الكتاب أشكر البروفيسور توماس راينر، الدكتور يعقوب هوتون، والدكتور سيرج Lyaschenko لإجراء محادثات مفيدة.

أجريت جميع التجارب على الحيوانات في الجسم الحي وصفها وفقا لبروتوكول المعتمدة وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية للميموريال سلون كيترينج للسرطان مركز رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة (IACUC). 1. الإقتران من DFO-NCS لJ591 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في أنبوب microcentrifuge 1.7 مل، وإعداد حل 2-5 ملغ / مل من J591 في 1 مل من إما 1X الفوسفات مخزنة المالحة (7.4 درجة الحموضة) أو 0.5 M HEPES عازلة (7.4 درجة الحموضة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل DFO-NCS في DMSO جافة بتركيز بين 5-10 ملم (3،8-7،6 ملغ / مل). يصوتن أو دوامة الحل بدقة من أجل تسهيل حل كامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط درجة الحموضة من الحل J591 إلى 8،8-9،0 بإضافة مأخوذة الصغيرة (&lt;10 ميكرولتر) من 0.1 M نا 2 CO 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبمجرد أن حل الضد هو في درجة الحموضة الصحيحة، إضافة إلى حجم من الحل DFO-NCS الموافق 3-4 أضعاف الزيادة المولي من خالب bifunctional. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لامتحانسبيل، إضافة 4-5 ميكرولتر من 10 ملي (7.6 ملغ / مل) DFO-NCS الحل (40.4 نانومول DFO-NCS) إلى 1 مل من 2 ملغ / مل حل J591 الأجسام المضادة (13.3 نانومول J591). يجب أن لا تتجاوز كمية DMSO في النهائي مائي خليط التفاعل 2٪ ت / ت. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان رد فعل لمدة 30 دقيقة عند 37 ° C على تهييج كتلة التدفئة في 350 دورة في الدقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 ساعة عند 37 ° C، وتنقية immunoconjugate الناتجة باستخدام حجم المتاح العمود معبأة مسبقا استبعاد تحلية مع 50،000 الوزن الجزيئي قطع باستخدام 0.5 M HEPES عازلة (7.4 درجة الحموضة) مثل شاطف. وهذه الخطوة تسفر عن 2 مل من محلول من الانتهاء بناء J591-DFO. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس تركيز J591-DFO بناء على معمل الأشعة فوق البنفسجية فيس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان المطلوب تركيز أعلى للبناء، والتركيز على حل J591-DFO باستخدام وحدة تصفية الطرد المركزي مع 50،000 الوزن الجزيئي قطع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين حل الانتهاء immunoconjugate J591-DFO في -20 درجة مئوية في الظلام. <bص /&gt; ملاحظة: هذا هو نقطة توقف مقبولة في الإجراء. </li></ol> 2. Radiolabeling J591-DFO مع 89 عنصر الزركون تنبيه: هذه الخطوة من البروتوكول ينطوي على التعامل والتلاعب من النشاط الإشعاعي. قبل تنفيذ هذه الخطوات أو أداء أي عمل آخر مع الباحثين النشاط الإشعاعي يجب التشاور مع إدارة الصحة والسلامة من الإشعاع مؤسسة وطنهم و. ينبغي اتخاذ جميع الخطوات الممكنة للحد من التعرض للإشعاع المؤين. ملاحظة: في مصلحة الكيمياء الإشعاعية المناسبة لحفظ المذكرة، يجب أن تقاس كمية النشاط الإشعاعي في العينة باستخدام تدريج جرعة وسجلت قبل وبعد خطوات 2،2 حتي 2،13 في البروتوكول أدناه. وهذا سوف يساعد مع تحديد دقيق لعائدات الإشعاعية وأنشطة محددة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل من 0،5-2،0 ملغ من J591-DFO في 200 ميكرولتر من 0.5 M HEPES العازلة، ودرجة الحموضة 7.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة لحجم &lt;سوب&gt; 89 عنصر الزركون حل 4+ الأسهم (مرفق عادة في 1.0 M حمض الأكساليك) الموافق 1،0-6،0 ميلي كوري (37-222 من mbq) في 2 مل البلاستيك المسمار غطاء أنبوب microcentrifuge. ضبط حجم هذا الحل إلى ما مجموعه 300 ميكرولتر باستخدام حمض الأكساليك 1.0 M. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط درجة الحموضة من الحل 89 عنصر الزركون 4+ إلى 6،8-7،5 باستخدام 1.0 M نا 2 CO 3. تبدأ بإضافة 250 ميكرولتر من 1.0 M نا 2 CO 3 إلى 4+ حل 89 عنصر الزركون وبعد ذلك إضافة أصغر (&lt;10 ميكرولتر) مأخوذة من قاعدة لتحقيق درجة الحموضة المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة المبلغ المطلوب من المعدل درجة الحموضة 89 عنصر الزركون 4+ حل للحل J591-DFO أعدت في الخطوة 2.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من الرقم الهيدروجيني للخليط التفاعل radiolabeling لضمان أنه يقع ضمن نطاق المطلوب من 6،8-7،5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان رد فعل radiolabeling لمدة 60 دقيقة في RT على تهييج كتلة التدفئة في 350 دورة في الدقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 60 دقيقة من الحضانة، وقياس رادiolabeling العائد من رد فعل باستخدام الراديوية TLC. