وأيد هذا العمل من قبل التبرعات الخيرية من جون جي ومؤسسة ماري ستيلا كينيدي التذكاري (المنحة # 0727033) والتحالف أبحاث سرطان الجلد. الكتاب أود أن أشكر جامعة الأنسجة تكساس MD اندرسون مركز سرطان المؤسسي البنك (ITB) لتنسيق توزيع الأنسجة وجمع وتسهيل الأبحاث المترجمة، وكذلك الدكتور اجناسيو Wistuba، الدكتور فيكتور برييتو، وإدارة مركز إم دي أندرسون للسرطان من علم الأمراض وبرنامج أطلق عليه الرصاص الميلانوما القمر. وأخيرا، والكتاب نود أن ننوه جميع المرضى والأسر المتضررة من سرطان الجلد.

بيان الأخلاق: تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل جامعة تكساس مركز أندرسون للسرطان. 1. عينة المشتريات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع عينات الأنسجة البحوث من فائض الورم وما يتصل بها من الأنسجة الطبيعية 10-12. مخزن العينات على الجليد الرطب لتجنب انحلال ذاتي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرسال جميع الأنسجة والأجهزة الطبية والهيئات الأجنبية إزالة أثناء إجراء العمليات الجراحية لقسم علم الأمراض لفحصها ضروري من أجل تسهيل تشخيص مرضي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعامل مع الأنسجة المخصصة للبحوث وفقا للبحوث المعمول بها والسياسات المصرفية النسيج والإجراءات. ملاحظة: جمع Biospecimen ينطوي على تنسيق الأطباء، الأطباء &#39;المساعدين، histotechnologists والمتخصصين المشتريات الأنسجة. </li></ol> 2. أمراض ضمان الجودة (QA) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استكمال والتحقق من سجلات المرضى كإجراء QA المبكر واستشارة الطبيب الشرعي لمراجعة سنويا التشخيصسجلات tient (تقارير علم الأمراض، والشرائح الأنسجة، الخ) وعينات الأنسجة. الأنسجة عينات القاضي على الخصائص المورفولوجية من الاهتمام مثل نسبة الورم، نخر، واجهة الأنسجة السرطانية، وما إلى ذلك وهذا وفقا لأفضل الممارسات biorepository 10-12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبعد المراجعة الأولية، وإجراء مراجعات دورية البيانات biorepository وعينات البحث خلال كامل مدة بقاء biospecimen. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نتائج الارتباط وشروحه من التحقيقات التشريحية المرضية وغيرها من العينات وتوفر هذه البيانات للباحثين من خلال نظام البرمجيات biorepository الملكية. ملاحظة: عمليات QA ضمان سلامة كل الجوانب السريرية والتقنية لعمليات biorepository. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء الاختبارات الجينية والجزيئية للتحقق من وتوصيف العينات للاستخدام السريري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع وتحليل البيانات على أساس التغذية المرتدة من الباحثين الذين تم استخدام العينات لإجراء التجارب المعملية. مسارالعينات باستخدام تكنولوجيا الباركود. ودعا هذا النظام التتبع الإلكتروني أيضا في أفضل الممارسات biorespository 10-12. </li></ol> 3. عينة / معالجة الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دائما تخزين عينات أنسجة جديدة على الجليد الرطب، والعملية في أسرع وقت ممكن، من أجل الحد من التغيرات الناجمة عن استخراج عينة من نسيج بيئتها الطبيعية. عملية الطبيعي الورم المتطابقة وعينات أنسجة الورم بشكل منفصل لتجنب التلوث المتبادل. ملاحظة: بناء على بروتوكولات الأبحاث، ويمكن معالجة biospecimen تنطوي على جمع العينات في واحد أو أكثر من أنواع وسائل الإعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء في عملية، وإعداد طبق بتري معقمة الثقافة، مشرط، فضلا عن إبرة أو ملقط لمعالجة الأنسجة. التأكد من أن أنابيب تم إعداد، وصفت، والتي وضعت من أجل الحد من وقت تجهيز العينات (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جميع المعلومات الأنسجة ذات الصلة، مثل اسم المريض ورقم والعلاج وتاريخعملية جراحية، وغيرها من المعلومات ذات الصلة التي قد تكون ملائمة للدراسة، وينبغي بذل الوصول إليها بسهولة في قاعدة بيانات الأنسجة المؤسسية. ينبغي أن تعقد معلومات محدودة المريض في المختبر في شكل ورقي أو جدول البيانات. ملاحظة: جمع المعلومات ذات الصلة biospecimen لطبيعة أي بحث فقط، والبحوث الطبية الحيوية الأساسية والبحوث السريرية