فإن الكتاب أود أن أشكر الجهاز الفني من وحدة أبحاث بالحركة. ماري إيكونومو، خوسيه غالبان، كارولين هامر، دومينيك مولر، ليليان Schöni وفريق المعلوماتية في معهد علم الأمراض في جامعة برن.

ملاحظة: تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاق المحلية للمستشفى في Insel، برن، سويسرا (07-10-13). تم الحصول على الأنسجة من البنك ورم برن، معهد علم الأمراض في جامعة برن. 1. التخطيط والتصميم (استشارات) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التفكير في سؤال البحث إلى إجابة. اتخاذ قرار بشأن أنواع الأنسجة ليتم تضمينها في المشروع. تحديد ما هي الهياكل النسيجية المهمة للإجابة على السؤال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من القطر الأساسية الأكثر فائدة وعدد من النوى لكل مريض للمشروع. تقرر عدد النسخ من الجيل المقبل من الأنسجة مايكرو صفيف (ngTMA) على أساس كمية من المؤشرات الحيوية ليتم التحقيق فيها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> النظر في الجوانب الإحصائية مثل حجم العينة والتحليل هي التي شيدت بعد ميكروأري الأنسجة (TMA). تحديد عدد من المرضى لإدراجها في دراسة ووضع الأنسجة السيطرة للمجموعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استرداد النسيجية (أوالتشخيص) Haematoxylin ويوزين (H &amp; E) الشرائح كل مريض. نستعرض بإيجاز الشرائح وتحديد تلك التي تحتوي على المعلومات والأنسجة ذات الصلة للمشروع. ملاحظة: تأكد أقسام جديدة للكتل البارافين، إذا هو المطلوب وصمة عار خاصة أو الشريحة المناعية لمسح الشرائح والشرح، بدلا من H &amp; E الشرائح </li></ol> 2. الضوئي الشريحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل الكمبيوتر والماسح الضوئي وبرنامج المسح الشريحة مفتوحة. حدد &quot;الوضع التلقائي&quot; لمسح حقل مشرق من شاشة المعاينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على &quot;خيارات المسح الضوئي&quot; لضبط معايير الجودة الشريحة. في هذا الوقت، حدد ما إذا الشرائح والتي سيتم فحصها مباشرة إلى منصة رقمية يمكن الوصول إليها عن طريق شبكة الإنترنت أو إلى محرك أقراص محلي (أو محرك أقراص خارجي) وتعيين أنواع المسح الضوئي وعدد من نقاط التركيز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على &quot;معلمات ملقم&quot; لمسح ل &quot;مركز القضية&quot;. في هذه الخطوة، إضافة المزيد من المجلات، وتسمية كل الشرائح ووضعالمجلد في مركز حالة حيث يجب أن يتم تخزين الشرائح. مجلة كل يحمل ما يصل إلى 25 الشرائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص الجودة / النظافة من الشرائح النسيجية الفعلية للمسح الضوئي. إذا لزم الأمر، والشرائح نظيفة مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل ما يصل إلى 25 الشرائح في مجلة مع التسميات مشيرا إلى الداخل (الشكل 3A) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المجلة في الماسح الضوئي. مجلة لأكثر من واحد، ووضعها على رأس كل منهما الآخر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء مسح الشريحة من خلال النقر على السهم الأخضر (الشكل 3B). عندما يتم فحص جميع الشرائح، وتفريغ المجلات واغلاق البرنامج، وأجهزة الكمبيوتر والشريحة الماسح الضوئي. </li></ol> 3. الرقمية الشريحة الشرح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل عنوان المتصفح لمركز إدارة الشريحة الرقمية وتحميل مجانا الرقمي البرمجيات المشاهد الشريحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الرقمي البرمجيات المشاهد الشريحة وحدد المجلد الذي يحتوي على الشرائح الرقمية (الشكل 4A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ملاحظات، إعادة ترتيب وإدارة الرقمية وطابل مجلد الشريحة أو تعيين حقوق المستخدم إلى الزملاء أو إضافة مرفقات إلى المجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على المطلوب الشريحة الرقمية التي تظهر في المشاهد الشريحة الرقمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام أداة التكبير، وتقييم الشريحة وإيجاد مجالات الاهتمام للاندماج في ngTMA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام &quot;أداة الشرح TMA&quot;، حدد حجم الأساسية المطلوبة ولون الشرح. وضع الشرح على الشريحة الرقمية عن طريق النقر عليه (الشكل 4B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الشرح للهياكل النسيجية المطلوبة لإدراجها في ngTMA (الشكل 4C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار هذه العملية من الشرح مرة أخرى باستخدام أداة الشرح، واختيار حجم الأساسية ولون الشرح المطلوب. تكرار عرض الشرائح والشرح على كافة الشرائح في المجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدلا من ذلك، وضع النوى الأنسجة لPCR إلى 0.2 مل أنابيب بدلا من الاندماج في TMA. تعليم الشرائح باستخدام ألوان مختلفة لتحديدهذه البقع لمزيد من التحليل الجزيئي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء قائمة من جميع الحالات مع الشروح والألوان المقابلة الخاصة بهم. </li></ol> 4. الأنسجة ميكروأري البناء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استرداد المقابلة كتل الأنسجة البارافين لجميع الشرائح الرقمية المشروح، فرز كتل في الترتيب المطلوب لmicroarraying الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن كتل الأنسجة لديها الحد الأدنى من 4 مم سمك. إن لم يكن، reembedding من الأنسجة ضروري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل PC &quot;ON&quot; والأنسجة الآلي أداة microarrayer. افتح البرنامج microarrayer الأنسجة وتوفير اسم للمشروع </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء &quot;تغيير أداة&quot; وحدد قطر أداة المطلوبة للمشروع (أي 0.6، 1.0، 1.5، أو 2.0 ملم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل ما يصل إلى 12 كتل &quot;المتلقي&quot; TMA في الجهاز. إعطاء ID لكل من كتل 12 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء تخطيط TMA لكل كتلة المتلقي. نلاحظ تصميم TMA مع عدد من الصفوف والأعمدة، واستباقخطوط ذ وكذلك المسافة بين النوى. إنشاء تخطيط جديد لكل كتلة المتلقي أو استخدام نفس تخطيط مرارا وتكرارا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع المؤشر على تخطيط كتلة المتلقي لاتخاذ النواة الأولى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل، وتحميل ما يصل إلى 60 كتل المانحة في microarrayer الأنسجة (الشكل 5A). وضع عشرة كتل في كل صف ألف إلى واو أعط كل كتلة معرف المانحة. مراقبة الصور من كل كتلة المانحة على شاشة الكمبيوتر المكتسبة تلقائيا من قبل microarrayer الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدءا من الكتلة الأولى، انقر على &quot;الشرائح&quot;. مراقبة الشريحة الرقمية المشروح المخزنة في مركز إدارة الشريحة الرقمية (أو على محرك أقراص خارجي) باستخدام عارض الشرائح الرقمية. عرض صورة كتلة المانحة وجنبا إلى جنب الشريحة الرقمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد نقاط مرجعية على الصورة كتلة إلى كتلة ركب الصورة المانحة مع الشريحة الرقمية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد النقر على &quot;التالي&quot;، ومراقبة شروح على صورة أكبر من الكتلة. (الشكل 5B &lt;/ قوي&gt;). انقر فوق شروح لتأكيد وانقر على &quot;ابدأ&quot;. ملاحظة: هذا يطالب microarrayer الأنسجة لبدء حفر حفرة من 0.6 ملم في القطر في كتلة المتلقي في نقطة الانطلاق المحدد. ثم في الخطوة الثانية، وذلك باستخدام أداة واللكم، والصك اللكمات ثقب في الأنسجة من كتلة المانحة المختارة في المنطقة المشروح وأكد بالضبط. ثم يتم نقلها النوى من الجهة المانحة إلى كتلة المتلقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ما يقرب من 500 النوى، وتنظيف الحفر واللكم أداة باستخدام مسحة من الزيلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وإذا رغبت النوى الأنسجة (بدلا من اللكمات إلى ngTMA)، انقر على &quot;PCR&quot; أداة للكتلة، وتأكيد ما يصل إلى 4 الشروح وضرب &quot;ابدأ&quot;. وهذا لكمة ونقل النوى في أنبوب 0.2 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر النقطة 4،9-4،11 مع كتلة المانحة الثاني، وهلم جرا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد استخدام جميع الكتل المانحة، أدخل الجولة الثانية من كتل المانحة (61-120) في ميكروأري الأنسجةإيه ومواصلة الخطوات 4،8-4،11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديث الصور المانحة والمتلقية كتلة في حين تقدم المشروع أثناء الحفر واللكم يحدث (الشكل 5C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء &quot;تصدير&quot; بعد اكتمال المشروع. تحديد موقع الملف .xslx مع معرفات المانحة والمتلقية كتلة، وتوطين جميع اللكمات داخل TMA فضلا عن تخطيط TMA / التصميم، في المجلد تصديرها. حفظ كافة الصور كتلة المانحة مع كل الشرح فرضه مثل jpg الصور في مجلد تصديرها (الشكل 5D). كتلة TMA النهائي هو بعد ذلك جاهزة. </li></ol>