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقيقا لهذه الغاية، بقعة 1 μCi من خليط التفاعل radiolabeling على المشربة السيليكا TLC القطاع. السماح للقسامة لتجف، تشغيل TLC باستخدام شاطف من 50 ملي DTPA (درجة الحموضة 5.5) وتحليل قطاع TLC باستخدام ماسح ضوئي الراديوية TLC 89 عنصر الزركون 4+ منضمة إلى بناء J591-DFO سوف تظهر في أصل (R و &lt;0.1)، في حين سيتم بالكلاب الكاتيونات المجانية 89 عنصر الزركون 4+ بواسطة DTPA وسوف أزل مع الجبهة المذيبات (R و&gt; 0.9). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب العائد radiolabeling للتفاعل من خلال دمج radiochromatogram، وتقسيم المنطقة تحت المنحنى من R و 0،0-0،1 من المساحة الكلية تحت المنحنى، وضرب من قبل 100. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان العائد radiolabeling غير كافية (عادة نشاط معين النظري لل&gt; 2 ميلي كوري / ملغ)، إرواء رد الفعل مع 5 ميكرولتر من 50 ملي DTPA، ودرجة الحموضة 5.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنقية الناتجة immunoconjugate باليودنانوغرام حجم المتاح استبعاد تحلية العمود معبأة مسبقا مع 50،000 الوزن الجزيئي قطع باستخدام شاطف إما 0.9٪ ملحي معقم مع 5 ملغ / مل حمض gentisic أو 0.25 M خلات الصوديوم (الرقم الهيدروجيني 5.5) مع 5 ملغ / مل حمض gentisic . وهذه الخطوة تسفر عن 2 مل من محلول من الانتهاء radioimmunoconjugate 89 عنصر الزركون-DFO-J591. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تنقيتها، تحقق من نقاء الكيمياء الإشعاعية من 89 عنصر الزركون-DFO-J591 باستخدام الراديوية TLC كما هو موضح في الخطوة 2.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب العائد radiolabeling العام للرد فعل بقسمة كمية النشاط وأضاف في البداية إلى حل الضد من كمية النشاط الإشعاعي معزولة مع المنقى 89 عنصر الزركون-DFO-J591 radioimmunoconjugate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب نشاط محدد النهائي بقسمة كمية النشاط معزولة مع المنقى 89 عنصر الزركون-DFO-J591 radioimmunoconjugate من قبل الكتلة الأولية من DFO-J591 في رد فعل radiolabeling. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان المطلوب تركيز أعلى، والتركيز عشره 89 حل عنصر الزركون-DFO-J591 باستخدام وحدة تصفية الطرد المركزي مع 50،000 الوزن الجزيئي قطع. ملاحظة: حمض gentisic المستخدمة في خطوة تنقية النهائية على بعد حاصن الراديو المستخدمة للحد من تدهور الأجسام المضادة بسبب الإنحلال الإشعاعي 46 في حين أن تخزين 89 عنصر الزركون-DFO-J591 radioimmunoconjugate لمدة تصل إلى 48 ساعة عند 4 درجات مئوية. هو ممكن، فمن غير المستحسن. إذا كان radioimmunoconjugate هي خزنها، استخدم 0.25 M خلات الصوديوم (الرقم الهيدروجيني 5.5) مع 5 ملغ / مل حمض gentisic باعتبارها منطقة عازلة تخزين من أجل تقليل خطر بوساطة هيبوكلوريت الإنحلال الإشعاعي. 47 </li></ol> 3. في فيفو PET التصوير مع 89 عنصر الزركون-DFO-J591 تنبيه: كما في القسم بروتوكول 2، وهذه خطوة من بروتوكول ينطوي على التعامل والتلاعب من النشاط الإشعاعي. قبل تنفيذ هذه الخطوات الباحثون أن يتشاور مع إدارة الصحة والسلامة من الإشعاع مؤسسة وطنهم و. جميع possibينبغي أن تؤخذ لو خطوات للحد من التعرض للإشعاع المؤين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الفئران عارية athymic الذكور، الزرع تحت الجلد 5 × 10 6 LNCaP خلايا سرطان البروستاتا والسماح لهؤلاء أن ينمو إلى 100-150 مم 3 طعم أجنبي (بعد 3-4 أسابيع التلقيح). 44 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع radioimmunoconjugate 89 عنصر الزركون-DFO-J591 إلى تركيز 1.0 ميلي كوري / مل في 0.9٪ ملحي معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 200 ميكرولتر من محلول 89 عنصر الزركون-DFO-J591 (200 μCi، 7.4 من mbq). في الوريد الذيل الأفقي من الفئران الحاملة للطعم أجنبي 48 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نقطة زمنية التصوير المطلوب (على سبيل المثال، 12، 24، 48، 72، 96، أو 120 ساعة بعد الحقن)، تخدير الماوس مع الأيزوفلورين 2٪: خليط غاز الأكسجين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على السرير من صغير الماسح الضوئي PET الحيوان، والحفاظ على التخدير أثناء الفحص باستخدام الأيزوفلورين 1٪: خليط غاز الأكسجين. قبل وضع الحيوان على السرير الماسح الضوئي، تحقق من التخدير باستخدام طريقة إصبع القدم قرصة وتطبيق ورقةذ مرهم للعين للعيون من الماوس لمنع جفاف أثناء التخدير. 49 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على البيانات PET الماوس عن طريق المسح الضوئي ثابت مع حد أدنى من 40 مليون الأحداث المتزامنة باستخدام نافذة الطاقة من 350-700 كيلو ونافذة توقيت صدفة من 6 NSEC 50 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الانتهاء من الاستحواذ على الصورة، لا تترك الماوس غير المراقب وليس لوضعه في قفص مع فئران أخرى حتى استعاد وعيه عليه. </li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

