この方法は、シュレンキエラパルヴラの再現可能な変換プロトコルであり、植物の比較および機能性の分野における質問、特に過酷な環境への植物適応を調査する研究に答えることができます。この技術により、多イオン塩ストレスに適応した極端のシュレンキエラパルヴラのルーチン機能の調査が可能になります。また、その近親アリビドプシス・タリアナを見る比較研究を可能にします。
シュレンキエラ・パルヴラとアリビドプシス・タリアナを比較すると、シュレンキエラ・パルヴラのユニークな適応を可能にする遺伝子調節および機能の差異に関する洞察を提供することができます。シロイヌナズナの変換プロトコルはすでに確立されています。この方法は現在、トランスジェニックシュレンキエラパルヴラ植物を用いた比較研究を可能にする。
一般的に、この方法に新しい研究者は、開花習慣と植物の葉の形態と植物のディップを使用して効果的な変換を行うだけでなく、真の形質転換体の選択のために苦労します。まず、濡れた爪楊枝を使用して、約20〜25 S.Parvula種子を湿った土壌に移します。その後、5〜7日間摂氏4度で種子を層化します。
成層後、7〜10日間、成長室に種子を戻します。すべての苗が発芽したら、4つのコーナーのそれぞれと鍋の中心に1つの苗を残します。彼らが花を咲くまで、成長室で8〜10週間植物を成長させます。
変換の日に、テキストプロトコルに従ってS.Parvula植物を選択します。鉗子と小さいはさみを使用して、すでにシリケに発達している受粉した花序を取り除く。植物の準備ができたら、アグロバクテリウム浸潤液を調製します。
この後、S.Parvulaの花序をアグロバクテリウム浸潤液中に20秒間浸します。ここに示されているのは、変換に使用できる植物の最も初期の段階であり、既に発達したシリケイが変換前に除去されている限り、より多くの花を持つ古い植物を使用することができる。変換後、花を浸した植物を、植物を覆うドーム付きのきれいなトレイに水平に置きます。
その後、1〜2日間暗い成長室に植物を配置します。工場を直立した位置に戻し、成長室に移します。次の週に、浸漬花序を監視します。
最初の花のディップの10日後、S.Parvula植物は新しい花序とシリケを生産し続けます。花のディップの第2ラウンドは、新たに出現する花序をさらに変えるために行うことができます。種子が成熟するまで植物を育て、約21週間の種子を収穫します。
乾燥剤で満たされた気密容器の室温で2〜3週間種子を乾燥させます。テキストプロトコルに従ってT 1シードを植えます。最初の2〜3本の真の葉が発達するまで植物を育てます。
除草剤耐性の最初の選択を行うために、グルフォシネート除草剤アンモニウムを希釈し、苗にスプレーします。一晩ドームで苗を覆います。トレイを成長室に戻し、ドームを取り外します。
苗木のほとんどが除草剤によって選択されるまで待ちます。2番目の選択を開始するには、BASTA溶液で3〜4回スプレーされた後に生き残る植物を特定します。さらに2〜3週間植物を栽培した後、各植物で最大の成熟した葉を選択します。
次に、葉の表面を指でやさしくこすり、ワックス層を取り除きます。その後、希釈されたBASTA溶液を葉の上に置きます。BASTA溶液で処理された葉を監視し、最大1週間しおれる兆候を確認します。
最後に、BASTAドロップの影響を受けない葉を持つ植物を選択して、さらなる分析を行います。このプロトコルでは、S.Parvulaは花のディップ法を用いてアグロバクテリウムで変換された。アグロバクテリウムの感染は、いくつかの花の中絶をもたらした。
しかし、S.Parvulaの植物は、最初の花の浸漬後に新しい花を生産し続け、再び変換することができました。BASTAのスプレーおよび低下テストを使用して、真陽性の形質転換体を正確に識別することができる。PCR確認を使用して試験したサンプル数を減らすことができます。
この方法はシロイヌナズナの変容に似ていますが、シュレンキエラ・パルヴラの成長と形態の違いを覚えておくことが重要です。変換を成功させるには、これらの違いを反映するようにプロトコルを変更することが重要です。この技術は、研究者が外肢モデルシュレンキエラ・パルヴラの複数の塩ストレス適応につながるゲノム変動の進化を探求するのに役立つ可能性がある。
この技術と、シュレンキエラ・パルヴラと密接に関連する別の植物であるアラドプシス・タリアナの機能に関する情報を組み合わせます。研究者は、これら2つの種の間の2つの異なる構造である調節と機能のバリエーションを研究することができます。変換プロセスの間、オートクレーブ可能な容器内にすべてのアグロバクテリウム浸潤液を含めることが重要である。
手袋、マクロピペットチップ、ペーパータオルなど、アグロバクテリウムに接触したすべての材料を殺菌し、安全に廃棄してください。
