمدادات الطاقة اللازمة من خلال تعزيز تكوين الأوعيةالدموية 5. بصرف النظر عن السرطان ، فإن أمراض....
1. ثقافة خلايا HUVEC
ملاحظة: قم بتنفيذ جميع الخطوات التالية تحت ظروف العمل المعقمة (منضدة العمل المعقمة).
بالنسبة لفحص الترحيل ، من الأهمية بمكان إجراء فحص شامل للصور الملتقطة عند النقطة الزمنية t = 0 h لضمان اكتشاف النظام بدقة وجود طبقة أحادية الخلية كاملة التكوين (الشكل 1B). بالإضافة إلى ذلك ، يجب تأكيد وضوح واستقامة حدود الخدش (الشكل 1 ب). يجب أن تكون المنطقة الخا?.......
في هذا التقرير ، قدمنا مجموعة من التقنيات مع قراءات وظيفية وجزيئية لدراسة تكوين الأوعية في المختبر.
يمثل اختبار الهجرة تقنية راسخة تستخدم في جميع مجالات العمل المختبري الرطب. لقد اخترنا نهج تصوير الخلايا الحية المتاح تجاريا للاستفادة من تنسيق 96 بئرا المناسب لتجارب ا?.......
يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح في هذا المشروع.
يشكر المؤلفون صوفي كروجر وغابرييل برينز على دعمهما الفني الممتاز. نشكر سيباستيان ماير على تطوير المكون الإضافي ImageJ لتحديد براعم الكرة الأرضية ومرفق المنارة الأساسي ، Zentrum für Translationale Zellforschung (ZTZ) ، قسم الطب الأول ، مستشفى جامعة فرايبورغ لاستخدام نظام IncuCyte. تم إنشاء الرسومات باستخدام biorender.com. تم دعم هذا العمل من قبل Deutsche Forschungsgemeinschaft [Bu3135 / 3-1 + Bu3135 / 3-2 to F.B] ، و Medizinische Fakultät der Albert-Ludwigs- Universität Freiburg [Berta-Ottenstein-Program للعلماء السريريين والعلماء السريريين المتقدمين إلى F.B.] ، و Else Kröner-Fresenius-Stiftung [2021_EKEA.80 to F.B.] و "زمالة CORTEX للعلماء السريريين إلى JR] و Volker H....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
10x Medium 199 | Sigma-Aldrich | M0650 | |
2-(4-(2-Hydroxyethyl)1-piperazinyl)-ethan-sulfonsäure | PAN-Biotec | P05-01100 | HEPES |
Alexa Fluor 647-conjugated AffiniPure F(ab)‘2-Fragment | Jackson IR | 115-606-072 | |
Axio Vert. A1 | Zeiss | ||
CapturePro 2.10.0.1 | JENOTIK Optical Systems | ||
Collagen Type 1 rat tail | Corning | 354236 | |
Collagenase D | Roche | 11088858001 | |
Endothelial Cell Basal Medium | Lonza | CC-3156 | EBM |
Endothelial Cell Growth Medium | Lonza | CC-3162 | EGM |
Ethylenediaminetetraacetic acid | Serva | 11290.02 | EDTA |
Fetal bovine serum | Bio&SELL | S 0615 | FBS |
Human Umbilical Vein Endothelial Cells, pooled | Lonza | C2519A | HUVEC |
IncuCyte ImageLock 96-well plates | Sartorius | 4379 | |
Incucyte S3 Live-Cell Analysis System | Sartorius | ||
Methocel | Sigma | m-0512 | |
Microvascular Endothelial Cell Medium with 10% FBS | PB-MH-100-4090-GFP | PELOBiotech | |
NaOH | Carl Roth | P031.2 | |
Phalloidin-Fluorescein Isothiocyanate Labeled (0.5 mg/mL Methanol) | Sigma-Aldrich | P5282-.1MG | Phalloidin-FITC |
Phosphate-buffered saline | Thermo Fisher Scientfic | 14190-094 | PBS |
Primary Human Retinal Microvascular Endothelial Cells | Cell Systems | ACBRI 181 | |
ProLong Glass Antifade Mountant with NucBlue | Invitrogen by ThermoFisher Scientific | 2260939 | |
QIAzol Lysis Reagent | QIAGEN | 79306 | |
recombinant human Vascular Endothelial Growth Factor | PeproTech | 100-20 | VEGF |
Squared petri dish | Greiner | 688102 | |
Trizol | Qiagen | 79306 | |
Trypsin | PAN-Biotec | P10-024100 | |
VEGF-R2 (monoclonal) | ThermoFisher Scientific Inc. | B.309.4 | |
WoundMaker | Sartorius | 4493 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved