Bu çalışma, John G. ve Marie Stella Kenedy Memorial Vakfı (Hibe # 0727033) ve Melanom Araştırma İttifak hayırsever katkıları ile desteklenmiştir. Yazarlar Dr. Ignacio Wistuba, Dr. Victor Prieto, MD Anderson Kanser Merkezi Dairesi yanı sıra, doku dağıtımı, toplanması koordine ve translasyonel araştırma kolaylaştırmak için Texas MD Anderson Kanser Merkezi Kurumsal Doku Bankası (ITB) University of teşekkür etmek istiyorum Patoloji ve Melanom Ay Shot Programı. Son olarak, yazarlar melanom etkilenen tüm hastalara ve ailelerine teşekkür etmek istiyoruz.

Etik bildirimi: Bu protokol Texas MD Anderson Kanser Merkezinde Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Numune Alımı <ol><li> Artı tümör ve ilgili normal dokudan 10-12 araştırma doku örneklerini toplayın. Islak buz üzerinde saklayın örnekleri otolitik önlemek için. </li><li> Patolojik tanı kolaylaştırmak amacıyla tüm dokuları, tıbbi cihazlar ve gerekli inceleme için Patoloji Anabilim bir cerrahi prosedür sırasında çıkarılan yabancı cisimlerin gönder. </li><li> Uygulanabilir araştırma ve doku bankacılığı politikaları ve prosedürlerine uygun olarak araştırma için ayrılan doku anlaştım. NOT: Biospecimen toplama patologlar koordinasyonunu gerektirir, patologlar &#39;yardımcıları, histotechnologists ve doku alım uzmanları. </li></ol> 2. Patoloji Kalite Güvencesi (QA) <ol><li> Tamamlayın ve erken QA önlem olarak hasta kayıtlarını doğrulamak ve teşhis pa gözden geçirmek için bir patolog danışmaktient kayıtları (patoloji raporları, doku slaytlar, vb) ve doku örnekleri. Böyle Bu biorepository en iyi uygulamalar 10-12 uyarınca vs tümör yüzdesi, nekroz, doku tümör arayüzü, gibi ilgi morfolojik özelliklerine Yargıç doku örnekleri. </li><li> İlk inceleme sonrasında, biospecimen kalış tüm uzunluğu boyunca biorepository verileri ve araştırma örneklerinin periyodik gözden yürütürler. </li><li> Numunelere histopatolojik ve diğer incelemelerden Bağlantı sonuçları ve açıklamalar ve özel bir biorepository yazılım sistemi aracılığıyla araştırmacılara bu veri sağlar. NOT: QA süreçleri biorepository operasyonların klinik ve teknik yönlerini hem de bütünlüğünü sağlamak. </li><li> Doğrulamak ve klinik kullanım için numune karakterize genetik ve moleküler testleri gerçekleştirin. </li><li> Toplayın ve laboratuar deneyleri için örnekler kullanıyorum araştırmacıların görüşlerine dayalı verileri analiz. ParçaBarkod teknolojisi kullanılarak örnekler. Bu elektronik izleme sistemi de biorespository en iyi uygulamalar 10-12 yılında savunulmaktadır. </li></ol> 3. Örnek / Doku İşleme <ol><li> Daima kendi doğal ortamından doku örneğinin çıkarılması tarafından uyarılan değişiklikleri sınırlamak amacıyla, mümkün olduğunca çabuk taze doku ıslak buz üzerinde örneklerin ve süreç saklayın. Süreç, normal tümör eşleşti ve tümör dokusu örnekleri ayrı ayrı çapraz bulaşmayı önlemek için. Not: Araştırma iletişim kurallarına göre, biospecimen işleme ortamının bir veya daha fazla tipte örneklerin toplanması içerebilir. </li><li> Işlemine başlamadan önce, steril Petri kültür çanak, bir neşter gibi doku işleme için bir iğne veya forseps hazırlamak. Borular, hazırlanan etiketli ve örnek işleme (Şekil 2) süresini sınırlamak amacıyla düzenlendiği emin olun. </li><li> Böyle hasta adı, numarası, tedavi, tarihi olarak tüm ilgili doku bilgileri,cerrahi, ve çalışma için uygun olabilecek diğer ilgili bilgileri, kurumsal bir doku veritabanında kolayca erişilebilir hale getirilmelidir. Sınırlı hasta bilgileri kağıt veya elektronik tablo şeklinde laboratuvarda yapılmalıdır. NOT:. Sadece araştırma viz doğası ile ilgili biospecimen bilgi toplamak, hastalığa özgü bilgiler için vb temel