<ol>
	<li>Kononen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+for+high-throughput+molecular+profiling+of+tumor+specimens.">Tissue microarrays for high-throughput molecular profiling of tumor specimens.</a> Nat Med. 4, 844-847 (1998).</li><li>Tzankov, A., Went, P., Zimpfer, A., Dirnhofer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray+technology:+principles,+pitfalls+and+perspectives--lessons+learned+from+hematological+malignancies.">Tissue microarray technology: principles, pitfalls and perspectives--lessons learned from hematological malignancies.</a> Exp Gerontol. 40, 737-744 (2005).</li><li>Barlund, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+activation+of+ribosomal+protein+S6+kinase+by+complementary+DNA+and+tissue+microarray+analysis.">Detecting activation of ribosomal protein S6 kinase by complementary DNA and tissue microarray analysis.</a> J Natl Cancer Inst. 92, 1252-1259 (2000).</li><li>Bubendorf, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+of+gene+amplifications+during+prostate+cancer+progression+by+high-throughout+fluorescence+in+situ+hybridization+on+tissue+microarrays.">Survey of gene amplifications during prostate cancer progression by high-throughout fluorescence in situ hybridization on tissue microarrays.</a> Cancer Res. 59, 803-806 (1999).</li><li>Garcia-Caballero, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-colour+CISH+is+a+reliable+alternative+to+FISH+for+assessment+of+topoisomerase+2-alpha+amplification+in+breast+carcinomas.">Dual-colour CISH is a reliable alternative to FISH for assessment of topoisomerase 2-alpha amplification in breast carcinomas.</a> Breast Cancer Res Treat. , 81-89 (2014).</li><li>Schraml, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+for+gene+amplification+surveys+in+many+different+tumor+types.">Tissue microarrays for gene amplification surveys in many different tumor types.</a> Clin Cancer Res. 5, 1966-1975 (1999).</li><li>Zlobec, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+RHAMM+within+the+hierarchy+of+well-established+prognostic+factors+in+colorectal+cancer.">Role of RHAMM within the hierarchy of well-established prognostic factors in colorectal cancer.</a> Gut. 57, 1413-1419 (2008).</li><li>Hsu, F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+are+an+effective+quality+assurance+tool+for+diagnostic+immunohistochemistry.">Tissue microarrays are an effective quality assurance tool for diagnostic immunohistochemistry.</a> Mod Pathol. 15, 1374-1380 (2002).</li><li>Marin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+BRAF+p.V600E+Mutations+in+Melanoma+by+Immunohistochemistry+Has+a+Good+Interobserver+Reproducibility.">Detection of BRAF p.V600E Mutations in Melanoma by Immunohistochemistry Has a Good Interobserver Reproducibility.</a> Arch Pathol Lab Med. , 71-75 (2014).</li><li>Polley, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+International+Ki67+Reproducibility+Study.">An International Ki67 Reproducibility Study.</a> J Natl Cancer Inst. , 1897-1906 (2013).</li><li>Zlobec, I., Terracciano, L., Jass, J. R., Lugli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+staining+intensity+in+the+interpretation+of+immunohistochemistry+for+tumor+markers+in+colorectal+cancer.">Value of staining intensity in the interpretation of immunohistochemistry for tumor markers in colorectal cancer.</a> Virchows Arch. 451, 763-769 (2007).</li><li>Zlobec, I., Koelzer, V. H., Dawson, H., Perren, A., Lugli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next-generation+tissue+microarray+(ngTMA)+increases+the+quality+of+biomarker+studies:+an+example+using+CD3,+CD8,+and+CD45RO+in+the+tumor+microenvironment+of+six+different+solid+tumor+types.">Next-generation tissue microarray (ngTMA) increases the quality of biomarker studies: an example using CD3, CD8, and CD45RO in the tumor microenvironment of six different solid tumor types.</a> J Transl Med. 11, 104 (2013).</li><li>Yoshida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+detection+of+ROS1+is+useful+for+identifying+ROS1+rearrangements+in+lung+cancers.">Immunohistochemical detection of ROS1 is useful for identifying ROS1 rearrangements in lung cancers.</a> Mod Pathol. , 711-720 (2014).</li><li>Droeser, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+pattern+and+prognostic+significance+of+CD4+,+FOXP3++and+IL-17++tumor+infiltrating+lymphocytes+in+ductal+and+lobular+breast+cancers.">Differential pattern and prognostic significance of CD4+, FOXP3+ and IL-17+ tumor infiltrating lymphocytes in ductal and lobular breast cancers.</a> BMC Cancer. 12, 134 (2012).</li><li>Fleischmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+receptors+are+differentially+expressed+in+Gleason+patterns+of+prostate+cancer+and+down-regulated+in+matched+lymph+node+metastases.">Androgen receptors are differentially expressed in Gleason patterns of prostate cancer and down-regulated in matched lymph node metastases.</a> Prostate. 71, 453-460 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+breast+cancer+susceptibility+gene+1+expression+is+a+potential+prognostic+biomarker+in+resectable+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Pattern of breast cancer susceptibility gene 1 expression is a potential prognostic biomarker in resectable pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Pancreas. 42, 977-982 (2013).</li><li>Fleischmann, A., Rotzer, D., Seiler, R., Studer, U. E., Thalmann, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Her2+amplification+is+significantly+more+frequent+in+lymph+node+metastases+from+urothelial+bladder+cancer+than+in+the+primary+tumours.">Her2 amplification is significantly more frequent in lymph node metastases from urothelial bladder cancer than in the primary tumours.</a> Eur Urol. 60, 350-357 (2011).</li><li>Zhang, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Annexin+A1+protein+expression+in+human+gastric+adenocarcinoma+using+proteomics+and+tissue+microarray.">Identification of Annexin A1 protein expression in human gastric adenocarcinoma using proteomics and tissue microarray.</a> World J Gastroenterol. 19, 7795-7803 (2013).</li><li>Chaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidermal+growth+factor+receptor+is+frequently+overexpressed+in+penile+squamous+cell+carcinomas:+a+tissue+microarray+and+digital+image+analysis+study+of+112+cases.">The epidermal growth factor receptor is frequently overexpressed in penile squamous cell carcinomas: a tissue microarray and digital image analysis study of 112 cases.</a> Hum Pathol. 44, 2690-2695 (2013).</li><li>McKenna, S. J., Amaral, T., Akbar, S., Jordan, L., Thompson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+analysis+of+breast+tissue+microarray+images+using+contextual+classifiers.">Immunohistochemical analysis of breast tissue microarray images using contextual classifiers.</a> J Pathol Inform. 4, S13 (2013).</li><li>Pages, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+memory+T+cells,+early+metastasis,+and+survival+in+colorectal+cancer.">Effector memory T cells, early metastasis, and survival in colorectal cancer.</a> N Engl J Med. 353, 2654-2666 (2005).</li><li>Komiya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+a+new+technique,+spiral+tissue+microarrays+constructed+using+needle+biopsy+specimens,+to+prostate+cancer+research.">Application of a new technique, spiral tissue microarrays constructed using needle biopsy specimens, to prostate cancer research.</a> Int J Oncol. 44, 195-202 (2014).</li><li>Quintayo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virtual+tissue+microarrays:+A+novel+and+viable+approach+to+optimising+tissue+micro-arrays+for+biomarker+research+applied+to+Ductal+Carcinoma+in+Situ+(DCIS).">Virtual tissue microarrays: A novel and viable approach to optimising tissue micro-arrays for biomarker research applied to Ductal Carcinoma in Situ (DCIS).</a> Histopathology. , 2-8 (2014).</li><li>Torata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+tablet+method:+an+efficient+tissue+banking+procedure+applicable+to+both+molecular+analysis+and+frozen+tissue+microarray.">Tissue tablet method: an efficient tissue banking procedure applicable to both molecular analysis and frozen tissue microarray.</a> Hum Pathol. 45, 143-152 (2014).</li></ol>