في حين أن البناء وradioimmunoconjugates radiolabeling، والتصوير من 89 عنصر الزركون-DFO صفت-عموما إجراءات واضحة إلى حد ما، من المهم للحفاظ على بعض الاعتبارات الرئيسية في الاعتبار خلال كل خطوة من هذه العملية. على سبيل المثال، ربما السبب الأكثر احتمالا للقلق خلال الخطوة الاقتران من ...

نظرا لحساسيتها ملحوظة، تقارب، والانتقائية، ومنذ فترة طويلة تعتبر الأجسام المضادة ناقلات واعدة لتسليم النظائر المشعة للخلايا السرطانية. ومع ذلك، فقد أعاقت تطبيقها في التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET) التصوير عن طريق عدم وجود النظائر المشعة الباعثة للبوزيترون مناسبة لوضع العلامات الخاصة بهم. 1-3 واحد من الاعتبارات الأكثر أهمية في تصميم radioimmunoconjugates هو مطابقة الاضمحلال الجسدي متعجلة حياة النظائر المشعة لفي الجسم الحي الدوائية من الأجسام المضادة. وبشكل أكثر تحديدا، والأجسام المضادة وغالبا ما يكون طويلا نسبيا والبيولوجية نصف حياة عدة أيام، وبالتالي يجب أن يكون المسمى مع النظائر المشعة مع مقارنة الجسدية نصف العمر. لتطبيقات التصوير PET، كانت الأجسام المضادة تقليديا رديولبلد مع 64 النحاس (ر 1/2 = 12.7 ساعة)، 86 Y (ر 1/2 = 14.7 ساعة)، أو 124 I (ر = 4.18 1/2 د). 4، 5 ومع ذلك، كل منهذه النظائر المشعة تمتلك القيود الهامة التي تعيق مدى ملاءمتها للتصوير السريري. في حين radioimmunoconjugates المسمى مع 86 Y و 64 النحاس أثبتت واعدة في التحقيقات قبل السريرية، سواء النظائر تمتلك المادية نصف العمر التي هي قصيرة جدا لتكون فعالة للتصوير في البشر. 124 I، في المقابل، لديها ما يقرب من المثالية المادية نصف الحياة ل التصوير مع الأجسام المضادة، لكنها مكلفة ولها خصائص تسوس الأمثل التي تؤدي إلى دقة منخفضة نسبيا الصور السريرية. وعلاوة على ذلك، يمكن أن 124 radioimmunoconjugates المسمى I تخضع لdehalogenation في الجسم الحي، وهي عملية يمكن ان تخفض نسب النشاط الورم إلى الخلفية. 6،7 محرك الأقراص لإيجاد النظائر المشعة الباعثة للبوزيترون لتحل محل 64 النحاس، 86 Y، و 124 I في radioimmunoconjugates غذى الارتفاع الأخير في البحث على 89 الأجسام المضادة المسمى عنصر الزركون. 8-12 Tكان السبب وراء ظهور 89 عنصر الزركون واضح ومباشر: لradiometal تمتلك الخصائص الفيزيائية الكيميائية شبه مثالية للاستخدام في radioimmunoconjugates PET التشخيص يتم إنتاج 13 89 عنصر الزركون عبر Y 89 (ع، ن) 89 عنصر الزركون رد فعل على سيكلوترون باستخدام. متوفرة تجاريا و 100٪ وفرة بشكل طبيعي 89 هدفا Y. 14،15 وradiometal لديه العائد بوزيترون من 23٪، يضمحل مع عمر نصف من 78.4 ساعة، وتنبعث من البوزيترونات مع الطاقة منخفضة نسبيا من 395.5 كيلو (الشكل 1). 13،16،17 من المهم أن نلاحظ أن 89 عنصر الزركون أيضا تنبعث الطاقة العالية، 909 كيلو γ-ray مع كفاءة 99٪. في حين أن هذا الانبعاث لا تتدخل بقوة مع تنبعث الفوتونات 511 كيلو، فإنه لا تتطلب النظر اضافية فيما يتعلق النقل والمناولة، وقياس الجرعات. على الرغم من هذا التحذير، وهذه الخصائص تسوس يعني في نهاية المطاف أن 89 عنصر الزركون لديه ح أكثر ملاءمة ليس فقطألف الحياة للتصوير مع الأجسام المضادة من 86 Y و 64 النحاس ولكن يمكن أيضا إنتاج صور عالية الدقة من 124 I، التي تنبعث البوزيترونات مع طاقات أعلى من 687 و 975 كيلو فضلا عن عدد من الفوتونات مع الطاقات داخل 100-150 كيلو من والتي تم إنشاؤها بوزيترون الفوتونات 511 كيلو. 13 وعلاوة على ذلك، و 89 عنصر الزركون هو أيضا أكثر أمانا للتعامل، وأقل تكلفة لإنتاج، وresidualizes في الأورام بشكل أكثر فعالية من نظيره اليود المشع لها. 18،19 احد الحد المحتمل من 89 عنصر الزركون هو أنه لايوجد وisotopologue العلاجية، على سبيل المثال، 86 Y (PET) مقابل 90 Y (العلاج). هذا يحول دون بناء متطابقة كيميائيا، وكلاء التصوير بديلة التي يمكن استخدامها كما الكشافة قياس الجرعة لنظرائهم العلاجية. وقال ان التحقيقات تشير إلى أن 89 الأجسام المضادة المسمى عنصر الزركون لديها إمكانات كبديل التصوير لمدة 90 Y- و 177 immunoconjugates لو المسمى.20،21 من وجهة نظر كيميائية، كمعدن المجموعة الرابعة، و 89 عنصر الزركون موجود باعتباره الموجبة +4 في محلول مائي. اكتمال شحن عنصر الزركون 4+ أيون للغاية، كبير نسبيا (نصف قطرها الأيونية فعالة = 0.84 Å)، ويمكن أن تصنف على أنها الموجبة &quot;من الصعب&quot;. على هذا النحو، فإنه يسلك تفضيل بروابط تحمل ما يصل إلى ثمانية الصعبة، والجهات المانحة الأكسجين الأيونية. بسهولة خالب الأكثر شيوعا في 89 radioimmunoconjugates عنصر الزركون المسمى هو ديفيروكسامين (DFO)، وهي مشتقة من حاملة الحديد، خالب احلقي تحمل ثلاث مجموعات hydroxamate. يجند ينسق مستقر الموجبة عنصر الزركون 4+ بسرعة وبطريقة نظيفة في RT في مستويات الحموضة ذات الصلة من الناحية البيولوجية، ويبقى مجمع عنصر الزركون-DFO الناتجة مستقر على مدى عدة أيام في المياه المالحة، مصل الدم، والدم كله. 22 دراسة الحسابية تشير بقوة أن DFO يشكل مجمع hexacoordinate مع عنصر الزركون 4+ التي يتم تنسيقها مركز المعادن إلى ثلاثة كتبها neutراؤول وثلاثة المانحين الأكسجين الأيونية ليجند فضلا عن اثنين من المياه بروابط خارجية (الشكل 2). 