Schrenkiella parvula için tekrarlanabilir bir dönüşüm protokolü olan bu yöntem, özellikle sert ortamlara bitki adaptasyonlarını araştıran çalışmalar olmak üzere, bitki karşılaştırmalı ve fonksiyonel genomlama alanındaki soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu teknik, schrenkiella parvula'da çoklu iyon tuz gerilmelerine uyarlanmış ekstremofit üzerindeki rutin fonksiyonların araştırılmasını sağlar. Aynı zamanda yakın akrabası, anne ebeveyn Aribidopsis Thaliana bakar karşılaştırmalı çalışmalar sağlar.
Schrenkiella Parvula'nın Aribidopsis Thaliana ile karşılaştırılması, Schrenkiella parvulanın benzersiz adaptasyonunu sağlayan gen regülasyonu ve fonksiyonundaki varyanslar hakkında fikir verebilir. Arabidopsis Thaliana için dönüşüm protokolü zaten iyi kurulmuş. Yöntem şimdi transgenik Schrenkiella Parvula bitkileri kullanarak karşılaştırmalı çalışmalar sağlar.
Genellikle bu yönteme yeni araştırmacılar çiçekli alışkanlığı ve bir flora daldırma kullanarak etkili dönüşüm yapmak Schrenkiella Parvula bitkilerin yaprak morfolojisi yanı sıra gerçek dönüştürücülerin seçimi zor nedeniyle mücadele edecek. Başlamak için, ıslak toprak üzerine yaklaşık 20-25 S.Parvula tohumu aktarmak için ıslak bir kürdan kullanın. Sonra beş ila yedi gün boyunca dört derece santigrat tohumları tabakalı.
Tabakalaşmadan sonra tohumları 7-10 gün boyunca büyüme odasına geri döndürün. Tüm fideler çimlendikten sonra, her dört köşede ve tencerenin ortasına sadece bir fide bırakın. Onlar çiçek kadar büyüme odasında sekiz ila 10 hafta boyunca bitkiler büyümek.
Dönüşüm gününde, metin protokolüne göre S.Parvula tesislerini seçin. Zaten siliques içine gelişmekte olan herhangi bir tozlaşmış çiçeklenme kaldırmak için forceps ve küçük makas kullanın. Bitkiler hazır olduktan sonra, bir agrobacterium infiltrasyon çözeltisi hazırlayın.
Bundan sonra, S.Parvula çiçeklenmesini 20 saniye boyunca agrobacterium infiltrasyon çözeltisi içine daldırın. Burada gösterilen dönüşüm için kullanılabilecek bitkilerin en erken aşamasıdır, sürece zaten gelişmiş siliques dönüşüm önce kaldırılır, daha fazla çiçek ile eski bitkiler kullanılabilir. Dönüşümden sonra, çiçekleri yatay olarak kubbeli temiz tepsilere koyarak bitkileri kaplayın.
Sonra bir ila iki gün için karanlık bir büyüme odasında bitkiler yerleştirin. Dik bir konuma bitkiler dönün ve büyüme odasına aktarın. Takip eden hafta, daldırma çiçeklenmeleri izleyin.
İlk çiçek daldırma on gün sonra, S.Parvula bitkiler yeni çiçeklenme ve siliques üretmeye devam edecektir. Çiçek daldırma ikinci bir tur daha yeni ortaya çıkan çiçeklenme dönüştürmek için yapılabilir. Tohumlar olgunlanıncaya kadar bitkileri büyütün ve tohumları yaklaşık 21 hafta hasat edin.
Kurutucularla dolu hava geçirmez bir kapta oda sıcaklığında tohumları 2-3 hafta kurulayın. Metin protokolüne göre T bir tohumlarını ekin. İlk 2-3 gerçek yaprakları geliştirmek kadar bitkiler büyümek.
Herbisit direnci için ilk seçimi gerçekleştirmek için, seyreltmek glufosinat amonyum herbisit ve fideler üzerine sprey. Fidelerin üzerini bir gecede kubbelerle kaplayın. Tepsileri büyüme odasına geri koy ve kubbeyi çıkar.
Fidelerin çoğu herbisit tarafından seçilene kadar bekleyin. İkinci seçime başlamak için, BASTA çözeltisi ile üç ila dört kez püskürtülen bitkilerin belirlenmesi. Iki ila üç hafta daha bitkiler büyüdükten sonra, her bitki üzerinde en büyük olgun yaprak seçin.
Sonraki balmumu tabakası kaldırmak için bir parmak ile yavaşça yaprak yüzeyine ovmak. Daha sonra yaprak üzerine seyreltilmiş BASTA çözeltisi bir damla yerleştirin. Bir haftaya kadar solma belirtileri için BASTA çözeltisi ile tedavi edilen yaprakları izleyin.
Son olarak daha fazla analiz için BASTA damla etkilenmemiş yaprakları ile bitkiler seçin. Bu protokolde S.Parvula çiçek daldırma yöntemi ile agrobacterium ile dönüştürülmüştür. Agrobacterium ile enfeksiyon bazı çiçekler kürtaj ile sonuçlandı.
Ancak S.Parvula bitkileri ilk çiçek daldırma sonra yeni çiçekler üretmeye devam etti ve tekrar dönüştürülebilir. BASTA sprey ve damla testleri kullanılarak, gerçek pozitif transformatanlar doğru bir şekilde tanımlanabilir. PCR onayı kullanılarak test edilen numune sayısı azaltılabilir.
Bu yöntem Arabidopsis Thaliana dönüşümüne benzer olsa da, Schrenkiella Parvula'nın büyüme ve morfolojisindeki farklılıkları hatırlamak önemlidir. Protokolün bu farklılıkları yansıtacak şekilde değiştirilmesi, başarılı dönüşüm için çok önemlidir. Bu teknik, araştırmacıların ekstremofit modeli Schrenkiella Parvula'da birden fazla tuz stresi adaptasyonuna yol açan genomik varyasyonların evrimini keşfetmelerine yardımcı olabilir.
Aradopsis Thaliana, schrenkiella Parvula ile yakından ilgili başka bir bitki fonksiyonları hakkında bilgi ile bu tekniği birleştirerek. Araştırmacılar, bu iki tür arasında iki farklı yapı olduğunu yönetmelik ve işlevleri varyasyonları inceleyebilirsiniz. Dönüşüm işlemi sırasında, otoklavlanabilir kaplarda tüm agrobacterium infiltrasyon çözümiçeren önemlidir.
Eldivenler, makro pipet uçları ve kağıt havlular da dahil olmak üzere agrobacterium ile temas eden tüm malzemeleri sterilize edin ve güvenli bir şekilde atın.