The authors have no disclosures

في هذه الورقة، ويرد بروتوكول للngTMA. ngTMA هو مفهوم المنشأة حديثا لmicroarraying الأنسجة تشمل التخطيط والتصميم، وعلم الأمراض الرقمية والشرح الشريحة وكذلك النسيج الآلي microarraying 12. مقارنة microarraying الأنسجة التقليدية، ngTMA يوفر مزايا عديدة. في الخطوة الأولى، مرحلة التخطيط والتصميم أمر بالغ الأهمية. وينصب التركيز على الإجابة على سؤال البحث المستهدفة. هذا ينبغي أن تأخذ في الاعتبار القضايا النسيجية (على سبيل المثال، التي الأقاليم وعدد البقع لا أريد أن تشمل؟)، والتخطيط الإحصائي (على سبيل المثال، حجم العينة؟ كيف يمكنني تحليل عينات بلدي وقت لاحق؟) والاعتبارات اللوجستية (على سبيل المثال، كيف العديد من المؤشرات الحيوية، وبالتالي كم عدد نسخ ngTMA؟). يتم إجراء ngTMA محددة لاحتياجات محددة، سواء كان للفحص العلامات البيولوجية والإنتاجية العالية أو يهدف إلى دراسة جوانب محددة بشأن النسيجية سوى عدد قليل من الاكاديمية المختارة جيداوفاق. واحدة، إن لم يكن، العيب أهم من microarraying الأنسجة التقليدية هو الدقة المنخفضة التي جعلت علامات على الشرائح النسيجية. يتم إجراء دراسة الهياكل النسيجية، خلايا أو مناطق محددة من المستحيل تقريبا. ngTMA يسمح لدقة عالية لأن توضع الشروح مباشرة على الشرائح الرقمية. وهذا يسمح الباحث لتحديد بالضبط الأقاليم على أن لكمات، بما في ذلك خلايا معينة. في هذا المثال، يتم كمات المناطق المختلفة داخل نفس الكتلة من الأنسجة لarraying، مثل مركز الأورام، وأمام الغزو ومجالات التفاعل ورم / سدى أبرزها وجود مجموعات الخلايا السرطانية صغيرة أو حتى الخلايا واحد. ويمكن تحقيق هذه الدقة فقط باستخدام ngTMA. وثالثا، لأن يتم فحص الشرائح في الصعود إلى منصة رقمية على شبكة الإنترنت، مرر عرض ويمكن إجراء التأشير من خلال الكمبيوتر بدلا من المجهر. البرنامج arraying الأنسجة يوفر للمستخدم وديةويمكن تحقيق التفاعل مع درجة عالية من المرونة، وبالتالي تخطيطات مختلفة وتصميم ngTMA. منذ يتم تنفيذ البناء TMA تلقائيا بواسطة الحفر، وهناك حاجة كبيرة لينخفض ​​بشكل ملحوظ التدريب العملي على المناورة ومقدار الوقت للبناء. الوقت لبناء TMA في هذا المثال هنا هو ما بين 24 ساعة. باستخدام نهج TMA التقليدية وتقدير اللكمات في 15 ساعة، فإن هذا المشروع سيستغرق ما يقرب من 304 ساعة. ngTMA يمكن تطبيقها لدراسة التعبير البروتين، مرنا أو DNA وكذلك مجموعات من هذه الشكل 9 يوضح العديد من هذه التطبيقات إلى المؤشرات الحيوية المحتملة. يمكن تطبيقها المناعية القياسية لتحديد مؤشر انتشار السرطان باستخدام كي 67. ويمكن استخدام نهج موحد للتحقيق في التعبير البروتين وتضخيم الحمض النووي لجينات مثل HER2. الأنسجة يمكن أن تجمع معا على ngTMA واحدة لخفض التكاليف، واستخدام الأنسجة والموارد الأخرىق. بالإضافة إلى ذلك، مرنا اللونية الموقع التهجين لHER2 وجينات أخرى يمكن أن يؤديها في تحديد النصوص مرنا واحدة في عدد كبير من الحالات باستخدام أقل عدد ممكن من شرائح الأنسجة. المناعية من علامات المناعة مثل CD8 يمكن تصور في سياق المكروية الورم. ويمكن أيضا أن تستخدم المناعية مزدوجة لتسليط الضوء على مناطق معينة من الاهتمام مثل التفاعلات بين الخلايا المناعية (المسمى باللون الأحمر) والخلايا السرطانية (المسمى في البني) في الجبهة غزو السرطان. لم يكن من الممكن القبض على هذه المنطقة ذات الاهتمام باستخدام microarraying الأنسجة التقليدية. ومع ذلك، هذا البروتوكول يحتوي على بعض القيود. التحدي الأكثر أهمية هو التداخل بين كتلة المانحة والشرائح الرقمية. عدة عوامل يمكن أن تؤثر هذه الخطوة. أولا، ينبغي أن تستخدم أحدث قسم من كتلة لمسح الشريحة. في كثير من الحالات، H &amp; E ليس هو القسم الأخير من كتلة المانحة، راذهص عليه هو وصمة عار المناعى أو غيرها. في هذه الحالة، أيضا شريحة الملون يمكن استخدامه طالما يتم مسح وصمة عار مشاركة وشرحها أو H &amp; E الجديد ينبغي. وينبغي أيضا توخي الحذر عند اتخاذ أقسام الأنسجة والأنسجة قد توسع في حمام الماء مما يؤدي إلى مطابقة تحديا من الشرائح وكتلة. ثانيا، في الوقت الراهن مشاريع تقتصر على 12 كتل المتلقي TMA معالجتها في وقت واحد. يجب تعيين مشاريع أكبر تتجاوز 12 الواجبات الشهرية إلى اسم المشروع الثاني. ثالثا، يجب أن يتم الكتل المانحة باستخدام القوالب وأشرطة القياسية كأداة لا يمكن ضبط نفسها إلى أحجام مختلفة. أخيرا، يجب أن الكتل المانحة يتجاوز ارتفاع الحد الأدنى (4 مم) لتحقيق الحفر الأمثل. في بعض الحالات، وهذا يتطلب reembedding من الأنسجة. مئات المنشورات على مدى السنوات القليلة الماضية تبرز TMA باعتبارها أداة لا تقدر بثمن لأبحاث العلامات البيولوجية. وقد استخدمت الواجبات الشهرية لدراسة الرئة 13، القولون والمستقيم 7، الفAST 14، 15 البروستاتا والبنكرياس 16، 17 المثانة، والمعدة 18 السرطان، على سبيل المثال لا الحصر. عدد متزايد من الكتاب والجمع بين استخدام الواجبات الشهرية مع تبذل تحليل الصور وخطوات كبيرة في هذا الاتجاه 19-21. ولكن، إلى جانب حفنة من المجموعات البحثية التي نشرت أفكار مبتكرة TMA 22-24، تم إيلاء اهتمام يذكر لتحسين أسلوب TMA نفسها. microarrayers النسيج الآلي، مثل ATA-27 بواسطة Estigen / بيتشر لا توفر تصميم وتخطيط المناسب الآلي واللكم الأنسجة. لكن هذا يمثل فقط 1 جانب من جوانب مفهوم ngTMA. ngTMA هو تحسن كبير على تقنيات microarraying الأنسجة التقليدية. وهو يتضمن خبرة في علم الأنسجة وتصميم TMA مع مرونة علم الأمراض الرقمية ودقة الشروح الرقمية مع سرعة وموثوقية الآلي البناء TMA. مزيج من ngTMوهناك وتحليل الصور لتقييم البروتين والمؤشرات الحيوية الجزيئية أن تكون أداة قوية لزيادة تحسين نوعية البحوث السريرية ومتعدية في المستقبل.