biyomedikal araştırmalar, klinik araştırmalar, translasyonel araştırma, biorepository personel için literatürde gerekli gördüğü bilgi ve yöneten organizasyonlar toplamak gerekir doğru tanı ve anlamlı araştırma sağlamak. Bu içerir, ancak tümör notları ve kanser evreleme bilgilerle sınırlı değildir. </li><li> Analiz, her tür, hem de oluk bezeme konumu için gerekli olan doku bölümleri büyüklüğüne karar verirse, tüm istenen sonraki deneyler planı. Imkansız olmasına rağmen İdeal olarak, tüm analizler doku heterogenei hesaba katmak amacıyla, tüm doku bölümünde temsilcisi olmalıdırty ve alt analizlerin sınırı önyargı. Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi önceden gerekli tüm öğeleri yatırın. </li><li> Yüzeyine düz açık Petri kültür çanak doku örneği, yerleştirin. NOT: Sadece belirlenen örneklerin ele ve belirlenen sağlık verilerini yorumlayan biorepository personel yetkili izin ver. Müfettişler IRB tarafından düzenlenen imzalanan bilgilendirilmiş onayı ile izin verilen ve sadece bu hasta tanımlayıcılar erişebilirsiniz gerekir. Tüm örnekler yeterince etiketli olmalı ve en az bir benzersiz doku kimlik numarası ve doku tipi de içermelidir. HIPAA düzenlemelerine uygun olarak, etiketler herhangi bir PHI içermez. </li><li> Yapısı ve boyutları daha iyi anlamak için, tüm açılardan örneği inceleyin. Iğne ile çanak alt numuneyi Pin ve onun en büyük ve en iyi temsil eden eksen boyunca doku iki eşit parçaya böler geçin. </li><li> Doku küçük bir parça kesip ve steril bir 1.5 ml MICR yerleştirinRNA-stabilize edici çözeltinin 1ml içeren ocentrifuge tüpü. Bu örnek, işlemin geri kalan kısmı için buz üzerine yerleştirilmiş ve gerekli olana kadar, 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir. NOT: RNA ile çalışırken, eldiven daima giyilmelidir ve RNAse ücretsiz filtre ipuçları bozulması ve RNA kirlenme ihtimalini sınırlamak için kullanılmalıdır. </li><li> Petri kültür çanak kapağı açık ve önceden etiketlenmiş biyopsi kasetini yatıyordu. 5 mm 3&#39;ten hiçbir kalın bir doku dilim kesip kaset aktarmak. 72 saat en az% 10 kaseti nötr tamponlu formalin (NBF) koyun. Parafin katıştırma önce uzun süreli depolama için% 70 etanol içinde kaset aktarın. Not: kasetlerin Etiketleme kalem ya da başka etiket silecektir işleme sırasında ksilen kullanımı önerilen belirteçler ile yapılmalıdır. </li><li> Doku parçası kesip bir doku kalıp yerleştirin. Optimal kesme sıcaklığı (OCT) bileşik doku bölümünü kapsayacak ve hemen dondurmakcryosectioning -20 ° C &#39;de. Bu doku kesiti cryosectioning için hazır olana kadar -20 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> Bir kesip veya dokuya birçok parçalar ve MACS tamponu ihtiva eden 50 ml&#39;lik bir tüp (1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS),% 0.5 fetal sığır serumu (FBS), 2 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA)) sitometri analizi daha sonra akış aktarmak . Flow sitometri için gerektiğinde hücreler tümör disassociation, hücre fiksasyon ve permeabilization sırasında kaybolmuş olabilir gibi büyük numuneler tercih edilebilir. Genel olarak, bu bölüm sonunda alınabilir, bir kez tüm diğer parçaları işlenmiştir. Kalan temsili tümör örneği akış sitometrisi için kullanılabilmektedir. İsteğe bağlı olarak, bu tüp, 4 ° C&#39;de saklandı CO / H ya da bir hücre süspansiyonu (Adım: 4 - Akım Sitometrisi boyanması) içerisine akış sitometrik boyama hemen sonra sindirim için de kullanılabilir. </li><li> 0,5 mm x 0,5 mm maksimum boyutundan daha büyük parçalar hiçbir içine doku geri kalanını kesin ve Kriogen aktarabilirsinizSıvı azot içinde hızlı dondurulması şişeler. Gelecek analizleri ve işbirlikçi amaçlı bu çırpıda