والبحوث متعدية، وما إلى ذلك للحصول على معلومات بأمراض محددة، ينبغي للموظفين biorepository جمع البيانات تعتبر ضرورية من قبل الأدب الحالي والمنظمات التي تنظم ل ضمان التشخيص السليم والبحوث ذات مغزى. وهذا يشمل لكن لا يقتصر على الدرجات ورم وسرطان المعلومات التدريج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخطط كل التجارب اللاحقة المطلوبة في وقت مبكر، لاتخاذ قرار بشأن حجم أقسام الأنسجة المطلوبة لكل نوع من التحليل، فضلا عن موقع الختان. من الناحية المثالية، على الرغم من المستحيل، ينبغي أن تكون جميع التحليلات ممثل قسم الأنسجة بأكمله من أجل حساب heterogenei الأنسجةتاي والحد من التحيز التحليلات المصب. وضع جميع العناصر المطلوبة مقدما كما هو مبين في الشكل (2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع عينة الأنسجة في طبق بتري ثقافة مفتوحة، مسطحة ضد السطح. ملاحظة: السماح يؤذن إلا الموظفين biorepository للتعامل مع العينات التي تم تحديدها واستعراض البيانات الصحية التي تم تحديدها. ينبغي للمحققين فقط الوصول إلى تلك المعرفات المريض كما هو مسموح به وافق على علم قعت وعلى النحو الذي ينظمه الاتحاد الدولي للرجبي. جميع العينات يجب أن يكون المسمى كاف وينبغي أن تشمل على الأقل، فريدة من نوعها رقم التعريف الأنسجة والأنسجة النوع. لا تشمل أي PHI في التسميات، وفقا للوائح HIPAA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد عينة من جميع الزوايا، للحصول على فهم أفضل لهيكل وأبعادها. دبوس العينة إلى أسفل الطبق مع الإبرة، والشروع في شطر الأنسجة على طول أكبر وأفضل تمثيلا محورها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قطعة صغيرة من الأنسجة ووضعه في العقيمة 1.5 مل ميكرأنبوب ocentrifuge تحتوي على 1ml من حل استقرار RNA. يمكن وضع هذه العينة على الجليد للفترة المتبقية من عملية وتخزينها في 4 درجات مئوية لحين الحاجة إليها. ملاحظة: عند العمل مع RNA، ينبغي دائما أن ترتديه والقفازات، ويجب استخدام نصائح مرشح ريبونوكلياز خالية للحد من فرص تدهور وتلوث RNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كاسيت خزعة مفتوحة وصفت قبل في غطاء الطبق الثقافة بيتري. قطع قطعة من الأنسجة لا أكثر سمكا من 3-5 ملم وتحويلها إلى الكاسيت. وضع الكاسيت في 10٪ محايد مخزنة الفورمالين (NBF) مدة لا تقل عن 72 ساعة. نقل الكاسيت في 70٪ من الإيثانول للتخزين طويل الأجل قبل البارافين التضمين. يجب أن يتم وصفها من أشرطة في قلم رصاص أو مع علامات على النحو الموصى به استخدام زيلين أثناء المعالجة سوف يمحو إلا التسميات: ملاحظة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قطعة من النسيج ووضعه في قالب الأنسجة. تغطية قسم الأنسجة في درجة الحرارة المثلى القطع (أكتوبر) المركب، وتجميده مباشرةعند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة cryosectioning. يمكن تخزين هذا القسم الأنسجة في -20 درجة مئوية لتصبح جاهزة للcryosectioning. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع واحد أو العديد من القطع من الأنسجة ونقلها إلى أنبوب 50 مل تحتوي على MACS العازلة (1X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، و 0.5٪ مصل بقري جنيني (FBS)، 2 حامض ملي Ethylenediaminetetraacetic (EDTA)) للتدفق لاحقة تحليل الخلوي . لالتدفق الخلوي، قد تكون عينات أكبر من الأفضل كما قد تفقد الخلايا خلال تبرؤ الورم، وتثبيت الخلية وpermeabilization عند الاقتضاء. عموما، يمكن أن تؤخذ هذه المادة في النهاية، وقد تم تجهيزها مرة واحدة كل قطعة أخرى. بقايا يمكن استخدام عينة الورم تمثيلية للالتدفق الخلوي. اختياريا، يمكن تخزين هذا الأنبوب في 4 درجات CO / N أو استخدامها لتدفق cytometric تلطيخ الهضم التالية فورا الى تعليق خلية (راجع الخطوة 4 - تدفق Cytometric تلطيخ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع ما تبقى من النسيج الى قطع لا يزيد حجمها على حجم الحد الأقصى 0.5 مم × 0.5 مم ونقلها إلى التجميدقارورة لتجميد فوري في النيتروجين السائل. ويمكن استخدام هذه العينات المفاجئة المجمدة ليحلل وأغراض تعاونية المستقبل. ملاحظة: عناية إضافية ينبغي أن تؤخذ عند العمل مع النيتروجين السائل عن الاتصال