على مدى العقدين الماضيين، وكان ميكروأرس الأنسجة (الواجبات الشهرية) لها تأثير ملحوظ على الدراسات التحقيق العلامات البيولوجية. الواجبات الشهرية هي أساسا النسيج &quot;المحفوظات&quot; التي تنتجها نقل المتكررة من الأنسجة النوى الصغيرة، وعادة ما يتراوح حجم 0،6-2،0 مم في القطر، وجزءا لا يتجزأ من البارافين كتل &quot;المانحة إلى TMA&quot; المتلقي &quot;كتلة واحدة (الشكل 1) 1. باستخدام حجم نواة صغيرة، حوالي 500 البقع الأنسجة المختلفة من عدد قليل أو كثير من المرضى مختلفة يمكن المحتشدة في واحدة TMA 2. استخدام الواجبات الشهرية للدراسات العلامات البيولوجية النذير أو التنبؤية لديه العديد من المزايا. النظر في المثال حيث التعبير عن العلامات البيولوجية البروتين المناعية ليتم تقييمها على 450 مريضا. بدلا من أداء 450 البقع المناعى على 450 الشرائح المريض مقطوع من نفس العدد من القطع، والنوى صغيرة من كل عينة يمكن المحتشدة على واحد Tكتلة MA. ولو أخذت النوى متعددة من كل مريض على حدة، ويتم إنتاج عدد أقل من القطع. هذا له تأثير كبير في التقليل بشكل كبير من التكاليف والموارد الأخرى فضلا عن الحد من الهزال الأنسجة. بالإضافة إلى ذلك تتيح هذه الدراسات تعمل بشكل مناسب باستخدام عدد كبير من الأنسجة التي يتم تقييمها في ظل نفس الظروف التجريبية. الواجبات الشهرية لديها العديد من التطبيقات المختلفة. على سبيل المثال، يمكن استخدامها لدراسة مورفولوجية والبروتين التعبير والتعبير RNA والحمض النووي الانحرافات التالية تلطيخ بأصباغ مختلفة، أو بعد المناعية أو مولد اللون وحتى مضان في الموقع التهجين 3-7. وقد استخدمت الدراسات الحديثة أيضا الواجبات الشهرية لاختبار التباين داخل وبين المختبرات في بروتوكولات تلطيخ، ووضع خصوصية أو حساسية الأجسام المضادة لطفرات جينية معينة، وتحديد استنساخ بين الفاحصين من البروتين التعبير في التعاون الدولي <suع&gt; 8-11. بناء الواجبات الشهرية التقليدية باستخدام الأنسجة المشتقة من المريض هو عملية طويلة متعددة الإجراء خطوة (الشكل 2). ويبدأ في البحث عن الحالات المناسبة الممكنة واختيار الشرائح التشخيص من المحفوظات في معهد علم الأمراض، أو معهد آخر، من حيث استرجاع فيها. الطبيب الشرعي يقيم كل شريحة في حالة ويختار الشريحة الأكثر تمثيلا لأغراض الدراسة. بعد ذلك، يتم وضع علامة على المنطقة ذات الاهتمام باستخدام القلم مباشرة تحت المجهر. هذا غالبا ما يكون صعبا وغير دقيق والنتائج فقط في &quot;التقدير&quot; من حيث ينبغي أن تؤخذ من النسيج اللكمات. بعد ذلك، يتم استرداد الكتل البارافين المقابلة لهذه الشرائح ملحوظ من الأرشيف. يتم إجراء مقارنة سريعة بين كتلة والشرائح. باستخدام arrayer الأنسجة شبه الآلي أو محلية الصنع، واللكم كتلة المانحة في المنطقة يقدر المصالح ونقلها إلى المتلقي TMA كتلة. بناء الواجبات الشهرية باستخدام هذه التقنية arraying هو عمالة كثيفة، تستغرق وقتا طويلا، غير دقيق، وغير مرنة. ويقدر إعداد TMA من 475 نقاط في 3 نسخ ليستغرق حوالي 84 ساعة من العمل. تم إدخال نهج جديد لبناء الواجبات الشهرية مؤخرا من قبل معهد علم الأمراض في جامعة برن التي تعتمد على ثلاثة عناصر هي: التخطيط والتصميم (أو الاستشارات)، علم الأمراض الرقمي جنبا إلى جنب مع خبرة في علم الأنسجة والآلي TMA arraying 12. معا، ويسمى هذا المفهوم الجيل القادم الأنسجة ميكروأري (ngTMA). أدناه، يوصف بروتوكول للngTMA على أساس مثال على 134 مريضا يعانون من سرطان القولون والمستقيم المنتشر. هنا، والأورام الأولية وكذلك الانبثاث العقدة الليمفاوية والكبد الانبثاث هي أن المحتشدة في ngTMAs لتحليل العلامات البيولوجية لاحق. بالإضافة إلى ذلك، فإن المطلوب النوى الأنسجة صغيرة من كل مريض لاستخراج الحمض النووي في المستقبل.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="612">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Pannoramic 250 Flash II</td>
			<td style="width:111px;">3DHistech</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">TMA Grandmaster</td>
			<td style="width:111px;">3DHistech</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Tissue Microarrayer</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Pannoramic Viewer</td>
			<td style="width:111px;">3DHistech</td>
			<td style="width:119px;">free</td>
			<td>Slide viewing software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Case Center</td>
			<td style="width:111px;">3DHistech</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Digital slide platform</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a next-generation tissue microarray (ngtma) protocol for biomarker studies

يعتمد البحث على العلامات البيولوجية ميكروأرس الأنسجة (TMA). يتم إنتاج الواجبات الشهرية المتكررة عن طريق التحويل من النوى الأنسجة صغيرة من كتلة &quot;المانحة&quot; إلى &quot;المتلقي&quot; كتلة ومن ثم تستخدم لمجموعة متنوعة من التطبيقات العلامات البيولوجية. بناء الواجبات الشهرية التقليدي هو عمالة كثيفة، غير دقيق، وتستغرق وقتا طويلا. هنا، ويرد بروتوكول باستخدام الجيل المقبل من ميكروأرس الأنسجة (ngTMA). ويستند ngTMA على تخطيط وتصميم TMA، علم الأمراض الرقمي، وmicroarraying النسيج الآلي. ويتضح بروتوكول باستخدام مثال من 134 النقيلي مرضى سرطان القولون والمستقيم. وتعتبر الجوانب النسيجية والإحصائية واللوجستية، مثل نوع الأنسجة، والمناطق النسيجية محددة، وأنواع الخلايا لإدراجها في TMA، وعدد من البقع الأنسجة، وحجم العينة، والتحليل الإحصائي، وعدد النسخ TMA. يتم فحص الشرائح النسيجية لكل مريض وتحميلها على منصة رقمية على شبكة الإنترنت. هناك، ينظر آن وأنهمotated (علامة) باستخدام أداة قطرها 0،6-2،0 مم، عدة مرات باستخدام مختلف الألوان للتمييز بين المناطق الأنسجة. يتم تحميل كتل المانحة و12 &#39;المتلقية كتل في الصك. يتم استرداد الشرائح الرقمية ومطابقة الصور لكتلة المانحة. arraying المتكررة من المناطق المشروح تلقائيا أديت يؤدي في ngTMA. في هذا المثال، يتم التخطيط ستة ngTMAs تحتوي على ستة أنواع الأنسجة المختلفة / المناطق النسيجية. والمطلوب نسختين من ngTMAs. ثلاثة إلى أربعة شرائح ليتم فحص كل مريض. 3 يعمل المسح الضوئي ضرورية وأداء بين عشية وضحاها. والمشروح كافة الشرائح. وتستخدم الألوان المختلفة لتمثيل الأنسجة المختلفة / مناطق، وهي مركز الورم، والغزو الجبهة، ورم / سدى، الانبثاث العقدة الليمفاوية، الانبثاث الكبد والأنسجة الطبيعية. 17 الشروح / مصنوعة القضية؛ الوقت لشرح 2-3 دقيقة / حالة. يتم إنتاج 12 ngTMAs تحتوي على 4،556 البقع. Arraying الوقت هو 15-20 ساعة. نظرا الى الدقة والمرونة والسرعة، ngTMA هي قويةأداة لزيادة تحسين نوعية الواجبات الشهرية المستخدمة في البحوث السريرية ومتعدية.

