هذه الطريقة، بروتوكول تحويل قابل للاستنساخ لRenkiella parvula، يمكن أن تساعد في الإجابة على الأسئلة في مجال الجينوم النباتي المقارن والوظيفي، وخاصة الدراسات التي تحقق التكيفات النباتية إلى بيئات قاسية. هذه التقنية تمكن من إجراء تحقيقات في الوظائف الروتينية في Parvula شرنكيلا على extremophyte تكييفها لضغوط الملح متعدد الأيونات. كما أنه يتيح إجراء دراسات مقارنة تنظر أيضا إلى قريبها، الأم أربيدبسيس ثاليانا.
مقارنة شرنكيلا Parvula مع Aribidopsis ثاليانا يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في الاختلافات في تنظيم الجينات والوظيفة التي تمكن التكيف فريدة من الناحية الخاصة من Parvula شرنكيلا. بروتوكول التحول لعربيدوبسيس ثاليانة قد تم بالفعل راسخة. وتمكن هذه الطريقة الآن من إجراء دراسات مقارنة باستخدام نباتات شرنكيلا بارفولا المعدلة وراثيا.
عموما سوف الباحثون جديدة لهذه الطريقة النضال بسبب عادة المزهرة ومورفولوجيا ورقة من النباتات شرنكيلا Parvula التي تجعل التحول الفعال باستخدام تراجع النباتات وكذلك اختيار التحويلات الحقيقية صعبة. للبدء، استخدم مسواك مبللة لنقل حوالي 20 إلى 25 بذور S.Parvula على التربة الرطبة. ثم تقسيم البذور في أربع درجات مئوية لمدة خمسة إلى سبعة أيام.
بعد التقسيم الطبقي، والعودة البذور إلى غرفة النمو لمدة سبعة إلى 10 أيام. مرة واحدة وقد انبت جميع الشتلات، وترك شتلة واحدة فقط في كل من الزوايا الأربع وفي وسط الأواني. تنمو النباتات لمدة ثمانية إلى 10 أسابيع في غرفة النمو حتى زهرة.
في يوم التحول، حدد النباتات S.Parvula وفقا لبروتوكول النص. استخدام ملقط ومقص صغير لإزالة أي ملقح infloresences التي تتطور بالفعل إلى السيليك. بعد النباتات جاهزة، وإعداد حل تسلل البكتيريا الزراعية.
بعد هذا، تراجع إنفلورس S.Parvula في حل تسلل البكتيريا الزراعية لمدة 20 ثانية. يظهر هنا هو المرحلة الأولى من النباتات التي يمكن استخدامها للتحول، طالما يتم إزالة السيليك المتقدمة بالفعل قبل التحول، يمكن استخدام النباتات القديمة مع المزيد من الزهور. بعد التحول، ووضع زهرة انخفض النباتات أفقيا في الصواني النظيفة مع القباب لتغطية النباتات.
ثم ضع النباتات في غرفة نمو مظلمة لمدة يوم إلى يومين. إعادة النباتات إلى وضع مستقيم ونقلها إلى غرفة النمو. في الأسبوع التالي، مراقبة فيورسنس انخفض.
بعد عشرة أيام من أول تراجع الأزهار، سوف تستمر نباتات S.Parvula في إنتاج رواسب وسيليك جديدة. ويمكن إجراء جولة ثانية من تراجع الأزهار لمزيد من تحويل النهايات الناشئة حديثا. تنمو النباتات حتى تنضج البذور، وحصاد البذور حوالي 21 أسبوعا.
جفف البذور لمدة أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع في درجة حرارة الغرفة في حاوية محكمة الإغلاق مليئة بالجفاف. زرع بذور T واحد وفقا لبروتوكول النص. تنمو النباتات حتى أول اثنين إلى ثلاثة أوراق حقيقية تتطور.
لأداء الاختيار الأول لمقاومة مبيدات الأعشاب، تمييع مبيدات الأعشاب الأمونيوم الغلوفوزية ورذاذه على الشتلات. تغطية الشتلات مع القباب بين عشية وضحاها. ضع الصواني مرة أخرى إلى غرفة النمو، وأزل القبة.
انتظر حتى يتم اختيار معظم الشتلات من قبل مبيد الأعشاب. لبدء الاختيار الثاني، تحديد النباتات التي البقاء على قيد الحياة بعد رش ثلاث إلى أربع مرات مع حل BASTA. بعد زراعة النباتات لمدة أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع أخرى، حدد أكبر ورقة ناضجة على كل مصنع.
فرك المقبل سطح ورقة بلطف مع إصبع لإزالة طبقة الشمع. ثم ضع قطرة من محلول BASTA المخفف على الورقة. مراقبة الأوراق المعالجة مع حل BASTA لعلامات الذبول لمدة تصل إلى أسبوع واحد.
وأخيراً حدد النباتات مع يترك تتأثر قطرات BASTA لمزيد من التحليل. في هذا البروتوكول، تم تحويل S.Parvula مع البكتيريا الزراعية باستخدام طريقة تراجع الأزهار. وأدت العدوى بالبكتيريا الزراعية إلى إجهاض بعض الزهور.
ومع ذلك واصلت النباتات S.Parvula لإنتاج الزهور الجديدة بعد أول غمس زهرة، ويمكن أن تتحول مرة أخرى. باستخدام اختبارات الرذاذ والإسقاط BASTA، يمكن تحديد التحويلات الإيجابية الحقيقية بدقة. ويمكن تقليل عدد العينات التي تم اختبارها باستخدام تأكيد PCR.
في حين أن هذه الطريقة تشبه تحول عربيدوبسيس ثاليانا، من المهم أن نتذكر الاختلافات في النمو ومورفولوجيا شرنكيلا بارفولا. تعديل البروتوكول لعكس هذه الاختلافات أمر بالغ الأهمية لنجاح التحويل. يمكن أن تساعد هذه التقنية الباحثين على استكشاف تطور الاختلافات الجينومية التي تؤدي إلى تعديلات متعددة على إجهاد الملح في نموذج extremophyte ، شرنكيلا بارفولا.
الجمع بين هذه التقنية مع المعلومات عن وظائف Aradopsis ثاليانا، مصنع آخر يرتبط ارتباطا وثيقا شرنكيلا Parvula. يمكن للباحثين دراسة الاختلافات في التنظيم والوظائف التي هي اثنين من هياكل متميزة بين هذين النوعين. خلال عملية التحول ، من المهم أن تحتوي على جميع حل تسلل البكتيريا الزراعية في حاويات قابلة للمعالجة التلقائية.
تعقيم والتخلص بأمان جميع المواد التي جاءت في اتصال مع البكتيريا الزراعية بما في ذلك القفازات، نصائح ماصة الماكرو، والمناشف الورقية.