23،24 السلوك في الجسم الحي من radioimmunoconjugates توظيف اقتران سقالة 89 عنصر الزركون-DFO كان عموما ممتازة. ومع ذلك، في بعض الحالات، والتصوير والدراسات biodistribution الحادة وقد كشفت مستويات النشاط مرتفعة في عظام الفئران حقن مع 89 الأجسام المضادة المسمى عنصر الزركون، البيانات التي تشير إلى أن 89 osteophilic يتم تحرير عنصر الزركون 4+ الموجبة من خالب في الجسم الحي، وبعد ذلك mineralizes في العظام. 25 مؤخرا، عددا من التحقيقات في تطوير رواية 89 عنصر الزركون 4+ chelators بروابط خاصة فيما ظهرت ثمان جهات مانحة الأوكسجين في الأدب. 24،26،27 ومع ذلك، في الوقت الحاضر، DFO هو خالب معظم العاملين على نطاق واسع في 89 radioimmunoconjugates عنصر الزركون المسمى بهامش واسع. مجموعة متنوعة من مختلفوقد استخدمت استراتيجيات bioconjugation إرفاق DFO إلى أجسام، بما في ذلك bioorthogonal بنقرة والكيمياء، ورد فعل ثيول التفاعلي DFO يبني مع cysteines في الأجسام المضادة، ورد فعل تنشيط DFO الحاملة للاستر يبني مع lysines في الضد 4،28-. 30 بسهولة الاستراتيجية الأكثر شيوعا، ومع ذلك، فقد تم استخدام مشتق ثيوسيانات الحاملة للDFO، DFO-NCS (الشكل 2). 22 هذه خالب bifunctional متاحة تجاريا بقوة وبشكل موثوق يشكل مستقرة، والروابط التساهمية ثيوريا مع lysines لل الأضداد (الشكل 3). على مدى السنوات القليلة الماضية، تم الإبلاغ عن مجموعة واسعة من 89 radioimmunoconjugates عنصر الزركون-DFO المسمى في الأدب. وكانت التحقيقات قبل السريرية وفيرة خاصة، ويضم الأجسام المضادة التي تتدرج من المعروف ستوكسيماب، بيفاسيزوماب، وتراستوزوماب إلى الأجسام المضادة أكثر مقصور على فئة معينة مثل استهداف CD105 TRC105 وfPSA استهداف 5A10. 30-36 وفي الآونة الأخيرة، ظهر عدد قليل من التجارب السريرية المرحلة المبكرة باستخدام الأجسام المضادة 89 عنصر الزركون-DFO المسمى في الأدب. محاكمات تحديدا، قد نشرت مجموعات في هولندا توظيف 89 عنصر الزركون-DFO-cmAb U36 و 89 عنصر الزركون-DFO-إبريتوموماب تيوكسيتان، و 89 عنصر الزركون-DFO-تراستوزوماب. 21،32،37 بالإضافة إلى ذلك، مجموعة من التجارب السريرية الأخرى مع 89 radioimmunoconjugates ZR المسمى تجري حاليا، بما في ذلك التحقيقات هنا في مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان باستخدام PSMA استهداف 89 عنصر الزركون-DFO-J591 للتصوير سرطان البروستاتا واستهداف HER2 89 عنصر الزركون-DFO-تراستوزوماب للتصوير سرطان الثدي 23، 30 وبالإضافة إلى ذلك، في حين لا تزال الأجسام المضادة رديولبلد الأكثر شيوعا 89 المواد المشعة المسمى عنصر الزركون، كما استخدمت على نحو متزايد في radiometal مع ناقلات أخرى، بما في ذلك الببتيدات والبروتينات والمواد النانوية. 38-43 </sup&gt; على نمطية هذه المنهجية وضع العلامات عنصر الزركون-DFO 89 هو رصيدا هائلا. ذخيرة من الأجسام المضادة التي تستهدف العلامات البيولوجية هو الآخذة في التوسع، والمصلحة في أداء في مجال التصوير PET الجسم الحي باستخدام هذه التركيبات ينمو على قدم وساق. ونتيجة لذلك، فإننا نعتقد أن تطوير المزيد من الممارسات وبروتوكولات موحدة يمكن أن تستفيد هذا المجال. وقد تم بالفعل نشرت بروتوكول تجريبي ممتاز مكتوبة لDFO-NCS تصريف الافعال و 89 عنصر الزركون radiolabeling التي كتبها Vosjan، وآخرون. 22 ونحن نرى أن المظاهرة البصرية التي يقدمها هذا العمل يمكن أن يزيد من يساعد المحققين جديد لهذه التقنيات. في البروتوكول في متناول اليد، وسوف تستخدم استهداف مستضد غشاء الأجسام المضادة J591 البروستات محددة كنظام نموذج لتوضيح (1) bioconjugation من خالب bifunctional DFO-ثيوسيانات إلى الضد، (2) radiosynthesis وتنقية من 89 ZR-DFO-ماب radioimmunoconjugate،و (3) في الجسم الحي التصوير PET مع 89 عنصر الزركون-DFO-ماب radioimmunoconjugate في نموذج الفئران من مرض السرطان. 23،44،45