dondurulmuş numuneler kullanılabilir. NOT: Doğrudan temas ciddi yaralanmalara yol açabilir gibi sıvı azot ile çalışırken ekstra dikkatli olunmalıdır. Gözler Yan siperleri olan veya yüz kalkanı ile koruyucu gözlüklerle korunmalıdır. Dondurucu eldiven de sıçramasına ve doğrudan temas sonucu sıvı azot yanıklardan korumak için giyilmelidir. Eldivenler düzgün uygun ama bunların içine hızla gerektiği sıvı azot sıçrama kaldırılacak kadar gevşek olmalıdır. </li></ol> 4. Akış Sitometrik Boyama <ol><li> Doku Homojenizasyon <ol><li> DMEM (40 mi), DNase I (50 U / ml) ve kollajenaz l (2 mg / ml) ile sindirim orta hazırlayın. Petri kabı kapağı MACS tamponu taze veya O / N-depolanan tümör yerleştirin ve sindirim ortamı ile daldırın. NOT:. Farklı sindirim yöntemleri, mevcut avantajları ile her (yani, hücre yüzey proteini expression, canlılığı). İstediğiniz alt uygulama için uygun bir yöntem olduğundan emin olun. </li><li> Tümör macun benzeri bir dokuya sahiptir kadar dışarıdan bir iğne ile çanak alt ve kesim Pin tümörü, bir neşter ile merkezi. Sızıntıları önlemek için bir plastik torba içinde bir 50 ml tüp, mühür ve yere tümör karışımı aktarın. Bir kuluçka tüp aktarın ve 225 rpm, 37 ° C, 1 saat sonra döner. </li><li> Bir 70μm hücre süzgecinden tümör hücre süspansiyonu Filtre. 250 xg, 4 ° C&#39;de, 5 dakika santrifüjleyin hücre süspansiyonu. 1 ml FACS tamponu (500 ml PBS, 1 mi 0,5 M stok EDTA, 10 mi FCS ya FBS) yeniden süspanse hücre topağı. </li><li> Bir hemasitometre kullanarak hücreleri sayın ve 1x10 7 hücre / ml &#39;lik bir konsantrasyonda yeniden askıya. Aktarım boyama için bir 96 yuvalı yuvarlak tabanlı plaka içinde çukur başına 100 ul (10 6 hücre). </li></ol></li><li> Canlılık ve Antikor Boyama <ol><li> Her bir canlılık leke çözeltisi 200 ul de ilave et ve karıştır. IncuKaranlıkta 4 ° C&#39;da 30 dakika, için kesmek. 250 xg, 4 ° C&#39;de 5 dakika ve aspire süpernatant hücreleri aşağı doğru döndürün. </li><li> FACS tampon 200 ul yüzey antijenleri için (üretici göre) tarafından önerilen / titre konsantrasyonda antikor karışımı ekleyin. Karanlıkta 4 ° C&#39;de, 30 dakika hücreleri inkübe edin. 250 xg, 4 ° C&#39;de 5 dakika ve aspire süpernatant hücreleri aşağı doğru döndürün. </li><li> , FACS tampon 200 ul ile yıkayınız 250 xg, 4 ° C&#39;de 5 dakika ve aspire süpernatant hücreleri aşağı doğru döndürün. FACS tampon 200 ul hücre yeniden süspanse edin ve alımı ve analizi için akış sitometresi geçin. NOT: Hücre içi akış sitometri boyama gerçekleştirmek durumunda adımlarla 4.2.2 ile 4.2.3 arasında tespit ve permeabilization adımları ve hücre içi boyama gerçekleştirin. Sitokin boyama gerçekleştirmek için, hücreler, tavsiye edildiği gibi ön-aktifleştirilmiş önceki boyama olmalıdır, ve bu da monensin hücre içi protein taşıma ve salgılama inhibitörü aktivasyon sırasında kullanılan gerekençözünür faktörlerin tutulmasını sağlamak. Sabit hücreler bir akış sitometresi üzerinde koyu önce ediniminde 4 ° C&#39;de kısa vadeli (bir hafta) saklanabilir. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Biology.+Fixing+problems+with+cell+lines.">Cell Biology. Fixing problems with cell lines.</a> Science. 346, 1452-1453 (2014).</li><li>van der Worp, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+animal+models+of+disease+reliably+inform+human+studies.">Can animal models of disease reliably inform human studies.</a> , (2010).</li><li>McCabe, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+disease.">Animal models of disease.</a> Physiol. Behav. 68, 501-507 (2000).</li><li>Woolf, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meaning+of+translational+research+and+why+it+matters.">The meaning of translational research and why it matters.