التخطيط والتصميم هنا استخدمت سبيل المثال من 134 المرضى الذين يعانون من سرطان القولون والمستقيم المنتشر التي يجري التحقيق لسلسلة معينة من المؤشرات الحيوية. ليس فقط هو ngTMA المخطط لهؤلاء المرضى، ولكن استخراج الحمض النووي تليها تحليل طفرية لبعض الجينات المحددة. خلال مرحلة تخطيط وتصميم ngTMA، وقد قرر الجوانب التالية. من كل مريض، وسيتم التحقيق النسيجية 6 مناطق مختلفة: مركز الورم، غزو الورم الجبهة، ومناطق أكثف ورم في مهدها (ورم / سدى التفاعل)، الأنسجة الطبيعية، الانبثاث العقدة الليمفاوية والانبثاث الكبد. ثلاثة مراكز في منطقة الورم ورم الأنسجة ومركزين الأنسجة الطبيعية هي التي ينبغي إدراجها في المشروع (ن = 17 نقاط لكل مريض). منذ ومن المقرر أن أكثر من 50 المؤشرات الحيوية يتم التحقيق في هذه المواد المرضى، والمطلوب نسختين من ngTMA نهائي. نظرا لاحتمال صغر حجم العقدة الليمفاوية وdistanر الانبثاث، يتم اختيار نواة صغيرة قطرها 0.6 مم لبناء TMA لجميع الأنسجة. بالإضافة إلى ذلك، من المقرر أن يتم كل منطقة المحتشدة على حدة، بحيث سيتم إنتاج 6 ngTMAs تحتوي على مناطق مختلفة النسيجية: ngTMA تحتوي على أنسجة من أ) مركز الورم، ب) أمام الغزو، ومناطق ج) ورم في مهدها، د) الأنسجة الطبيعية ، ه) الانبثاث العقدة الليمفاوية، و) الانبثاث الكبد. لتصميم TMA باستخدام أداة 0.6 ملم، وسيتم اختيار مسافة مريحة من 0.4 ملم بين اللكمات. لتقييم البقع الأنسجة في صفوف طويلة والأعمدة غالبا ما يكون ممل، ويتم اختيار اثنين من التصاميم المختلفة. لكتل الورم مع 3 اللكمات في منطقة الأنسجة، ويتم إنشاء تصميم تحتوي على ستة أجزاء. وهذا يؤدي إلى إجمالي عدد 402 اللكمات الأنسجة. لكمات الأنسجة الطبيعية، 2 اللكمات في حالة هي التي ينبغي إدراجها. يتم اختيار وتخطيط تركيب 432 اللكمات في المجموع. وعلاوة على ذلك، على كل حال، ما يصل إلى 4وبالإضافة إلى ذلك يمكن لكمات في النوى 0.6 ملم بها ووضعها في أنابيب 0.2 مل. كما سيتم المشروح هذه النوى الأنسجة. لتلخيص، وسيتم إنتاج 6 ngTMAs من الأنسجة المختلفة (5 × 3 المصفوفات الورم اللكمات اكس 134 مريضا، مجموعة الأنسجة الطبيعية 1 × 2 اللكمات س 134 مريضا) بالإضافة إلى 4 النوى لكل مريض للأنابيب. أخذت معا، ستبذل 2814 شروحه. بعد ذلك، يتم استرداد المقابلة الشرائح H &amp; E من المرضى المختارين من الأرشيف الشريحة. يتم مراجعة كل حالة على حدة لفترة وجيزة من قبل الطبيب الشرعي ويتم اختيار معظم الشرائح تمثيلية من كل نوع الأنسجة. المسح الضوئي تصنع الشرائح الرقمية من كل قسم النسيجي لشرح المستقبل. لهذه الدراسة، 3-4 شرائح الأنسجة هي التي يتم مسحها ضوئيا لكل حالة، أي سرطان القولون والمستقيم الابتدائي، مع أو بدون الأنسجة المجاورة العادية، الانبثاث العقدة الليمفاوية والانبثاث الكبد وربما ليخدع شريحة إضافيةtaining الغشاء المخاطي الطبيعي. تصل إلى 10 مجلات مختلفة يمكن تحميلها بالكامل في الشريحة الماسح الضوئي. ول250 الشرائح يمكن مسحها في شوط واحد. الوقت لمسح وحجم الشريحة الرقمية يختلف مع أبعاد الأنسجة وعامل الجودة المطلوبة. نطاقات عامل الجودة من 0 إلى 100. هنا، يتم تحديد عامل نوعية 60، لأنها تنتج حجم ملف أصغر المسح الضوئي دون أي خسارة ملحوظة من جودة المسح الضوئي. خزعات صغيرة يمكن مسحها في أقل من 30 ثانية في حين أقسام الأنسجة بأكملها، مثل تلك المستخدمة في هذا المثال قد يستغرق ما بين 2 و 10 دقيقة. حجم الشريحة الرقمية يمكن أن تتراوح أيضا من 2 ميغابايت إلى 2 غيغابايت. باستخدام عامل الجودة من 60، يمسح بين 600 MB و 1 GB يتم إنتاجها. والمطلوب بين 402 و 536 الشرائح لهذا المشروع تبلغ 3 أشواط المسح. يتم تنفيذ كل تشغيل بين عشية وضحاها. ثمة حاجة إلى نحو 500 غيغابايت من مساحة التخزين. يتم فحص الشرائح مباشرة على منصة رقمية دعا مركز حالة (ngtma.unibe.pathcasecenter). مركز حالة يمكن الوصول إليها من أي مكان مع الوصول إلى شبكة الإنترنت عن طريق إدخال اسم المستخدم وكلمة المرور المعينة. الشرح عن الشرح، ينبغي النظر جانبين هما: 1) مناطق الأنسجة المختلفة ينبغي إعطاء ألوان مختلفة والشرح 2) يجب أن تعكس عدد من الشروح عدد النسخ المطلوب من ngTMA نهائي. في هذه الحالة، تم اختيار 3 مناطق في منطقة الورم لنسخة واحدة. ل2 نسخة، يجب المشروح كل منطقة باستخدام 6 نقاط. هي مفيدة الأخضر لالأنسجة الطبيعية والأزرق للمركز الورم والأصفر للجبهة غزو الورم، والأحمر للمناطق الورم في مهدها (ورم / سدى) التفاعل، أسود لالانبثاث العقدة الليمفاوية، والفيروز لالانبثاث البعيدة والأبيض أخيرا لمناطق ليكون تستخدم الأنابيب. الشرح كل حالة تتطلب 2-3 دقائق. البناء ngTMA تتطلب هذه الدراسة 6 ngTMA كتل رس يتم بناؤها في 2 نسخة، مما أسفر عن 12 قطاعا النهائية. الحد الأقصى لعدد كتل المستفيدة التي يمكن دعمها من قبل arrayer هو 12. سوف تحتوي كل كتلة ورم 402 البقع الأنسجة وسوف تحتوي كل كتلة الأنسجة العادي 268 نقاط، أي ما مجموعه 4،556 البقع في جميع أنحاء المشروع بأكمله. يتم إنشاء تخطيط TMA لكل كتلة المتلقي ويتم حفظ المشروع (أرقام 6A، 6B). 