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;p&lt;/em&gt;-SCN-Bn-DFO</td><td>Macrocyclics</td><td>B-705</td><td>Store at -80 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>[&lt;sup&gt;89&lt;/sup&gt;Zr]Zr-oxalate</td><td>Various, including Perkin-Elmer</td><td></td><td>Caution: Radioactive material</td></tr><tr><td>PD-10 Desalting Columns</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0851-01&amp;nbsp;</td><td>Store at room temperature</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Units</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC805024</td><td>Store at room temperature</td></tr><tr><td>Silica Gel Impregnated RadioTLC Paper</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td>Cut into strips 0.5 cm wide</td></tr></tbody></table>

the bioconjugation and radiosynthesis of 89zr-dfo-labeled antibodies

وتقارب استثنائية، والنوعية، والانتقائية من الأجسام المضادة تجعلها جذابة للغاية للناقلات المواد المشعة PET التي تستهدف الورم. نظرا لقدرتها على التنوع نصف الحياة لعدة أيام، ويجب أن يكون المسمى الأجسام المضادة مع النويدات المشعة الباعثة للبوزيترون مع الاضمحلال الجسدي نصف حياة طويلة نسبيا. تقليديا، والنظائر الباعثة للبوزيترون 124 وقد استخدمت I (ر = 4.18 1/2 د)، 86 Y (ر 1/2 = 14.7 ساعة)، و 64 النحاس (ر 1/2 = 12.7 ساعة) لتسمية الأجسام المضادة ل PET التصوير. وفي الآونة الأخيرة، ومع ذلك، فقد شهد مجال زيادة كبيرة في استخدام الباعثة للبوزيترون radiometal 89 عنصر الزركون في PET كلاء التصوير القائم على الأجسام المضادة. 89 عنصر الزركون هو النظائر المشعة المثالي تقريبا للتصوير PET مع immunoconjugates، كما أنها تمتلك نصف المادي -life (ر 1/2 = 78.4 ساعة) والتي تتوافق مع الدوائية في الجسم الحي من الأجسام المضادة وتنبعث منخفض نسبيا الشمبوزيترون RGY التي تنتج صور عالية الدقة. وعلاوة على ذلك، والأجسام المضادة يمكن أن توصف بشكل مباشر مع 89 عنصر الزركون باستخدام خالب ديفيروكسامين المستمدة حاملة الحديد (DFO). في هذا البروتوكول، وسيتم استخدام استهداف مستضد غشاء الأجسام المضادة J591 البروستات محددة كنظام نموذج لتوضيح (1) bioconjugation من خالب bifunctional DFO-ثيوسيانات إلى الضد، (2) radiosynthesis وتنقية من 89 Zr- DFO-ماب radioimmunoconjugate، و (3) في الجسم الحي التصوير PET مع 89 عنصر الزركون-DFO-ماب radioimmunoconjugate في نموذج الفئران من مرض السرطان.

الخطوة الأولى في هذا البروتوكول الاقتران من DFO-NCS إلى الأجسام المضادة هي عادة قوية جدا وموثوق بها. عموما، يمكن الحصول على النقى المعدلة خالب immunoconjugate في&gt; 90٪ العائد، وسوف باستخدام 3 حكمه ضرس DFO-NCS في رد فعل اقتران الأولي تسفر عن درجة-من وضع العلامات من خالب من حوالي 1.0-1.5 D...

Watch this Scientific Journal Video about The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies at JoVE.com

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

Due to its multi-day radioactive half-life and favorable decay properties, the positron-emitting radiometal 89Zr is extremely well-suited for use in antibody-based radiopharmaceuticals for PET imaging. In this protocol, the bioconjugation, radiosynthesis, and preclinical application of 89Zr-labeled antibodies will be described.

وBioconjugation وRadiosynthesis من<sup&gt; 89</sup&gt; الأجسام المضادة عنصر الزركون-DFO المسمى

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

the-bioconjugation-and-radiosynthesis-of-89zr-dfo-labeled-antibodies

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Chemistry

Unit 1

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

Fundamentals of Chemistry

SCIENTISTS IN ACTION

17.1K Views.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Due to its multi-day radioactive half-life and favorable decay properties, the positron-emitting radiometal 89Zr is extremely well-suited for use in antibody-based radiopharmaceuticals for PET imaging. In this protocol, the bioconjugation, radiosynthesis, and preclinical application of 89Zr-labeled antibodies will be described. 

Video: The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient radiolabeling of DBCO-group-functionalized gold nanoparticles using a copper-free click reaction. Radioiodination of the stannylated precursor (2) was carried out by using [125I]NaI and chloramine T as an oxidant at room temperature for 15 min. After HPLC purification of the crude product, the purified 125I-labeled azide (1) was obtained with high radiochemical yield (75 &plusmn; 10%, n = 8) and excellent radiochemical purity (&gt;99%). For the synthesis of radiolabeled 13-nm-sized gold nanoparticles, the DBCO-functionalized gold nanoparticles (3) were prepared by using a thiolated polyethylene glycol polymer. A copper-free click reaction between 1 and 3 gave the 125I-labeled gold nanoparticles (4) with more than 95% of radiochemical yield as determined by radio-thin-layer chromatography (radio-TLC). These results clearly indicate that the present radiolabeling method using a strain-promoted copper-free click reaction will be useful for the efficient and convenient radiolabeling of DBCO-group-containing nanomaterials.