المباشر يمكن أن يسبب إصابة شديدة. ينبغي حماية العينين مع نظارات السلامة مع الجانب الدروع أو مع درع الوجه. كما ينبغي ارتداء القفازات المبردة للحماية من حروق النيتروجين السائل الناجم عن الرش والاتصال المباشر. يجب قفازات تناسب بشكل صحيح ولكن تكون فضفاضة بما يكفي لإزالتها بسرعة يجب أن ينفق النيتروجين السائل فيها. </li></ol> 4. تدفق Cytometric تلطيخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأنسجة التجانس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الهضم المتوسطة مع DMEM (40 مل)، الدناز I (50 U / مل)، وكولاجيناز I (2 ملغ / مل). مكان الورم الطازجة أو O / N المخزنة في المخزن MACS في غطاء طبق بتري، ويغرق في الهضم المتوسطة. ملاحظة: أساليب الهضم مختلفة موجودة، ولكل منها مزايا (أي سطح الخلية البروتين السابقالضغط و، والسلامة). ضمان لديك الطريقة الصحيحة لتطبيق المصب المطلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دبوس الورم إلى أسفل الطبق مع إبرة، وقطع من الخارج إلى المركز مع مشرط، حتى الورم لديه نسيج يشبه عجينة. نقل مزيج الورم إلى 50 مل أنبوب، وختم وضعها في كيس من البلاستيك لتجنب التسريبات. نقل أنبوب للحاضنة، وتناوب على 225 دورة في الدقيقة، 37 ° C، 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية ورم الخلايا تعليق من خلال مصفاة الخلية 70μm. تعليق خلية الطرد المركزي في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق. بيليه resuspend خلية في 1 مل FACS العازلة (500 مل PBS، 1 مل 0.5 M الأسهم EDTA، 10 مل FCS أو FBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات وإعادة تعليق بتركيز 1X10 7 خلية / مل. نقل 100 ميكرولتر لكل بئر (10 6 خلايا) في 96 جولة جيدا لوحة أسفل لتلطيخ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجدوى وتلوين الأجسام المضادة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 200 ميكرولتر من محلول الجدوى وصمة عار على كل بئر وتخلط. Incuباتي لمدة 30 دقيقة، في 4 درجات مئوية، في الظلام. تدور باستمرار الخلايا في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق، ونضح طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة مزيج الأجسام المضادة في أوصت / تركيز معاير (حسب الشركة المصنعة) لمستضدات السطحية في 200 ميكرولتر من العازلة FACS. احتضان الخلايا عند 4 درجات مئوية، 30 دقيقة، في الظلام. تدور باستمرار الخلايا في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق، ونضح طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع 200 ميكرولتر من العازلة FACS، وتدور أسفل الخلايا في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق، ونضح طاف. الخلايا resuspend في 200 ميكرولتر من العازلة FACS، والشروع في قياس التدفق الخلوي لاقتناء والتحليل. ملاحظة: إذا كان أداء الخلايا التدفق الخلوي تلطيخ، نفذ التثبيت والخطوات permeabilization وتلطيخ الخلايا بين الخطوات 4.2.2 و4.2.3. إذا كان أداء خلوى تلطيخ، وينبغي أن تكون خلايا تلطيخ السابق تفعيلها مسبقا على النحو الموصى به، وينبغي أن تستخدم مانع من النقل البروتين داخل الخلايا وإفراز مثل مونينسين خلال تفعيل لضمان الإبقاء على العوامل القابلة للذوبان. قد يتم تخزين خلايا ثابتة على المدى القصير (أسبوع واحد) في 4 درجات مئوية في الظلام قبل الاستحواذ على تدفق عداد الكريات. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Biology.+Fixing+problems+with+cell+lines.">Cell Biology. Fixing problems with cell lines.</a> Science. 346, 1452-1453 (2014).</li><li>van der Worp, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+animal+models+of+disease+reliably+inform+human+studies.">Can animal models of disease reliably inform human studies.</a> , (2010).</li><li>McCabe, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+disease.">Animal models of disease.</a> Physiol. Behav. 68, 501-507 (2000).</li><li>Woolf, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meaning+of+translational+research+and+why+it+matters.">The meaning of translational research and why it matters.