</a> JAMA. 299, 211-213 (2008).</li><li>Brockbank, K. G., Taylor, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Preservation.">Tissue Preservation.</a> Advances in Biopreservation. , 157-159 (2006).</li><li>Bulmer, M., Gilbert, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ethics+of+social+research.">The ethics of social research.</a> Researching social life. , 45-57 (2001).</li><li>Penslar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IRB guidebook. , (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> MD Anderson Cancer Center Institutional Tissue Bank Standard Operating Procedures. 3, (2009).</li><li>Ruffell, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+composition+of+human+breast+cancer.">Leukocyte composition of human breast cancer.</a> Proc. of the Ntnl. Aca. of Sci. 109, 2796-2801 (2012).</li><li>Shapiro, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Practical flow cytometry. , (2005).</li><li>Baker, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+phosphoprotein+as+a+biological+marker+of+tumor+signaling.">Stability of phosphoprotein as a biological marker of tumor signaling.</a> Clin. Cancer Res. 11, 4338-4340 (2005).</li><li>Jacobs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+processing+considerations+for+detecting+copy+number+changes+in+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">Sample processing considerations for detecting copy number changes in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2012, 1195-1202 (2012).</li><li>Chung, J. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+in+tissue+handling+and+processing+that+impact+RNA+obtained+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissue.">Factors in tissue handling and processing that impact RNA obtained from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> J. Histochem. Cytochem. 56, 1033-1042 (2008).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+procedure+for+protein+extraction+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues+for+reverse+phase+protein+arrays.">An efficient procedure for protein extraction from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues for reverse phase protein arrays.</a> Proteome Sci. 10, 1477-5956 (2012).</li><li>Feldman, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+mRNA+amplification+for+microarray+analysis.">Advantages of mRNA amplification for microarray analysis.</a> Biotechniques. 33, 906-914 (2002).</li><li>Francino, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+real-time+PCR+assay+for+diagnosis+and+monitoring+of+canine+leishmaniosis.">Advantages of real-time PCR assay for diagnosis and monitoring of canine leishmaniosis.</a> Vet Parasitol. 137, 214-221 (2006).</li><li>Grunberg-Manago, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Messenger+RNA+stability+and+its+role+in+control+of+gene+expression+in+bacteria+and+phages.">Messenger RNA stability and its role in control of gene expression in bacteria and phages.</a> Annu. Rev. Genet. 33, 193-227 (1999).</li><li>Lesnik, E. A., Freier, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+thermodynamic+stability+of+DNA,+RNA,+and+DNA:RNA+hybrid+duplexes:+relationship+with+base+composition+and+structure.">Relative thermodynamic stability of DNA, RNA, and DNA:RNA hybrid duplexes: relationship with base composition and structure.</a> Biochemistry. 34, 10807-10815 (1995).</li><li>MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+and+proteomics.">Protein microarrays and proteomics.</a> Nat Genet. 32, 526-532 (2002).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