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

A detailed procedure for the synthesis of a 125I-labeled azide and the radiolabeling of dibenzocyclooctyne (DBCO)-group-conjugated, 13-nm-sized gold nanoparticles using a copper-free click reaction is described.

بروتوكول الأمثل لRadiolabeling كفاءة من جزيئات الذهب عن طريق استخدام<sup&gt; 125</sup&gt; أزيد المجموعة الترقيعي المسمى أنا

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

إعداد وتقييم<sup&gt; 99m</sup&gt; ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق Bioorthogonal الكيمياء

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

Harnessing the Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloaddition for Pretargeted PET Imaging

Due to their exquisite affinity and specificity, antibodies have become extremely promising vectors for the delivery of radioisotopes to cancer cells for PET imaging. However, the necessity of labeling antibodies with radionuclides with long physical half-lives often results in high background radiation dose rates to non-target tissues. In order to circumvent this issue, we have employed a pretargeted PET imaging strategy based on the inverse electron demand Diels-Alder cycloaddition reaction. The methodology decouples the antibody from the radioactivity and thus exploits the positive characteristics of antibodies, while eschewing their pharmacokinetic drawbacks. The system is composed of four steps: (1) the injection of a mAb-trans-cyclooctene (TCO) conjugate; (2) a localization time period during which the antibody accumulates in the tumor and clears from the blood; (3) the injection of the radiolabeled tetrazine; and (4) the in vivo click ligation of the components followed by the clearance of excess radioligand. In the example presented in the work at hand, a 64Cu-NOTA-labeled tetrazine radioligand and a trans-cyclooctene-conjugated humanized antibody (huA33) were successfully used to delineate SW1222 colorectal cancer tumors with high tumor-to-background contrast. Further, the pretargeting methodology produces high quality images at only a fraction of the radiation dose to non-target tissue created by radioimmunoconjugates directly labeled with 64Cu or 89Zr. Ultimately, the modularity of this protocol is one of its greatest assets, as the trans-cyclooctene moiety can be appended to any non-internalizing antibody, and the tetrazine can be attached to a wide variety of radioisotopes.

The bioorthogonal inverse electron demand Diels-Alder cycloaddition has been harnessed to create an effective and modular pretargeted PET imaging strategy for cancer. In this protocol, the steps of this methodology are described in the context of a model system employing the colorectal cancer targeted antibody huA33 and a 64Cu-labeled radioligand.

تسخير الطلب Bioorthogonal معكوس الكترون ديلز-ألدر الإضافة الحلقية لPretargeted PET التصوير

Due to their exquisite affinity and specificity, antibodies have become extremely promising vectors for the delivery of radioisotopes to cancer cells for ...

Bioengineering

Pretargeted Radioimmunotherapy Based on the Inverse Electron Demand Diels-Alder Reaction

While radioimmunotherapy (RIT) is a promising approach for the treatment of cancer, the long pharmacokinetic half-life of radiolabeled antibodies can result in high radiation doses to healthy tissues. Perhaps not surprisingly, several different strategies have been developed to circumvent this troubling limitation. One of the most promising of these approaches is pretargeted radioimmunotherapy (PRIT). PRIT is predicated on decoupling the radionuclide from the immunoglobulin, injecting them separately, and then allowing them to combine in vivo at the target tissue. This approach harnesses the exceptional tumor-targeting properties of antibodies while skirting their pharmacokinetic drawbacks, thereby lowering radiation doses to non-target tissues and facilitating the use of radionuclides with half-lives that are considered too short for use in traditional radioimmunoconjugates. Over the last five years, our laboratory and others have developed an approach to in vivo pretargeting based on the inverse electron-demand Diels-Alder (IEDDA) reaction between trans-cyclooctene (TCO) and tetrazine (Tz). This strategy has been successfully applied to pretargeted positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) imaging with a variety of antibody-antigen systems. In a pair of recent publications, we have demonstrated the efficacy of IEDDA-based PRIT in murine models of pancreatic ductal adenocarcinoma and colorectal carcinoma. In this protocol, we describe protocols for PRIT using a 177Lu-DOTA-labeled tetrazine radioligand ([177Lu]Lu-DOTA-PEG7-Tz) and a TCO-modified variant of the colorectal cancer targeting huA33 antibody (huA33-TCO). More specifically, we will describe the construction of huA33-TCO, the synthesis and radiolabeling of [177Lu]Lu-DOTA-PEG7-Tz, and the performance of in vivo biodistribution and longitudinal therapy studies in murine models of colorectal carcinoma.

This protocol describes the synthesis and characterization of a trans-cyclooctene (TCO)-modified antibody and a 177Lu-labeled tetrazine (Tz) radioligand for pretargeted radioimmunotherapy (PRIT). In addition, it details the use of these two constructs for in vivo biodistribution and longitudinal therapy studies in a murine model of colorectal cancer.

راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد بناء على تفاعل ديلز-الدر الطلب إلكترون معكوس

While radioimmunotherapy (RIT) is a promising approach for the treatment of cancer, the long pharmacokinetic half-life of radiolabeled antibodies can ...