</a> JAMA. 299, 211-213 (2008).</li><li>Brockbank, K. G., Taylor, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Preservation.">Tissue Preservation.</a> Advances in Biopreservation. , 157-159 (2006).</li><li>Bulmer, M., Gilbert, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ethics+of+social+research.">The ethics of social research.</a> Researching social life. , 45-57 (2001).</li><li>Penslar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IRB guidebook. , (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> MD Anderson Cancer Center Institutional Tissue Bank Standard Operating Procedures. 3, (2009).</li><li>Ruffell, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+composition+of+human+breast+cancer.">Leukocyte composition of human breast cancer.</a> Proc. of the Ntnl. Aca. of Sci. 109, 2796-2801 (2012).</li><li>Shapiro, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Practical flow cytometry. , (2005).</li><li>Baker, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+phosphoprotein+as+a+biological+marker+of+tumor+signaling.">Stability of phosphoprotein as a biological marker of tumor signaling.</a> Clin. Cancer Res. 11, 4338-4340 (2005).</li><li>Jacobs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+processing+considerations+for+detecting+copy+number+changes+in+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">Sample processing considerations for detecting copy number changes in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2012, 1195-1202 (2012).</li><li>Chung, J. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+in+tissue+handling+and+processing+that+impact+RNA+obtained+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissue.">Factors in tissue handling and processing that impact RNA obtained from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> J. Histochem. Cytochem. 56, 1033-1042 (2008).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+procedure+for+protein+extraction+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues+for+reverse+phase+protein+arrays.">An efficient procedure for protein extraction from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues for reverse phase protein arrays.</a> Proteome Sci. 10, 1477-5956 (2012).</li><li>Feldman, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+mRNA+amplification+for+microarray+analysis.">Advantages of mRNA amplification for microarray analysis.</a> Biotechniques. 33, 906-914 (2002).</li><li>Francino, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+real-time+PCR+assay+for+diagnosis+and+monitoring+of+canine+leishmaniosis.">Advantages of real-time PCR assay for diagnosis and monitoring of canine leishmaniosis.</a> Vet Parasitol. 137, 214-221 (2006).</li><li>Grunberg-Manago, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Messenger+RNA+stability+and+its+role+in+control+of+gene+expression+in+bacteria+and+phages.">Messenger RNA stability and its role in control of gene expression in bacteria and phages.</a> Annu. Rev. Genet. 33, 193-227 (1999).</li><li>Lesnik, E. A., Freier, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+thermodynamic+stability+of+DNA,+RNA,+and+DNA:RNA+hybrid+duplexes:+relationship+with+base+composition+and+structure.">Relative thermodynamic stability of DNA, RNA, and DNA:RNA hybrid duplexes: relationship with base composition and structure.</a> Biochemistry. 34, 10807-10815 (1995).</li><li>MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+and+proteomics.">Protein microarrays and proteomics.</a> Nat Genet. 32, 526-532 (2002).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