Sonuçta, işleme yöntemleri, istenen hipotez tarafından dikte ve (Şekil 1) yapılacak teknik testlerin tahmin edilmelidir. Aşağıdaki bölüm, doku kesitlerinde gerçekleştirilebilir potansiyel tahlilleri açıklamak için özet olarak hizmet vermektedir. Hiçbir ayrıntılı bir bakış anlamına gelir, ama teknikleri anlatan ve onların güçlü ve zayıf yönlerini listeleyerek kılavuz örnek işleme yöntemleri ve alt testlerin seçimi yardımcı olmak için tasarlanmıştır gereğidir. </p...

Tıbbi araştırma, insan hücre hatları ve hayvan modellerinde hem çalışma son derece yararlanmıştır. Hücre çizgileri iyi bir sistem elemanlarının kontrolü, hem de uygun organizmadan hücrelerin kullanımı için izin verir. Hücre hatları yanıtları 1 etkileyebilecek diğer hücrelerin, stromal bileşenleri ve organların etkisini özetlemek değil, çünkü daha fazla temsilcisi olurken, sağlık ve hastalık sorumlu olabilir mekanizmalarının büyük ölçüde basitleştirilmiş anlık sunar, insan hücreleri ile çalışma. Öte yandan, hayvan modelleri, insan hastalığını ve genetik heterojenite üreyen tamamen doğru olmasa da, çoğu modelde 2,3 bütün hayvan sistemlerinin giriş için izin vererek daha fazla fikir sunar. Eksiklikleri bir yana, her iki yöntemin de yararları var ve tamamlayıcı niteliktedir. Ancak, ana hedefi bir tam vücut, çoklu organ sisteminde insan hücreleri ve organları, çalışma devam etmektedir. Bu duruma göre, geleneksel araştırma tak sahipDaha iyi mekanizmaları altta yatan hastalığın kavramak için, insan organları ve hastaların çıkarılan dokuların çalışma kolaylaştırmada büyük adımlar tr. Translational araştırma ve böylece, tüm vücutta ve uygun hücrelerde tedavileri ve hastalıkların sonuçlarını okuyan hücre ve hayvan çalışmaları 4 arasında iki dünyanın en iyi sağlama avantajı sunuyor. Translational araştırma kusurları olmadan da değil. Insan hastalardan hasat edilen örnekler, ana bilgisayardan uzaklaştırılması üzerine hemen iskemi ve başka bir şekilde korunacak olan, diğer dış faktörlerle tabi tutulur. Bu stres kaynaklı moleküler ve genetik değişikliklere neden olur ve daha sonraki çalışmalarda önyargı neden olabilir. Bu nedenle, çok çaba en aşağı çalışmalar için 5 organ ve hücre bütünlüğünü korumak için sıkı yöntemlerle dokuların çıkarılması ve işlenmesi girmiştir. Yöntemleri o seçerken önemlisi, gelecekteki uygulamalar yakından ele alınmalıdırf belli yöntemler hücresel bileşenleri için zararlı olabileceğinden, insan örnekleri işleme ve diğerleri tutumlu sırasında sinyal yolları. İnsan dokuları içeren herhangi araştırma, düzenleyici konular ele alınmalıdır. Tuskegee ve Belmont raporlar sonrasında, biyomedikal araştırma doğasında riskler genellikle kaçınılmaz etik ikilemler 6 sonuçlanan ile ilişkili olduğu gerçeğini büyüyen bir kabul vardı. Ulusal standartlara ihtiyaç tanındı ve federal hükümet Belmont Raporu ilkelerine uyulması (kişiler, Yararlılık, Adalet için saygı) için bir araç olarak Kurumsal Gözden Kurulları (IRBs) oluşturuldu. Herhangi bir kurumun IRB araştırma katılımcılarının korumakla yükümlüdür doktorlar, araştırmacılar ve topluluk üyeleri bir kuruldur. Gönüllü rıza biyomedikal araştırma çalışmalarının tüm katılımcıların elde gerektirir ve bu rıza bir aydınlatılmış onam fo belgelenmiş olması<html> rm. Bilgilendirilmiş onam süreci bilinçli bir karar çalışmaya kayıt veya katılım devam edip etmemeye yapılabilir böylece, bir katılımcının yeterli bilgi vermeyi amaçlamaktadır. Bu bağlamda, bilgilendirilmiş onam belge iyi okunabilirliği olmalı ve kolayca hedef nüfusun (6 th 8 inci sınıf okuma seviyesi) anlayabileceği dilde yazılmış olmalıdır. Baskı veya uygunsuz etkiden olasılığı minimize edilmelidir, ve konu katılımını dikkate için yeterli zaman verilmelidir. Katılımcı da ceza olmadan