Synthesis and Bioconjugation of Thiol-Reactive Reagents for the Creation of Site-Selectively Modified Immunoconjugates

Maleimide-bearing bifunctional probes have been employed for decades for the site-selective modification of thiols in biomolecules, especially antibodies. Yet maleimide-based conjugates display limited stability in vivo because the succinimidyl thioether linkage can undergo a retro-Michael reaction. This, of course, can lead to the release of the radioactive payload or its exchange with thiol-bearing biomolecules in circulation. Both of these processes can produce elevated activity concentrations in healthy organs as well as decreased activity concentrations in target tissues, resulting in reduced imaging contrast and lower therapeutic ratios. In 2018, we reported the creation of a modular, stable, and easily accessible phenyloxadiazolyl methyl sulfone reagent &#8212; dubbed &#8216;PODS&#8217; &#8212; as a platform for thiol-based bioconjugations. We have clearly demonstrated that PODS-based site-selective bioconjugations reproducibly and robustly create homogenous, well-defined, highly immunoreactive, and highly stable radioimmunoconjugates. Furthermore, preclinical experiments in murine models of colorectal cancer have shown that these site-selectively labeled radioimmunoconjugates exhibit far superior in vivo performance compared to radiolabeled antibodies synthesized via maleimide-based conjugations. In this protocol, we will describe the four-step synthesis of PODS, the creation of a bifunctional PODS-bearing variant of the ubiquitous chelator DOTA (PODS-DOTA), and the conjugation of PODS-DOTA to the HER2-targeting antibody trastuzumab.

In this protocol, we will describe the synthesis of PODS, a phenyoxadiazolyl methyl sulfone-based reagent for the site-selective attachment of cargos to the thiols of biomolecules, particularly antibodies. In addition, we will describe the synthesis and characterization of a PODS-bearing bifunctional chelator and its conjugation to a model antibody.

تعديل التوليف وبيوكونجوجيشن من الكواشف ثيول المتفاعلة لإنشاء الموقع بشكل انتقائي إيمونوكونجوجاتيس

Maleimide-bearing bifunctional probes have been employed for decades for the site-selective modification of thiols in biomolecules, especially antibodies. ...

Positron Emission Tomography Imaging of Cell Trafficking: A Method of Cell Radiolabeling

Stem cell and chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapies are emerging as promising therapeutics for organ regeneration and as immunotherapy for various cancers. Despite significant progress having been made in these areas, there is still more to be learned to better understand the pharmacokinetics and pharmacodynamics of the administered therapeutic cells in the living system. For noninvasive, in vivo tracking of cells with positron emission tomography (PET), a novel [89Zr]Zr-p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine ([89Zr]Zr-DBN)-mediated cell radiolabeling method has been developed utilizing 89Zr (t1/2 78.4 h). The present protocol describes a [89Zr]Zr-DBN-mediated, ready-to-use, radiolabeling synthon for direct radiolabeling of variety of cells, including mesenchymal stem cells, lineage-guided cardiopoietic stem cells, liver regenerating hepatocytes, white blood cells, melanoma cells, and dendritic cells. The developed methodology enables noninvasive PET imaging of cell trafficking for up to 7 days post-administration without affecting the nature or the function of the radiolabeled cells. Additionally, this protocol describes a stepwise method for the radiosynthesis of [89Zr]Zr-DBN, biocompatible formulation of [89Zr]Zr-DBN, preparation of cells for radiolabeling, and finally the radiolabeling of cells with [89Zr]Zr-DBN, including all the intricate details needed for the successful radiolabeling of cells.

Presented here is a protocol to radiolabel cells with a positron emission tomography (PET) radioisotope, 89Zr (t1/2 78.4 h), using a ready-to-use radiolabeling synthon, [89Zr]Zr-p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine ([89Zr]Zr-DBN). Radiolabeling cells with [89Zr]Zr-DBN allows noninvasive tracking and imaging of administered radiolabeled cells in the body with PET for up to 7 days post-administration.

التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لتهريب الخلايا: طريقة لوضع العلامات الإشعاعية للخلايا

Stem cell and chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapies are emerging as promising therapeutics for organ regeneration and as immunotherapy for ...

Cancer Research

Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used in cancer treatment and imaging due to increased cellular accumulation over current ACs. During early AC in vitro development, fluorescence techniques and radioimmunoassays are sufficient for determining intracellular localization, accumulation efficiency, and target cell specificity. Currently, there is no consensus on standardized methods for preparing cells for evaluating AC intracellular accumulation and localization. The initial testing of ACs modified with virus-derived peptides is critical especially if several candidates have been constructed. Determining intracellular accumulation by fluorescence can be affected by background signal from ACs at the cell surface and complicate the interpretation of accumulation. For radioimmunoassays, typically treated cells are fractionated and the radioactivity in different cell compartments measured. However, cell lysis varies from cell to cell and often nuclear and cytoplasmic compartments are not adequately isolated. This can produce misleading data on payload delivery properties. The intravenous injection of radiolabeled virus-derived peptide-modified ACs in tumor bearing mice followed by radionuclide imaging is a powerful method for determining tumor targeting and payload delivery properties at the in vivo phase of development. However, this is a relatively recent advancement and few groups have evaluated virus-derived peptide-modified ACs in this manner. We describe the processing of treated cells to more accurately evaluate virus-derived peptide-modified AC accumulation when using confocal microscopy and radioimmunoassays. Specifically, a method for trypsinizing cells to remove cell surface bound ACs. We also provide a method for improving cellular fractionation. Lastly, this protocol provides an in vivo method using positron emission tomography (PET) for evaluating initial tumor targeting properties in tumor-bearing mice. We use the radioisotope 64Cu (t1/2 = 12.7 h) as an example payload in this protocol.

Viral-derived peptides coupled to antibody-conjugates (ACs) is an approach gaining momentum due to the potential of delivering molecular payloads with increased tumor cell accumulation. Utilizing common methods to evaluate peptide conjugation, AC and payload intracellular accumulation, and tumor targeting, this protocol helps researchers during the key initial development phases.