في نهاية المطاف، ويجب أن تكون طرق المعالجة من قبل فرضية المطلوب والمتوقع المقايسات الفنية التي يتعين القيام بها (الشكل 1). يقدم القسم التالي لمحة عامة لوصف المقايسات المحتملة التي يمكن القيام بها في مثل هذه المقاطع الأنسجة. فمن بأي حال من الأحوال وجهة نظر شام...

وقد استفادت البحوث الطبية كثيرا من دراسة كل من خطوط الخلايا البشرية والنماذج الحيوانية. خطوط الخلايا تسمح لتحسين السيطرة على عناصر في النظام، وكذلك استخدام الخلايا من الكائن الحي السليم. العمل مع الخلايا البشرية، في حين أن أكثر تمثيلا، ويعرض لقطة مبسطة بشكل كبير من الآليات التي قد تكون مسؤولة عن الصحة والمرض، وذلك لأن خطوط الخلايا قد لا ألخص تأثير الخلايا الأخرى، مكونات اللحمية، والأجهزة التي قد تؤثر على ردود 1. من ناحية أخرى، النماذج الحيوانية، وإن لم يكن دقيقا تماما في استنساخ الأمراض التي تصيب البشر وعدم التجانس الوراثي، وتقديم مزيد من التبصر من خلال السماح لإدخال نظم الحيوانية كلها في معظم النماذج 2،3. أوجه القصور جانبا، سواء الطرق لها فوائدها ومتكاملان. ومع ذلك، يبقى الهدف الرئيسي لدراسة الخلايا البشرية والأجهزة، في كامل الجسم، ونظام متعدد الجهاز. وفقا لذلك، والبحوث متعدية ديه تاكأون خطوات كبيرة في تسهيل دراسة بالأعضاء والأنسجة البشرية المستخرجة من المرضى، من أجل فهم أفضل للآليات المرض الأساسي. يقدم البحوث متعدية الاستفادة من دراسة نتيجة العلاجات والأمراض في الجسم بأكمله و في الخلايا المناسبة، وبالتالي توفير أفضل ما في العالمين بين الخلية والحيوان العمل 4. الأبحاث المترجمة هو أيضا لا يخلو من العيوب. العينات المأخوذة من المرضى من البشر، على إزالة من المضيف، تخضع مباشرة لنقص التروية وغيرها من العوامل الخارجية التي من شأنها أن تكون محمية خلاف ذلك. هذا قد يؤدي إلى التغيرات الجزيئية والجينية الناجمة عن الإجهاد، ويسبب التحيز في دراسات لاحقة. ولذلك، فقد تم وضع الكثير من الجهد في استخراج ومعالجة الأنسجة من خلال وسائل صارمة للحفاظ على أفضل جهاز وسلامة الخلية للدراسات المصب 5. الأهم من ذلك، يجب أن يتم النظر في الطلبات المستقبلية بشكل وثيق عند اختيار أساليب سو تجهيز العينات البشرية، وأساليب معينة قد يكون ضارا المكونات الخلوية ومسارات إشارات في حين أن يجنب الآخرين. لأي البحوث التي تنطوي على الأنسجة البشرية، يجب أن تعالج القضايا التنظيمية. بعد تقارير توسكيجي وبلمونت، كان هناك قبول متزايد لحقيقة أن ارتبط البحوث الطبية الحيوية مع المخاطر الكامنة يؤدي إلى المعضلات الأخلاقية التي لا مفر منها 6 في كثير من الأحيان. وقد أقر بالحاجة إلى معايير وطنية وإنشاء الحكومة الاتحادية مجالس المراجعة المؤسسية (IRBs) كوسيلة لدعم مبادئ تقرير بلمونت (احترام الأشخاص والاحسان والعدل). IRB أي مؤسسة هو لجنة من الأطباء والباحثين وأعضاء المجتمع الذين يتحملون المسؤولية عن حماية المشاركين البحوث. ويتطلب ذلك أن الموافقة الطوعية الحصول عليها من جميع المشاركين في الدراسات والأبحاث الطبية، وأن يتم توثيق هذه الموافقة في الموافقة المسبقة FO<html> جمهورية مقدونيا. وتهدف عملية الموافقة عن علم على توفير المعلومات الكافية لأحد المشاركين، بحيث يجوز قرار مستنير بشأن ما إذا كان أو لم يكن على الانخراط في دراسة، أو لمواصلة المشاركة. وفي هذا الصدد، يجب أن يكون وثيقة الموافقة المسبقة عن قراءة جيدة ويجب أن تكون مكتوبة في اللغة التي يمكن فهمها بسهولة (6 عشر إلى 8 مستوى القراءة الصف) على عدد السكان المستهدفين. يجب التقليل من احتمال الإكراه أو نفوذ لا مبرر له، ويجب أن يعطى موضوع متسع من الوقت للنظر في المشاركة. يجب أيضا أن يسمح للمشارك أن ممارسة حقهم في سحب الموافقة في أي مرحلة أثناء الدراسة دون عقوبة. الموافقة المستنيرة الطوعية هي شرط مسبق إلزامي