Cette méthode, un protocole de transformation reproductible pour schrenkiella parvula, peut aider à répondre aux questions dans le domaine de la genoming comparative et fonctionnelle des plantes, en particulier les études sur les adaptations végétales à des environnements difficiles. Cette technique permet d’investigations des fonctions courantes dans la parvula de Schrenkiella sur l’extremophyte adapté aux contraintes de sel multi-ion. Il permet également des études comparatives qui examine également son proche parent, le parent mère Aribidopsis Thaliana.
La comparaison de Schrenkiella Parvula avec Aribidopsis Thaliana peut donner un aperçu des variances dans la régulation et la fonction génétiques qui permettent l’adaptation unique de Schrenkiella parvula. Le protocole de transformation d’Arabidopsis Thaliana est déjà bien établi. La méthode permet maintenant des études comparatives à l’aide de plantes transgéniques Schrenkiella Parvula.
En général, les chercheurs nouveaux à cette méthode auront du mal en raison de l’habitude de floraison et la morphologie des feuilles des plantes Schrenkiella Parvula qui rendent la transformation efficace à l’aide d’un plongeon de la flore ainsi que la sélection de véritables transformateurs difficiles. Pour commencer, utilisez un cure-dent humide pour transférer environ 20 à 25 graines de S.Parvula sur un sol humide. Ensuite, stratifier les graines à quatre degrés Celsius pendant cinq à sept jours.
Après stratification, remettre les graines dans la chambre de croissance pendant sept à dix jours. Une fois que tous les semis ont germé, ne laisser qu’un seul semis dans chacun des quatre coins et au centre des pots. Faire pousser les plantes de huit à dix semaines dans la chambre de croissance jusqu’à ce qu’elles fleurissent.
Le jour de la transformation, sélectionnez les plantes S.Parvula selon le protocole de texte. Utilisez des forceps et de petits ciseaux pour éliminer les inflorescences pollinisée qui se développent déjà en siliques. Une fois les plantes prêtes, préparez une solution d’infiltration d’agrobactéries.
Après cela, tremper l’inflorescence de S.Parvula dans la solution d’infiltration d’agrobactéries pendant 20 secondes. Montré ici est la première étape des plantes qui peuvent être utilisés pour la transformation, aussi longtemps que les siliques déjà développés sont enlevés avant la transformation, les plantes plus anciennes avec plus de fleurs peuvent être utilisés. Après la transformation, placez les plantes trempées horizontalement dans des plateaux propres avec des dômes pour couvrir les plantes.
Placez ensuite les plantes dans une pièce de croissance sombre pendant un à deux jours. Remettre les plantes en position verticale et les transférer dans la salle de croissance. La semaine suivante, surveillez les inflorescences trempées.
Dix jours après la première trempette florale, les plantes S.Parvula continuent de produire de nouvelles inflorescences et siliques. Une deuxième série de trempette florale peut être effectuée pour transformer davantage les inflorescences émergentes. Faire pousser les plantes jusqu’à ce que les graines mûrissent et récolter les graines environ 21 semaines.
Sécher les graines de deux à trois semaines à température ambiante dans un contenant hermétique rempli de dessiccants. Plantez les graines T one selon le protocole de texte. Faire pousser les plantes jusqu’à ce que les deux à trois premières vraies feuilles se développent.
Pour effectuer la première sélection de résistance aux herbicides, diluer l’herbicide glufosinate ammonium et le pulvériser sur les semis. Couvrir les semis avec les dômes pendant la nuit. Remettre les plateaux à la salle de croissance et retirer le dôme.
Attendez que la plupart des semis soient sélectionnés par l’herbicide. Pour commencer la deuxième sélection, identifiez les plantes qui survivent après avoir été pulvérisées trois à quatre fois avec la solution BASTA. Après avoir fait pousser les plantes pendant deux à trois semaines de plus, choisissez la plus grande feuille mature de chaque plante.
Frottez ensuite doucement la surface de la feuille avec un doigt pour enlever la couche de cire. Ensuite, placez une goutte de la solution BASTA diluée sur la feuille. Surveillez les feuilles traitées avec la solution BASTA pour les signes de flétrissement jusqu’à une semaine.
Sélectionnez enfin les plantes dont les feuilles ne sont pas affectées par les gouttes BASTA pour une analyse plus approfondie. Dans ce protocole, S.Parvula a été transformé avec l’agrobactérie utilisant une méthode florale de trempette. L’infection par l’agrobactérie a entraîné l’avortement de certaines fleurs.
Cependant, les plantes de S.Parvula ont continué à produire de nouvelles fleurs après la première floraison, et pourraient être transformées à nouveau. À l’aide des tests de pulvérisation et de drop BASTA, de véritables transformateurs positifs peuvent être identifiés avec précision. Le nombre d’échantillons testés à l’aide de la confirmation PCR peut être réduit.
Bien que cette méthode soit similaire à la transformation d’Arabidopsis Thaliana, il est important de se rappeler les différences de croissance et de morphologie de Schrenkiella Parvula. La modification du protocole pour tenir compte de ces différences est essentielle à la réussite de la transformation. Cette technique pourrait aider les chercheurs à explorer l’évolution des variations génomiques conduisant à de multiples adaptations au stress saline dans le modèle extremophyte, Schrenkiella Parvula.
Combinant cette technique avec les informations sur les fonctions d’Aradopsis Thaliana, une autre plante étroitement liée à Schrenkiella Parvula. Les chercheurs peuvent étudier les variations de la régulation et des fonctions qu’il s’est passé de deux structures distinctes entre ces deux espèces. Pendant le processus de transformation, il est important de contenir toute la solution d’infiltration d’agrobactéries dans des contenants autoclavés.
Stérilisez et jetez en toute sécurité tous les matériaux qui sont entrés en contact avec l’agrobactérie, y compris les gants, les pointes de pipette macro et les serviettes en papier.