çalışmanın seyri sırasında herhangi bir aşamada onayı geri alma hakkını kullanmasına izin verilmelidir. Gönüllü bilgilendirilmiş onam araştırma gönüllünün katılımı için zorunlu ön koşulu ve aynı zamanda 7 hukuken etkilidir. Insan korunması için yönetmelik gereğince konular 21 CFR 50,25 (/45cfr46.html&quot;&gt;http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8), çalışmaya katılanların araştırma amacı haberdar edilmelidir, araştırmaya katılan prosedürleri, katılım alternatifleri, topluma ve muhtemelen tek araştırma tüm öngörülebilir riskler ve rahatsızlıkları (sadece fiziksel yaralanma, aynı zamanda mümkün psikolojik, sosyal ya da ekonomik zarar, rahatsızlık ya da rahatsızlık dahil), faydaları, konu katılması bekleniyor zamanın uzunluğu, kişi katılım gönüllü olduğunu belirten açıklamada, soruların ya da araştırma ile ilgili yaralanma ya da acil durumlarda cevaplar için iletişim ve katılmak için bu reddin, düzenli klinik bakım bir uzlaşma olarak herhangi bir sonuç veya faydalar herhangi kaybına neden olmaz katılımcı aksi hakkı olduğunu gizlilik ve çekilme hakkına kişinin hakkına ilişkin nihayet bir açıklama onun / onu tanı sonucu almak veherhangi sonuçları olmadan herhangi bir zamanda çalışma. Çalışmanın süresince onayı geri katılımcılardan doku örnekleri banked edilmemelidir ve hemen tükenmiş olması gerekir. Aydınlatılmış onam bir ya da daha fazla eleman feragat pratik gerekli unsurlara veya gerekli unsurlar uygulanabilir olmadığında çalışmalar için bir değişiklik olmadan yapılamaz olabilir bazı araştırma projeleri için IRB elde edilebilir. Büyük bir dikkatle veri gizliliğini sağlamak için alınmalıdır. Sağlık Sigortası Taşınabilirlik ve Sorumluluk Yasası (HIPAA) kullanarak veya katılımcıların yazılı izni olmadan &quot;Korumalı Sağlık Bilgileri&quot; (PHI) ifşa engelleyen bir federal yasa olduğunu. PHI içerir, ancak sağlık bilgileri iletilen veya muhafaza herhangi bir biçimde ya da orta ve bireysel 9 tanımlamak için kullanılabilir alanları içerir ile sınırlı değildir. Bu çalışma sayesinde, biz Tissu&#39;nun sırasında uyulması gereken protokol anahat hedefliyoruze işleme - tedarik dahil, depolama ve doku çıkarma üzerine maruz streslere bağlı olarak meydana gelebilir önyargıları en aza indirecek şekilde bu katı yönergeleri izleyerek önemini vurgulamaktadır. Okuyucular Ne tahlil (ler) en iyi onların ihtiyaçlarına uygun nitelikli bir yargıya böylece biz de aşağı tahlillerde ya da bu tür örnekler üzerinde yapılabilecek analizler (Şekil 1) kısa bir özetini sunmak için gayret.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel disposable scalpels</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Cassettes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>58931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA-stabilizing solution</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml Eppendorf tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>MAX-815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>StatLab Medical Products</td>
			<td>28600-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin Containers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-032-059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimal cutting temperature solution (OCT)</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Cryomold</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088793001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70&#956;m cell strainers</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well round bottom plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/Dead stain solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L34957</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