للمشاركة موضوعا في مجال البحوث وكما أنها فعالة من الناحية القانونية 7. وفقا للوائح لحماية حقوق الإنسان يخضع 21 CFR 50.25 (/45cfr46.html&quot;&gt;http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8)، ويجب إبلاغ المشاركين في الدراسة من غرض البحث والإجراءات يشارك في البحث، والبدائل في المشاركة، جميع المخاطر المتوقعة والمضايقات (بما في ذلك الضرر ليس فقط المادية ولكن أيضا الضرر النفسي والاجتماعي، أو الاقتصادي المحتمل، وعدم الراحة، أو إزعاج)، فوائد البحوث في المجتمع وربما للفرد، وطول الوقت ومن المتوقع أن يشارك في الموضوع، شخص الاتصال للحصول على إجابات على الأسئلة أو في حال وقوع الإصابات المرتبطة البحوث أو في حالات الطوارئ، البيان مشيرا إلى أن المشاركة طوعية، وسوف أن رفضها المشاركة لم تسفر عن أي نتائج أو أي خسارة من الفوائد مثل حلا وسطا في مجال الرعاية السريرية العادية أن المشاركين يحق لهم الحصول على نتيجة له ​​/ لها التشخيص، وأخيرا بيانا بشأن حق هذا الموضوع في السرية والحق في الانسحاب منالدراسة في أي وقت دون أي عواقب. لا ينبغي أن راهن عينات الأنسجة من المشاركين الذين سحب الموافقة أثناء الدراسة وجوب استنفاد فورا. التنازل عن واحد أو أكثر من عناصر الموافقة المسبقة يمكن الحصول عليها من IRB لبعض المشاريع البحثية التي لا يمكن عمليا أن يتم دون تغيير في العناصر المطلوبة أو للدراسات حيث العناصر المطلوبة غير قابلة للتطبيق. يجب توخي الحذر الشديد لضمان سرية البيانات. نقل التأمين الصحي وقانون محاسبة (HIPAA) هو القانون الاتحادي الذي يمنع استخدام أو الكشف عن &quot;حماية المعلومات الصحية&quot; (PHI) بدون موافقة كتابية من المشاركين. يشمل PHI لكن لا يقتصر على المعلومات الصحية المرسلة أو الاحتفاظ بها في أي شكل أو متوسطة، وتشمل المجالات التي يمكن أن تستخدم لتحديد هوية الأفراد 9. من خلال هذا العمل، ونحن نهدف إلى الخطوط العريضة للبروتوكول التي يجب اتباعها خلال TISSUتجهيز ه - بما في ذلك المشتريات، والتخزين، والتأكيد على أهمية اتباع هذه المبادئ التوجيهية الصارمة وذلك للحد من التحيز التي قد تنجم بسبب ضغوط تتعرض الأنسجة لبناء الاستخراج. ونحن نسعى أيضا إلى تقديم لمحة موجزة عن فحوصات أو تحاليل (الشكل 1) التي يمكن أن يؤديها على هذه العينات المصب ذلك أن القراء قد جعل الحكم المؤهلين على ما مقايسة (ق) يناسب احتياجاتهم.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel disposable scalpels</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Cassettes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>58931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA-stabilizing solution</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml Eppendorf tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>MAX-815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>StatLab Medical Products</td>
			<td>28600-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin Containers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-032-059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimal cutting temperature solution (OCT)</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Cryomold</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088793001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70&#956;m cell strainers</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well round bottom plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/Dead stain solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L34957</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