60 كتل الأنسجة يمكن تحميلها في microarrayer الأنسجة بالتوازي. يتم أخذ صورة من كل كتلة المانحة. بدءا من أول كتلة المانحة، يتم استرداد المقابلة المشروح الشريحة الرقمية من مركز حالة. يتم إجراء مطابقة الشريحة، التي يمكن أن يستغرق ما بين 1-3 دقائق. وأكد الشروح ويتم مطالبة arrayer لبدء اللكم (الشكل 7). الأساسية اللكم ونقل ما يقرب من 12 مرة في الثانية. فقدان النوى أثناء هذا الإجراء هو الحد الأدنى. الوقت الإجمالي لarraying هذا المشروع ما يقرب من 24 ساعة، بما في ذلك الوقت لسليدي / مطابقة كتلة وإعادة تحميل الصك. ويوضح بعض الأمثلة على ngTMA في الشكل 8A. ويمكن أيضا النوى للتحليل الجزيئي لاحق لكمة خارج في هذا الوقت (الشكل 8B). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig1highres.jpg" width="500" /> الشكل 1.) كتلة &quot;المانحة&quot;. واللكم النوى من كتلة المانحة بها ونقلها إلى B) كتلة المتلقي، أو الأنسجة ميكروأري (TMA). <img alt="الشكل 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig2highres.jpg" width="500" /> الرقم 2. التقليدي سير العمل ميكروأري الأنسجة. A) يتم استرداد الشرائح النسيجية من الأرشيف وB) تعطى للو الطبيب الشرعي<html> أو الاستعراض. ​​مصنوعة CD) الشروح على الشرائح تشير إلى المنطقة تقدر &quot;للنقل. E) يتم استرداد كتل الأنسجة المقابلة. تتم مقارنة F) كتلة وشريحة لمطابقة، والتي يمكن G) تكون أحيانا مهمة صعبة. HJ يتم نقل مرارا وتكرارا) الأنسجة microarraying ثم يأخذ مكان. K) النوى والتي شيدت L) وTMA النهائي. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig3highres.jpg" width="500" /> الشكل 3.) ما يصل إلى 25 الشرائح يمكن وضعها في كل مجلة للمسح الضوئي. B) تعديلات على عامل الجودة ويمكن إجراء الحجم. يمكن رصد تقدم المسح الضوئي. &quot;SRC =&quot; / الملفات / ftp_upload / 51893 / 51893fig4highres.jpg &quot;العرض =&quot; 600 &quot;/&gt; يمكن تحميل شخصية 4. A) الممسوحة ضوئيا الشرائح على منصة على شبكة الإنترنت، مركز القضية. B) الشرائح الرقمية يمكن عرضها. الأداة الشرح TMA تسمح للمستخدم لاختيار حجم ولون الأساسية اللازمة لالشرح. C) يمكن وضع الشروح مباشرة على الشريحة الرقمية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51893/51893fig4highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig5highres.jpg" width="500" /> الرقم 5.) ما يصل إلى 60 كتل يمكن تحميلها في microarrayer الأنسجة، وهي 10 كتل المانحة لكل صف و 12 المتلقين كتل كذلك. B) صورة من كل كتلة المانحة يؤخذ والرقمية وطابيتم استرداد لتر الشريحة. يتم مطابقة كتلة والشرائح وتستخدم الشروح لكتلة اللكم. C) يمكن رصد التقدم المحرز في arraying بينما الصك واللكم. D) بعد يتم تنفيذ اللكم، وتصدير موقع كل بقعة في التخطيط ولكن كما يتم إجراء صورة كل كتلة المانحة مع الشروح المقابلة. <img alt="الرقم 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig6highres.jpg" width="500" /> الشكل 6. واستخدمت هذه تخطيطات TMA للarraying ألف) كتل الورم وB) الأنسجة الطبيعية. <img alt="الرقم 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig7highres.jpg" width="500" /> الرقم 7. قطة من البرنامج microarrayer الأنسجة. على اليسار، إعادة 12يمكن وضع كتل cipient في الصك. في القاع، تؤخذ الصور من كل كتلة المانحة. في الوسط، تخطيط TMA، وجدت على التقدم من اللكم وكذلك صور مكبرة من كل كتلة المانحة مع شروحه. <img alt="الرقم 8" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig8highres.jpg" width="500" /> الرقم 8. A) بعض الأمثلة على كتل ngTMA تم إنشاؤه حديثا. B) اللكمات النسيج إضافية يمكن اتخاذها للتحليل الجزيئي لاحق. واللكم من هذه النوى ووضعها في أنابيب 0.2 مل. <img alt="الرقم 9" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51893/51893fig9highres.jpg" width="600" /> الرقم 9. أمثلة على التطبيقات العلامات البيولوجية ngTMA. A) المناعية تلطيخ Ki67 في سرطان القولون والمستقيم. سعادة مزدوجةR2 المناعية / في الموقع التهجين الفحص تبين B) التعبير منخفضة من البروتين (البني) ولا التضخيم من الجين HER2 (أسود) نسبة إلى السنترومير (الحمراء)، C) التعبير عالية من البروتين (البني) وتضخيم الجين HER2 ( السوداء) نسبة إلى السنترومير (الحمراء). D) اللونية الموقع التهجين من HER2 في إظهار النصوص مرنا واحدة في سرطان الثدي ngTMA. E) المناعية لCD8 في سرطان القولون والمستقيم. F) مزدوجة صمة عار المناعية للعلامة عموم cytokeratin AE1 / AE3 (البني. الخلايا السرطانية) وCD68 (الأحمر؛ الضامة) إبراز المكروية الورم في سرطان القولون والمستقيم <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51893/51893fig9highres.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Next-generation Tissue Microarray ngTMA Protocol for Biomarker Studies at JoVE.com