working with human tissues for translational cancer research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

<html> Aşağıda gösterilen sonuçlar işlenmiş bir melanom tümör üzerinde geniş bir immün fenotipleme için akış sitometri yolluk stratejisini betimliyor. Boyama gün, doku numunesi 225 RPM dönme altında, 37 ° C&#39;de, sindirilmiş ve kolajenaz I ve 60 dakika boyunca kuluçkalama DNase I ile homojenize edildi. Sindirme işlemini takiben, bir hücre süspansiyonu artıkları yok etmek için 70 mikron hücre süzgecinden süzüldü ve hücreler, immün hücre fenotipleme antikorlar sitometri floresan etiketl...

Watch this Scientific Journal Video about Working with Human Tissues for Translational Cancer Research at JoVE.com

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Translational Kanser Araştırma İnsan Doku ile Çalışma

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

working-with-human-tissues-for-translational-cancer-research

Research

JoVE Journal

Medicine

9.8K Görüntüleme.  University of Texas MD Anderson Cancer Center. Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Video: Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

Kapsamlı Göğüs Onkoloji Veritabanı Üretimi - Translasyonel Araştırma Aracı

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Tıp

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Bağışıklık Eksik Fare Kuruluş ve İnsan Retinoblastom Tümörler yayılımı

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Ex Vivo Enfeksiyon Oncolytic Virüsler Canlı Doku

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of extracellular matrix (ECM) and a variety of mesenchymal cells, including fibroblasts, myofibroblasts, endothelial cells, pericytes and leukocytes 1-3.
The tumour-associated stroma is responsive to substantial paracrine signals released by neighbouring carcinoma cells. During the disease process, the stroma often becomes populated by carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) including large numbers of myofibroblasts. These cells have previously been extracted from many different types of human carcinomas for their in vitro culture. A subpopulation of CAFs is distinguishable through their up-regulation of &alpha;-smooth muscle actin (&alpha;-SMA) expression4,5. These cells are a hallmark of 'activated fibroblasts' that share similar properties with myofibroblasts commonly observed in injured and fibrotic tissues 6. The presence of this myofibroblastic CAF subset is highly related to high-grade malignancies and associated with poor prognoses in patients.
Many laboratories, including our own, have shown that CAFs, when injected with carcinoma cells into immunodeficient mice, are capable of substantially promoting tumourigenesis 7-10. CAFs prepared from carcinoma patients, however, frequently undergo senescence during propagation in culture limiting the extensiveness of their use throughout ongoing experimentation. To overcome this difficulty, we developed a novel technique to experimentally generate immortalised human mammary CAF cell lines (exp-CAFs) from human mammary fibroblasts, using a coimplantation breast tumour xenograft model.
In order to generate exp-CAFs, parental human mammary fibroblasts, obtained from the reduction mammoplasty tissue, were first immortalised with hTERT, the catalytic subunit of the telomerase holoenzyme, and engineered to express GFP and a puromycin resistance gene. These cells were coimplanted with MCF-7 human breast carcinoma cells expressing an activated ras oncogene (MCF-7-ras cells) into a mouse xenograft. After a period of incubation in vivo, the initially injected human mammary fibroblasts were extracted from the tumour xenografts on the basis of their puromycin resistance 11.
We observed that the resident human mammary fibroblasts have differentiated, adopting a myofibroblastic phenotype and acquired tumour-promoting properties during the course of tumour progression. Importantly, these cells, defined as exp-CAFs, closely mimic the tumour-promoting myofibroblastic phenotype of CAFs isolated from breast carcinomas dissected from patients. Our tumour xenograft-derived exp-CAFs therefore provide an effective model to study the biology of CAFs in human breast carcinomas. The described protocol may also be extended for generating and characterising various CAF populations derived from other types of human carcinomas.

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) rich in myofibroblasts present within the tumour stroma, play a major role in driving tumour progression. We developed a coimplantation tumour xengraft model for experimentally generating CAFs from human mammary fibroblasts. The protocol describes how to establish CAF myofibroblasts that acquire an ability to promote tumourigenesis.