working with human tissues for translational cancer research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

<html> النتائج المعروضة أدناه تصور تدفق استراتيجية الخلوي النابضة لphenotyping المناعة واسع على الورم القتامي معالجتها. يوم تلطيخ، وهضمها عينة الأنسجة والمتجانس مع كولاجيناز الأول والدناز I الحضانة لمدة 60 دقيقة، عند 37 درجة مئوية تحت 225 دورة في الدقيقة دوران. بعد الهضم، وتصفي...

Watch this Scientific Journal Video about Working with Human Tissues for Translational Cancer Research at JoVE.com

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

العمل مع الأنسجة البشرية لبالحركة أبحاث السرطان

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

working-with-human-tissues-for-translational-cancer-research

Research

JoVE Journal

Medicine

9.8K Views.  University of Texas MD Anderson Cancer Center. Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Video: Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

جيل من قاعدة بيانات شاملة للأورام الصدر -- أداة للبحوث بالحركة

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

إنشاء والدعوة للأورام الشبكية الإنسان في الفئران أن نقص المناعة

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

فيفو السابقين العدوى من الأنسجة الحية مع الفيروسات Oncolytic

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of extracellular matrix (ECM) and a variety of mesenchymal cells, including fibroblasts, myofibroblasts, endothelial cells, pericytes and leukocytes 1-3.
The tumour-associated stroma is responsive to substantial paracrine signals released by neighbouring carcinoma cells. During the disease process, the stroma often becomes populated by carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) including large numbers of myofibroblasts. These cells have previously been extracted from many different types of human carcinomas for their in vitro culture. A subpopulation of CAFs is distinguishable through their up-regulation of &alpha;-smooth muscle actin (&alpha;-SMA) expression4,5. These cells are a hallmark of 'activated fibroblasts' that share similar properties with myofibroblasts commonly observed in injured and fibrotic tissues 6. The presence of this myofibroblastic CAF subset is highly related to high-grade malignancies and associated with poor prognoses in patients.
Many laboratories, including our own, have shown that CAFs, when injected with carcinoma cells into immunodeficient mice, are capable of substantially promoting tumourigenesis 7-10. CAFs prepared from carcinoma patients, however, frequently undergo senescence during propagation in culture limiting the extensiveness of their use throughout ongoing experimentation. To overcome this difficulty, we developed a novel technique to experimentally generate immortalised human mammary CAF cell lines (exp-CAFs) from human mammary fibroblasts, using a coimplantation breast tumour xenograft model.
In order to generate exp-CAFs, parental human mammary fibroblasts, obtained from the reduction mammoplasty tissue, were first immortalised with hTERT, the catalytic subunit of the telomerase holoenzyme, and engineered to express GFP and a puromycin resistance gene. These cells were coimplanted with MCF-7 human breast carcinoma cells expressing an activated ras oncogene (MCF-7-ras cells) into a mouse xenograft. After a period of incubation in vivo, the initially injected human mammary fibroblasts were extracted from the tumour xenografts on the basis of their puromycin resistance 11.
We observed that the resident human mammary fibroblasts have differentiated, adopting a myofibroblastic phenotype and acquired tumour-promoting properties during the course of tumour progression. Importantly, these cells, defined as exp-CAFs, closely mimic the tumour-promoting myofibroblastic phenotype of CAFs isolated from breast carcinomas dissected from patients. Our tumour xenograft-derived exp-CAFs therefore provide an effective model to study the biology of CAFs in human breast carcinomas. The described protocol may also be extended for generating and characterising various CAF populations derived from other types of human carcinomas.

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) rich in myofibroblasts present within the tumour stroma, play a major role in driving tumour progression. We developed a coimplantation tumour xengraft model for experimentally generating CAFs from human mammary fibroblasts. The protocol describes how to establish CAF myofibroblasts that acquire an ability to promote tumourigenesis.