A Next-generation Tissue Microarray ngTMA Protocol for Biomarker Studies

يهدف البروتوكول في تحقيق الاستفادة المثلى من البناء ونوعية ميكروأرس الأنسجة للأبحاث العلامات البيولوجية. ويشمل جوانب التخطيط والتصميم، وعلم الأمراض الرقمي، الشرح الشريحة الظاهري، وarraying النسيج الآلي.

الجيل المقبل من الأنسجة ميكروأري (ngTMA) بروتوكول للدراسات العلامات البيولوجية

Biomarker research relies on tissue microarrays (TMA). TMAs are produced by repeated transfer of small tissue cores from a &#8216;donor&#8217; block into ...

a-next-generation-tissue-microarray-ngtma-protocol-for-biomarker

Research

JoVE Journal

Medicine

A Next-generation Tissue Microarray (ngTMA) Protocol for Biomarker Studies

23.8K Views.  University of Bern.  يهدف البروتوكول في تحقيق الاستفادة المثلى من البناء ونوعية ميكروأرس الأنسجة للأبحاث العلامات البيولوجية. ويشمل جوانب التخطيط والتصميم، وعلم الأمراض الرقمي، الشرح الشريحة الظاهري، وarraying النسيج الآلي. 

Video: A Next-generation Tissue Microarray ngTMA Protocol for Biomarker Studies

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting. Protocols that allow researchers to study the biological pathways of the stress response in health and disease are fundamental to the progress of research in stress and anxiety.1 Although numerous protocols exist for inducing stress response in the laboratory, many neglect to provide a naturalistic context or to incorporate aspects of social and psychological stress. Of psychological stress protocols, meta-analysis suggests that the Trier Social Stress Test (TSST) is the most useful and appropriate standardized protocol for studies of stress hormone reactivity.2 In the original description of the TSST, researchers sought to design and evaluate a procedure capable of inducing a reliable stress response in the majority of healthy volunteers.3 These researchers found elevations in heart rate, blood pressure and several endocrine stress markers in response to the TSST (a psychological stressor) compared to a saline injection (a physical stressor).3 Although the TSST has been modified to meet the needs of various research groups, it generally consists of a waiting period upon arrival, anticipatory speech preparation, speech performance, and verbal arithmetic performance periods, followed by one or more recovery periods. The TSST requires participants to prepare and deliver a speech, and verbally respond to a challenging arithmetic problem in the presence of a socially evaluative audience.3 Social evaluation and uncontrollability have been identified as key components of stress induction by the TSST.4 In use for over a decade, the goal of the TSST is to systematically induce a stress response in order to measure differences in reactivity, anxiety and activation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) or sympathetic-adrenal-medullary (SAM) axis during the task.1 Researchers generally assess changes in self-reported anxiety, physiological measures (e.g. heart rate), and/or neuroendocrine indices (e.g. the stress hormone cortisol) in response to the TSST. Many investigators have adopted salivary sampling for stress markers such as cortisol and alpha-amylase (a marker of autonomic nervous system activation) as an alternative to blood sampling to reduce the confounding stress of blood-collection techniques. In addition to changes experienced by an individual completing the TSST, researchers can compare changes between different treatment groups (e.g. clinical versus healthy control samples) or the effectiveness of stress-reducing interventions.1

This article describes a protocol for inducing psychological stress in participants, which enables researchers to measure psychological, physiological and neuroendocrine responses to stress within single participants or between groups.

اختبار الإجهاد ترير الاجتماعي بروتوكول لإحداث الضغط النفسي

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

Over the past ten years, corneal transplantation surgical techniques have undergone revolutionary changes1,2. Since its inception, traditional full thickness corneal transplantation has been the treatment to restore sight in those limited by corneal disease. Some disadvantages to this approach include a high degree of post-operative astigmatism, lack of predictable refractive outcome, and disturbance to the ocular surface. The development of Descemet's stripping endothelial keratoplasty (DSEK), transplanting only the posterior corneal stroma, Descemet's membrane, and endothelium, has dramatically changed treatment of corneal endothelial disease. DSEK is performed through a smaller incision; this technique avoids 'open sky' surgery with its risk of hemorrhage or expulsion, decreases the incidence of postoperative wound dehiscence, reduces unpredictable refractive outcomes, and may decrease the rate of transplant rejection3-6.
Initially, cornea donor posterior lamellar dissection for DSEK was performed manually1 resulting in variable graft thickness and damage to the delicate corneal endothelial tissue during tissue processing. Automated lamellar dissection (Descemet's stripping automated endothelial keratoplasty, DSAEK) was developed to address these issues. Automated dissection utilizes the same technology as LASIK corneal flap creation with a mechanical microkeratome blade that helps to create uniform and thin tissue grafts for DSAEK surgery with minimal corneal endothelial cell loss in tissue processing.
Eye banks have been providing full thickness corneas for surgical transplantation for many years. In 2006, eye banks began to develop methodologies for supplying precut corneal tissue for endothelial keratoplasty. With the input of corneal surgeons, eye banks have developed thorough protocols to safely and effectively prepare posterior lamellar tissue for DSAEK surgery. This can be performed preoperatively at the eye bank. Research shows no significant difference in terms of the quality of the tissue7 or patient outcomes8,9 using eye bank precut tissue versus surgeon-prepared tissue for DSAEK surgery. For most corneal surgeons, the availability of precut DSAEK corneal tissue saves time and money10, and reduces the stress of performing the donor corneal dissection in the operating room. In part because of the ability of the eye banks to provide high quality posterior lamellar corneal in a timely manner, DSAEK has become the standard of care for surgical management of corneal endothelial disease.
The procedure that we are describing is the preparation of the posterior lamellar cornea at the eye bank for transplantation in DSAEK surgery (Figure 1).

Endothelial corneal transplantation is a surgical technique for treatment of posterior corneal diseases. Mechanical microkeratome dissection to prepare tissue results in thinner, more symmetric grafts with less endothelial cell loss and improved outcomes. Dissections can be performed at the eye bank prior to corneal transplantation surgery.

القرنية تحضير الأنسجة من الجهات المانحة لغشائي keratoplasty

Over the past ten years, corneal transplantation surgical techniques have undergone revolutionary changes1,2. Since its inception, traditional full ...

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

بروتوكول لجمع البنكرياس الإنسان

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of microvasculature at the site of inflammation. Parabiotic partners share their circulating antigens and thus are free of adverse immune reaction. First described by Paul Bert in 18641, the parabiosis surgery was refined by Bunster and Meyer in 1933 to improve animal survival2. In the current protocol, two mice are surgically joined following a modification of the Bunster and Meyer technique. Animals are connected through the elbow and knee joints followed by attachment of the skin allowing firm support that prevents strain on the sutured skin. Herein, we describe in detail the parabiotic joining of a ubiquitous GFP expressing mouse to a wild type (WT) mouse. Two weeks after the procedure, the pair is separated and GFP positive cells can be detected by flow cytometric analysis in the blood circulation of the WT mouse. The blood chimerism allows one to examine the contribution of the circulating cells from one animal in the other.

Parabiotic joining of two organisms leads to the development of a shared circulatory system. In this protocol, we describe the surgical steps to form a parabiotic connection between a wild-type mouse and a constitutive GFP-expressing mouse.

تعايش التصاقي في الفئران: بروتوكول مفصل

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Microarray-based Identification of Individual HERV Loci Expression: Application to Biomarker Discovery in Prostate Cancer

The prostate-specific antigen (PSA) is the main diagnostic biomarker for prostate cancer in clinical use, but it lacks specificity and sensitivity, particularly in low dosage values1&#8203;&#8203;. &#8216;How to use PSA&#39; remains a current issue, either for diagnosis as a gray zone corresponding to a concentration in serum of 2.5-10 ng/ml which does not allow a clear differentiation to be made between cancer and noncancer2 or for patient follow-up as analysis of post-operative PSA kinetic parameters can pose considerable challenges for their practical application3,4. Alternatively, noncoding RNAs (ncRNAs) are emerging as key molecules in human cancer, with the potential to serve as novel markers of disease, e.g. PCA3 in prostate cancer5,6 and to reveal uncharacterized aspects of tumor biology. Moreover, data from the ENCODE project published in 2012 showed that different RNA types cover about 62% of the genome. It also appears that the amount of transcriptional regulatory motifs is at least 4.5x higher than the one corresponding to protein-coding exons. Thus, long terminal repeats (LTRs) of human endogenous retroviruses (HERVs) constitute a wide range of putative/candidate transcriptional regulatory sequences, as it is their primary function in infectious retroviruses. HERVs, which are spread throughout the human genome, originate from ancestral and independent infections within the germ line, followed by copy-paste propagation processes and leading to multicopy families occupying 8% of the human genome (note that exons span 2% of our genome). Some HERV loci still express proteins that have been associated with several pathologies including cancer7-10. We have designed a high-density microarray, in Affymetrix format, aiming to optimally characterize individual HERV loci expression, in order to better understand whether they can be active, if they drive ncRNA transcription or modulate coding gene expression. This tool has been applied in the prostate cancer field (Figure 1).

Human endogenous retroviruses (HERV), which occupy 8% of the human genome, retain scarce coding capacities but a hundred thousand long terminal repeats (LTRs). A custom Affymetrix microarray was designed to identify individual HERV locus expression and was used on prostate cancer tissues as a proof of concept for future clinical studies.