İnsan Meme Fibroblastlar Karsinom İlişkili Fibroblastlar Deneysel Nesil (CAFs)

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

Hücre Kültürü İnsan Azaltma Meme Cerrahisi ve Mastektomi Doku İşleme

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tumor extracellular matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers for cancer molecular imaging. In this work, we demonstrated effective MR cancer molecular imaging with a small molecular peptide targeted Gd-DOTA monoamide complex as a targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma. We performed the experiment of evaluating the effectiveness of the agent for non-invasive detection of prostate tumor with MRI in a mouse orthotopic PC-3 prostate cancer model. The targeted contrast agent was effective to produce significant tumor contrast enhancement at a low dose of 0.03 mmol Gd/kg. The peptide targeted MRI contrast agent is promising for MR molecular imaging of prostate tumor.

To demonstrate MR cancer molecular imaging with a small peptide targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma in a mouse prostate cancer model.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human cancer cells in mitosis. The phenanthridine PJ-34 was the most potent molecule. Declustering of extra-centrosomes causes mitotic failure and cell death in multi-centrosomal cells. Most solid human cancers have high occurrence of extra-centrosomes. The activity of PJ-34 was documented in real-time by confocal imaging of live human breast cancer MDA-MB-231 cells transfected with vectors encoding for fluorescent &gamma;-tubulin, which is highly abundant in the centrosomes and for fluorescent histone H2b present in the chromosomes. Aberrant chromosomes arrangements and de-clustered &gamma;-tubulin foci representing declustered centrosomes were detected in the transfected MDA-MB-231 cells after treatment with PJ-34. Un-clustered extra-centrosomes in the two spindle poles preceded their cell death. These results linked for the first time the recently detected exclusive cytotoxic activity of PJ-34 in human cancer cells with extra-centrosomes de-clustering in mitosis, and mitotic failure leading to cell death. According to previous findings observed by confocal imaging of fixed cells, PJ-34 exclusively eradicated cancer cells with multi-centrosomes without impairing normal cells undergoing mitosis with two centrosomes and bi-focal spindles. This cytotoxic activity of PJ-34 was not shared by other potent PARP1 inhibitors, and was observed in PARP1 deficient MEF harboring extracentrosomes, suggesting its independency of PARP1 inhibition. Live confocal imaging offered a useful tool for identifying new molecules eradicating cells during mitosis.

The cytotoxic activity of the phenanthridine PJ-34 in cancer cells undergoing mitosis was documented in real time by live confocal imaging. PJ-34 eradicated human breast cancer MDA-MB-231 cells harboring extra-centrosomes in mitosis. Unlike normal bi-focal mitosis, the extra-centrosomes were not clustered in the two spindle poles in the presence of PJ-34.

Anormal Mitoz ile İlişkili Hücre Ölümü Canlı Kanser Hücreleri Konfokal Görüntüleme Uyacakları

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model İnsan Meme Hormon Eylem Eğitim için

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that self-renew while giving rise to more differentiated progeny. Understanding and targeting these cancer stem cells in breast cancer, which may possess enhanced chemo- and radio-resistance compared to the non-stem tumor bulk, has become an important research area. Markers including CD44, CD24, and ALDH activity can be assessed using fluorescence activated cell sorting (FACS) to prospectively isolate cells that display enhanced tumorigenicity when implanted into immunocompromised mice: the mammosphere assay has also become widely used for its ability to retrospectively identify sphere-forming cells that develop from single stem cell-like clones. Here we outline approaches for the appropriate culturing of mammospheres from cell lines or primary patient samples, their passaging, and calculations to estimate sphere forming efficiency (SFE). First we discuss key considerations and pitfalls in the appropriate planning and interpretation of mammosphere experiments.

Floating mammosphere assays can investigate the subset of stem-like breast cancer cells that survive in suspension conditions and show enhanced tumorigenesis when implanted into mice. This protocol provides a convenient in vitro measure of sphere-forming ability, a proxy for in vivo tumorigenesis, while facilitating analysis of the stem-associated transcriptional landscape.

İnsan Göğüs Kanseri dokuları ve hücre hatlarından gelen Mammosphere Oluşumu Testi

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that ...