الجيل التجريبية للسرطان ، المرتبطين بها الخلايا الليفية (مقاهي) من الخلايا الليفية الثديية البشرية

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

تجهيز رأب الثدي لحد من استئصال الثدي والأنسجة البشرية للثقافة الخليوي

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

A معدلة غيري مكاني الخنازير هند أطرافهم نموذج زرع أوعية دموية لبالحركة المجمع زرع الطعم الخيفي (VCA) بحوث

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tumor extracellular matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers for cancer molecular imaging. In this work, we demonstrated effective MR cancer molecular imaging with a small molecular peptide targeted Gd-DOTA monoamide complex as a targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma. We performed the experiment of evaluating the effectiveness of the agent for non-invasive detection of prostate tumor with MRI in a mouse orthotopic PC-3 prostate cancer model. The targeted contrast agent was effective to produce significant tumor contrast enhancement at a low dose of 0.03 mmol Gd/kg. The peptide targeted MRI contrast agent is promising for MR molecular imaging of prostate tumor.

To demonstrate MR cancer molecular imaging with a small peptide targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma in a mouse prostate cancer model.

MR التصوير الجزيئي للسرطان البروستاتا مع وكيل النقيض المستهدفة الجزيئية الببتيد الصغيرة CLT1

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human cancer cells in mitosis. The phenanthridine PJ-34 was the most potent molecule. Declustering of extra-centrosomes causes mitotic failure and cell death in multi-centrosomal cells. Most solid human cancers have high occurrence of extra-centrosomes. The activity of PJ-34 was documented in real-time by confocal imaging of live human breast cancer MDA-MB-231 cells transfected with vectors encoding for fluorescent &gamma;-tubulin, which is highly abundant in the centrosomes and for fluorescent histone H2b present in the chromosomes. Aberrant chromosomes arrangements and de-clustered &gamma;-tubulin foci representing declustered centrosomes were detected in the transfected MDA-MB-231 cells after treatment with PJ-34. Un-clustered extra-centrosomes in the two spindle poles preceded their cell death. These results linked for the first time the recently detected exclusive cytotoxic activity of PJ-34 in human cancer cells with extra-centrosomes de-clustering in mitosis, and mitotic failure leading to cell death. According to previous findings observed by confocal imaging of fixed cells, PJ-34 exclusively eradicated cancer cells with multi-centrosomes without impairing normal cells undergoing mitosis with two centrosomes and bi-focal spindles. This cytotoxic activity of PJ-34 was not shared by other potent PARP1 inhibitors, and was observed in PARP1 deficient MEF harboring extracentrosomes, suggesting its independency of PARP1 inhibition. Live confocal imaging offered a useful tool for identifying new molecules eradicating cells during mitosis.

The cytotoxic activity of the phenanthridine PJ-34 in cancer cells undergoing mitosis was documented in real time by live confocal imaging. PJ-34 eradicated human breast cancer MDA-MB-231 cells harboring extra-centrosomes in mitosis. Unlike normal bi-focal mitosis, the extra-centrosomes were not clustered in the two spindle poles in the presence of PJ-34.

موت الخلايا المرتبطة الانقسام الشاذ التي لاحظها التصوير متحد البؤر في الخلايا السرطانية لايف

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that self-renew while giving rise to more differentiated progeny. Understanding and targeting these cancer stem cells in breast cancer, which may possess enhanced chemo- and radio-resistance compared to the non-stem tumor bulk, has become an important research area. Markers including CD44, CD24, and ALDH activity can be assessed using fluorescence activated cell sorting (FACS) to prospectively isolate cells that display enhanced tumorigenicity when implanted into immunocompromised mice: the mammosphere assay has also become widely used for its ability to retrospectively identify sphere-forming cells that develop from single stem cell-like clones. Here we outline approaches for the appropriate culturing of mammospheres from cell lines or primary patient samples, their passaging, and calculations to estimate sphere forming efficiency (SFE). First we discuss key considerations and pitfalls in the appropriate planning and interpretation of mammosphere experiments.

Floating mammosphere assays can investigate the subset of stem-like breast cancer cells that survive in suspension conditions and show enhanced tumorigenesis when implanted into mice. This protocol provides a convenient in vitro measure of sphere-forming ability, a proxy for in vivo tumorigenesis, while facilitating analysis of the stem-associated transcriptional landscape.

Mammosphere تشكيل الفحص من الثدي البشري سرطان الأنسجة وخطوط الخلايا

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that ...