المقايسة المناعية للتدفق الجانبي الفلوري على أساس النقاط الكمومية النانوية

Summary

هنا ، نصف بروتوكولا لإعداد حبيبات نانوية نقطية كمومية (QDNB) والكشف عن المؤشرات الحيوية للمرض باستخدام شرائط المقايسة المناعية للتدفق الجانبي القائمة على QDNB. يمكن تقييم نتائج الاختبار نوعيا تحت إضاءة الأشعة فوق البنفسجية وقياسها كميا باستخدام قارئ شريط الفلورسنت في غضون 15 دقيقة.

Abstract

النقاط الكمومية ، والمعروفة أيضا باسم بلورات أشباه الموصلات النانوية ، هي ملصقات فلورية جديدة للتصوير البيولوجي والاستشعار. ومع ذلك ، فإن اتحادات الأجسام المضادة ذات النقاط الكمومية ذات الأبعاد الصغيرة (~ 10 نانومتر) ، والتي يتم تحضيرها من خلال إجراءات تنقية شاقة ، تظهر حساسية محدودة في الكشف عن بعض علامات المرض النزرة باستخدام شرائط المقايسة المناعية للتدفق الجانبي. هنا ، نقدم طريقة لإعداد حبيبات نانوية نقطية كمومية (QDNB) باستخدام طريقة تبخر مستحلب من خطوة واحدة. باستخدام QDNB كما تم إعداده ، تم تصنيع اختبار مناعي للتدفق الجانبي الفلوري للكشف عن المؤشرات الحيوية للمرض باستخدام البروتين التفاعلي C (CRP) كمثال. على عكس الجسيمات النانوية ذات النقطة الكمومية المفردة ، فإن اتحادات الأجسام المضادة للخرزة النانوية ذات النقاط الكمومية أكثر حساسية مثل تسميات المقايسة المناعية بسبب تضخيم الإشارة عن طريق تغليف مئات النقاط الكمومية في حبة نانوية مركبة من البوليمر. علاوة على ذلك ، فإن الحجم الأكبر ل QDNBs يسهل فصل الطرد المركزي عند اقتران QDNBs بالأجسام المضادة. تم تصنيع المقايسة المناعية للتدفق الجانبي الفلوري على أساس QDNBs ، وتم قياس تركيز CRP في العينة في 15 دقيقة. يمكن تقييم نتائج الاختبار نوعيا تحت إضاءة الأشعة فوق البنفسجية وقياسها كميا باستخدام قارئ الفلورسنت في غضون 15 دقيقة.

Introduction

تعمل شرائط المقايسة المناعية للتدفق الجانبي (LFIA) كأدوات حاسمة للكشف السريع في نقطة الرعاية ^1,2 ، لا سيما في فحص الأمراض أثناء الأوبئة. ومع ذلك ، فإن شرائط اختبار LFIA التقليدية القائمة على الذهب الغروي تظهر حساسية منخفضة للكشف وتوفر نتائج نوعية فقط³. لتعزيز حساسية الكشف عن LFIA ، ظهرت العديد من الجسيمات النانوية الجديدة ، بما في ذلك اللاتكس^{الملون 4,5} ، والجسيمات النانوية الفلورية⁶ ، والكرات المجهرية الفلورية التي تم حلها بمرور الوقت ^7,8 ، والنقاط الكمومية

Protocol

تمت الموافقة على الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لمستشفى شنغهاي للأمراض الجلدية (رقم 2020-15). وأجريت جميع الإجراءات التجريبية التي شملت عينات دم بشرية في مختبر من المستوى الثاني للسلامة الأحيائية. يتم سرد تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة في جدول المواد.

1. إعداد QDs نانوبيدات

ملاحظة: بالنسبة لتخليق QD nanobead ، تم استخدام تقنية تبخير مستحلب المذيبات لتجميع حبيبات QD النانوية ، مع نسبة من مرحلة الزيت إلى مرحلة الماء تبلغ 1: 5. يتم إنشاء مستحلب صغير عن طريق الموجات فوق الصوتية ، ويتم ترسيخ nanobeads من خلال تبخر المذيبات (الكلوروفورم). تم استخدام هيدر....

النتائج

إجراءات إعداد QDNB موضحة بشكل تخطيطي في الشكل 1 أ. تم خلط مرحلة الزيت التي تحتوي على QDs والبوليمر في الكلوروفورم مع مرحلة الماء ، وتم الحصول على مستحلب صغير عن طريق الصوتنة. تم ترسيخ المستحلب عن طريق التبخر التدريجي للكلوروفورم. يتم عرض الصورة المجهرية الإلكترونية (TEM) ل QDNB في

Discussion

هنا ، نصف بروتوكولا لإعداد الحبيبات النانوية ذات النقاط الكمومية (QDNB)²⁷ واستخدام QDNB لإعداد المقايسات المناعية للتدفق الجانبي الفلوري (LFIA). يتم توضيح القياس النوعي والكمي ل CRP في العينات. يمكن أيضا تطبيق LFIA القائم على QDNB على المؤشرات الحيوية للأمراض^{الأخرى 25,32}<.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
(dimethylamino)propyl)-N’-ethylcarbodiimide hydrochloride	Sigma-Aldrich	03450
Absorbance paper	Kinbio Biotech	CH37K
Bovine serum albumin	Sigma-Aldrich	B2064
Casein	Sigma-Aldrich	C8654
CdSe/ZnS quantum dot	Suzhou Mesolight Inc.	CdSe/ZnS-625
Choloroform	Sino Pharm	10006818
CRP antibody	Hytest Biotech	4C28
Fluorescent lateral flow assay reader	Suzhou Helmence Precision Instrument	FIC-H1
Glass fiber pad	Kinbio Biotech	SB06
Goat anti-rabbit IgG	Sangon Biotech	D111018
Nitrocellulose membrane	Satorious	CN140
Poly(styrene-maleic anhydride) copolymer	Sigma-Aldrich	S458066
Rabbit IgG	Sangon Biotech	D110502
Sodium dodecyl sulfate	Sino Pharm	30166428
Sodium hydroxide	Sino Pharm	10019718