تعديل التقييم الأولى لجسم-يصرف مع الببتيدات المشتقة من الفيروسية لزيادة تراكم الخلوية وتحسين استهداف الورم

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte cell culture and 64Cu-antibody receptor targeting of the cells. In vitro evaluation of the radiolabel and non-invasive in vivo cell tracking in an animal model of an airway delayed-type hypersensitivity reaction (DTHR) by PET/CT are described.
In detail, the conjugation of a mAb with the chelator 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid (DOTA) is shown. Following the production of radioactive 64Cu, radiolabeling of the DOTA-conjugated mAb is described. Next, the expansion of chicken ovalbumin (cOVA)-specific CD4+ interferon (IFN)-&#947;-producing T helper cells (cOVA-TH1) and the subsequent radiolabeling of the cOVA-TH1 cells are depicted. Various in vitro techniques are presented to evaluate the effects of 64Cu-radiolabeling on the cells, such as the determination of cell viability by trypan blue exclusion, the staining for apoptosis with Annexin V for flow cytometry, and the assessment of functionality by IFN-&#947; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Furthermore, the determination of the radioactive uptake into the cells and the labeling stability are described in detail. This protocol further describes how to perform cell tracking studies in an animal model for an airway DTHR and, therefore, the induction of cOVA-induced acute airway DHTR in BALB/c mice is included. Finally, a robust PET/CT workflow including image acquisition, reconstruction, and analysis is presented.
The 64Cu-antibody receptor targeting approach with subsequent receptor internalization provides high specificity and stability, reduced cellular toxicity, and low efflux rates compared to common PET-tracers for cell labeling, e.g.64Cu-pyruvaldehyde bis(N4-methylthiosemicarbazone) (64Cu-PTSM). Finally, our approach enables non-invasive in vivo cell tracking by PET/CT with an optimal signal-to-background ratio for 48 h. This experimental approach can be transferred to different animal models and cell types with membrane-bound receptors that are internalized.

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Following the preparation of a 64Cu-modified monoclonal antibody binding to a transgenic murine T cell receptor, T cells are radiolabeled in vivo, analyzed for viability, functionality, labeling stability and apoptosis, and adoptively transferred into mice with an airway delayed-type hypersensitivity reaction for non-invasive imaging by positron emission tomography/computed tomography (PET/CT).

الفئران اللمفاويات وسمها من قبل<sup&gt; 64</sup&gt; النحاس والأجسام المضادة مستقبلات استهداف ل<em&gt; في فيفو</em&gt; الاتجار خلية بواسطة PET / ط م

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Immunology and Infection

Determining Binding Affinity (KD) of Radiolabeled Antibodies to Immobilized Antigens

Determining binding affinity (KD) is an important aspect of the characterization of radiolabeled antibodies (rAb). Typically, binding affinity is represented by the equilibrium dissociation constant, KD, and can be calculated as the concentration of antibody at which half the antibody binding sites are occupied at equilibrium. This method can be generalized to any radiolabeled antibody or other protein and peptide scaffolds. In contrast to cell-based methods, the choice of immobilized antigens is particularly useful for validating binding affinities after long-term storage of antibodies, distinguishing binding affinities of fragment antigen-binding region (Fab) arms in bispecific antibody constructs, and determining if there is variability in antigen expression between different cell lines. This method involves immobilizing a fixed amount of antigen to specified wells on a breakable 96-well plate. Then, nonspecific binding was blocked in all wells with bovine serum albumin (BSA). Subsequently, the rAb was added in a concentration gradient to all wells. A range of concentrations was chosen to allow the rAb to reach saturation, i.e., a concentration of antibody at which all antigens are continuously bound by the rAb. In designated wells without immobilized antigen, nonspecific binding of the rAb can be determined. By subtracting nonspecific binding from total binding in the wells with immobilized antigen, specific binding of the rAb to the antigen can be determined. The KD of the rAb was calculated from the resulting saturation binding curve. As an example, binding affinity was determined using radiolabeled amivantamab, a bispecific antibody for epidermal growth factor receptor (EGFR) and cytoplasmic mesenchymal-epithelial transition (cMET) proteins.

Determining Binding Affinity KD of Radiolabeled Antibodies to Immobilized Antigens

Here, a method is described to determine the binding affinity (KD) of radiolabeled antibodies to immobilized antigens. KD is the equilibrium dissociation constant that can be determined from a saturation binding experiment by measuring the total, specific, and nonspecific binding of a radiolabeled antibody at various concentrations to its antigen.

تحديد تقارب الارتباط (KD) للأجسام المضادة ذات العلامات المشعة للمستضدات المجمدة

Determining binding affinity (KD) is an important aspect of the characterization of radiolabeled antibodies (rAb). Typically, binding affinity is ...

Medicine

Pretargeted Radioimmunotherapy: A Method for Targeted Delivery of Therapeutic Radionuclides to Tumors

Source: Membreno, R., et al. <a href="https://www.jove.com/v/59041"> Pretargeted Radioimmunotherapy Based on the Inverse Electron Demand Diels-Alder Reaction.</a> J. Vis. Exp. (2019).
This video describes the technique of pretargeted radioimmunotherapy or PRIT, in which immunoconjugates followed by radioligands are administered for treating tumors. This radioimmunotherapy reduces radiation doses to healthy tissues and utilizes radionuclides with very low half-lives incompatible with antibody-based vectors.

العلاج المناعي الإشعاعي الموجه مسبقا: طريقة للتوصيل المستهدف للنويدات المشعة العلاجية للأورام

Source: Membreno, R., et al.  Pretargeted Radioimmunotherapy Based on the Inverse Electron Demand Diels-Alder Reaction. J. Vis. Exp. (2019).
This video ...

وBioconjugation وRadiosynthesis من

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

بروتوكول الأمثل لRadiolabeling كفاءة من جزيئات الذهب عن طريق استخدام

إعداد وتقييم