تحديد القائمة على ميكروأري من الفردية هيرفي الامكنه التعبير: التطبيق على العلامات البيولوجية ديسكفري في سرطان البروستاتا

The prostate-specific antigen (PSA) is the main diagnostic biomarker for prostate cancer in clinical use, but it lacks specificity and sensitivity, ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality DNA. However, DNA extraction from saliva can yield high quality DNA with little to no degradation/fragmentation that is suitable for a variety of DNA assays without the expense of a phlebotomist and can even be acquired through the mail. However, at present, no saliva DNA collection/extraction protocols for next generation sequencing have been presented in the literature. This protocol optimizes parameters of saliva collection/storage and DNA extraction to be of sufficient quality and quantity for DNA assays with the highest standards, including microarray genotyping and next generation sequencing.

DNA extraction from saliva can provide a readily available source of high molecular weight DNA, with little to no degradation/fragmentation. This protocol provides optimized parameters for saliva collection/storage and DNA extraction to be of sufficient quality and quantity for downstream DNA assays with high quality requirements.

جمع واستخراج الحمض النووي من اللعاب لتسلسل الجيل القادم

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Utilizing Murine Inducible Telomerase Alleles in the Studies of Tissue Degeneration/Regeneration and Cancer

Telomere dysfunction-induced loss of genome integrity and its associated DNA damage signaling and checkpoint responses are well-established drivers that cause tissue degeneration during ageing. Cancer, with incidence rates greatly increasing with age, is characterized by short telomere lengths and high telomerase activity. To study the roles of telomere dysfunction and telomerase reactivation in ageing and cancer, the protocol shows how to generate two murine inducible telomerase knock-in alleles 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT)-inducible TERT-Estrogen Receptor (mTERT-ER) and Lox-Stopper-LoxTERT (LSL-mTERT). The protocol describes the procedures to induce telomere dysfunction and reactivate telomerase activity in mTERT-ER and LSL-mTERT mice in vivo. The representative data show that reactivation of telomerase activity can ameliorate the tissue degenerative phenotypes induced by telomere dysfunction. In order to determine the impact of telomerase reactivation on tumorigenesis, we generated prostate tumor model G4 PB-Cre4 PtenL/L p53L/L LSL-mTERTL/L and thymic T-cell lymphoma model G4 Atm-/- mTERTER/ER. The representative data show that telomerase reactivation in the backdrop of genomic instability induced by telomere dysfunction can greatly enhance tumorigenesis. The protocol also describes the procedures used to isolate neural stem cells (NSCs) from mTERT-ER and LSL-mTERT mice and reactivate telomerase activity in NSCs in vitro. The representative data show that reactivation of telomerase can enhance the self-renewal capability and neurogenesis in vitro. Finally, the protocol describes the procedures for performing telomere FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) on both mouse FFPE (Formalin Fixed and Paraffin Embedded) brain tissues and metaphase chromosomes of cultured cells.

Telomere and telomerase play essential roles in ageing and tumorigenesis. The goal of this protocol is to show how to generate two murine inducible telomerase knock-in alleles and how to utilize them in the studies of tissue degeneration/regeneration and cancer.

استخدام الفئران محرض التيلوميراز الأليلات في الدراسات التي أجريت على الأنسجة تنكس / التجديد والسرطان

Telomere dysfunction-induced loss of genome integrity and its associated DNA damage signaling and checkpoint responses are well-established drivers that ...

Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the knees by using different forms of mesenchymal stem cells (MSCs). In Korea, bone marrow concentrates and cord blood-derived stem cells have been approved by the Korean Food and Drug Administration (KFDA) for cartilage regeneration. In addition, an adipose tissue-derived stromal vascular fraction (SVF) has been allowed by the KFDA for joint injections in human patients. Autologous adipose tissue-derived SVF contains extracellular matrix (ECM) in addition to mesenchymal stem cells. ECM excretes various cytokines that, along with hyaluronic acid (HA) and platelet-rich plasma (PRP) activated by calcium chloride, may help MSCs to regenerate cartilage and improve knee functions. In this article, we presented a protocol to improve knee functions by regenerating cartilage-like tissue in human patients with OA. The result of the protocol was first reported in 2011 followed by a few additional publications. The protocol involves liposuction to obtain autologous lipoaspirates that are mixed with collagenase. This lipoaspirates-collagenase mixture is then cut and homogenized to remove large fibrous tissue that may clog up the needle during the injection. Afterwards, the mixture is incubated to obtain adipose tissue-derived SVF. The resulting adipose tissue-derived SVF, containing both adipose tissue-derived MSCs and remnants of ECM, is injected into knees of patients, combined with HA and calcium chloride activated PRP. Included are three cases of patients who were treated with our protocol resulting in improvement of knee pain, swelling, and range of motion along with MRI evidence of hyaline cartilage-like tissue.

Here, we present a protocol to produce an adipose tissue-derived stromal vascular fraction and its application to improve knee functions by regenerating cartilage-like tissue in human patients with osteoarthritis.

بروتوكول السريرية لإنتاج كسر الأوعية الدموية Stromal المستمدة من الأنسجة الدهنية لتجديد الغضاريف المحتملة

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...

Observational Study Protocol for Repeated Clinical Examination and Critical Care Ultrasonography Within the Simple Intensive Care Studies

Longitudinal evaluations of critically ill patients by combinations of clinical examination, biochemical analysis and critical care ultrasonography (CCUS) may detect adverse events of interventions such as fluid overload at an early stage. The Simple Intensive Care Studies (SICS) is a research line that focuses on the prognostic and diagnostic value of combinations of clinical variables.
The SICS-I specifically focused on the use of clinical variables obtained within 24 h of acute admission for prediction of cardiac output (CO) and mortality. Its sequel, SICS-II, focuses on repeated evaluations during ICU admission. The first clinical examination by trained researchers is performed within 3 h after admission consisting of physical examination and educated guessing. The second clinical examination is performed within 24 h after admission and includes physical examination and educated guessing, biochemical analysis and CCUS assessments of heart, lungs, inferior vena cava (IVC) and kidney. This evaluation is repeated at days 3 and 5 after admission. CCUS images are validated by an independent expert, and all data is registered in an online secured database. Follow-up at 90 days includes registration of complications and survival status according to patient&#39;s medical charts and the municipal person registry. The primary focus of SICS-II is the association between venous congestion and organ dysfunction.
The purpose of publishing this protocol is to provide details on the structure and methods of this on-going prospective observational cohort study allowing answering multiple research questions. The design of the data collection of combined clinical examination and CCUS assessments in critically ill patients are explicated. The SICS-II is open for other centers to participate and is open for other research questions that can be answered with our data.

Structured protocols are necessary to provide answers on research questions in critically ill patients. The Simple Intensive Care Studies (SICS) provides an infrastructure for repeated measurements in critically ill patients including clinical examination, biochemical analysis and ultrasonography. SICS projects have specific focus but the structure is flexible to other investigations.

بروتوكول الدراسة الرصدية للفحص السريري المتكرر والحرجة العناية بالموجات فوق الصوتية داخل الدراسات بسيطة من العناية المركزة

Longitudinal evaluations of critically ill patients by combinations of clinical examination, biochemical analysis and critical care ultrasonography (CCUS) ...

A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts and complications such as primary graft dysfunction and graft rejection. The recent clinical use of an ex vivo perfusion device in cardiac transplantation introduces a unique opportunity for treating cardiac allografts with therapeutic interventions to improve function and avoid deleterious recipient responses. Establishing a translational, large-animal model for therapeutic delivery to the entire allograft is essential for testing novel therapeutic approaches in cardiac transplantation. The porcine, heterotopic heart transplantation model in the intraabdominal position serves as an excellent model for assessing the effects of novel interventions and the immunopathology of graft rejection. This model additionally offers long-term survival for the pig, given that the graft is not required to maintain the recipient's circulation. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach for achieving ex vivo delivery of a therapeutic to the entire cardiac allograft prior to transplantation and provide technical details to perform a survival heterotopic transplant of the ex vivo perfused heart.

We present a protocol for utilizing a normothermic ex vivo sanguinous perfusion system for the delivery of therapeutics to an entire cardiac allograft in a porcine heterotopic heart transplant model.

بروتوكول زرع قلب غير متجانس من لحم الخنزير لتوصيل العلاجات إلى ألوغرافت القلب

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...