Этот метод, воспроизводимый протокол трансформации для Schrenkiella parvula, может помочь ответить на вопросы в области сравнительного и функционального геноминга растений, особенно исследования, исследующие адаптацию растений к суровым условиям. Этот метод позволяет исследования рутинных функций в Schrenkiella parvula на экстремофите адаптированы к многоионные соли стрессов. Он также позволяет сравнительные исследования, которые также смотрит на его близкий родственник, мать родителей Aribidopsis Талиана.
Сравнение Schrenkiella Parvula с Aribidopsis Thaliana может дать представление о дисперсиях в регуляции генов и функции, которые позволяют уникальную адаптацию schrenkiella parvula. Протокол трансформации для Arabidopsis Thaliana уже хорошо зарекомендовал себя. Метод теперь позволяет сравнительные исследования с использованием трансгенных растений Schrenkiella Parvula.
Вообще исследователи, новые для этого метода будет бороться из-за цветения привычки и морфологии листьев schrenkiella Parvula растений, которые делают эффективную трансформацию с помощью флоры падения, а также выбор истинных трансформаторов трудно. Для начала используйте влажную зубочистку, чтобы перенести от 20 до 25 семян S.Parvula на влажную почву. Затем стратифицировать семена при четырех градусах по Цельсию в течение пяти-семи дней.
После стратификации верните семена в камеру роста на 7-10 дней. После того, как все саженцы проросли, оставьте только один рассаду в каждом из четырех углов и в центре горшков. Выращивать растения в течение восьми-10 недель в камере роста, пока они не цветут.
В день трансформации выберите растения S.Parvula в соответствии с текстовым протоколом. Используйте типсы и маленькие ножницы, чтобы удалить любые опыленные соцветия, которые уже развиваются в силики. После того, как растения будут готовы, приготовьте раствор инфильтрации агробактерий.
После этого окуните соцветие S.Parvula в раствор инфильтрации агробактерий в течение 20 секунд. Здесь показана самая ранняя стадия растений, которые могут быть использованы для преобразования, до тех пор, как уже разработанные силики удаляются до преобразования, старые растения с большим количество цветов могут быть использованы. После преобразования, поместите цветок окунутые растения горизонтально в чистые лотки с куполами, чтобы покрыть растения.
Затем поместите растения в темную комнату роста в течение одного-двух дней. Верните растения в вертикальное положение и перенесите их в комнату роста. На следующей неделе, контролировать окунутые соцветия.
Через десять дней после первого цветочного падения, S.Parvula заводы будут продолжать производить новые соцветия и силики. Второй раунд цветочного погружения может быть выполнен для дальнейшего преобразования вновь возникающих соцветий. Выращиваем растения до тех пор, пока семена не созреют, и урожай семян около 21 недели.
Сухие семена в течение двух-трех недель при комнатной температуре в герметичном контейнере, наполненном desiccants. Завод T один семена в соответствии с текстовым протоколом. Выращивайте растения до тех пор, пока не разовьются первые два-три истинных листа.
Для выполнения первого отбора для устойчивости к гербицидам, разбавить glufosinate гербицид аммония и распылить его на рассаду. Обложка саженцы с куполами на ночь. Положите лотки обратно в комнату роста, и удалить купол.
Подождите, пока большинство саженцев будут отобраны гербицидом. Чтобы начать второй отбор, определить растения, которые выживают после распыления три-четыре раза с раствором BASTA. После выращивания растений в течение двух-трех недель, выберите самый большой зрелый лист на каждом заводе.
Затем аккуратно протрите поверхность листа пальцем, чтобы удалить восковый слой. Затем поместите каплю разбавленного раствора BASTA на лист. Мониторинг листьев, обработанных раствором BASTA для признаков увядания на срок до одной недели.
Наконец, выберите растения с листьями, не затронутыми каплями BASTA для дальнейшего анализа. В этом протоколе, S.Parvula был преобразован с агробактерией с помощью метода цветочного погружения. Инфекция агробактерией привела к аборту некоторых цветов.
Однако заводы S.Parvula продолжали производить новые цветы после первого погружения цветка, и могли быть преобразованы снова. Используя тесты на спрей и падение BASTA, можно точно определить истинные положительные трансформаторы. Количество образцов, протестированных с использованием подтверждения ПЦР, может быть уменьшено.
Хотя этот метод похож на трансформацию Arabidopsis Thaliana, важно помнить различия в росте и морфологии Шренкиелла Парвула. Изменение протокола с учетом этих различий имеет решающее значение для успешной трансформации. Этот метод может помочь исследователям исследовать эволюцию геномных вариаций, ведущих к множественным адаптациям стресса соли в модели экстремофита, Schrenkiella Parvula.
Сочетание этой техники с информацией о функциях Aradopsis Thaliana, другого растения, тесно связанного с Schrenkiella Parvula. Исследователи могут изучить различия в регулировании и функции, что это две различные структуры между этими двумя видами. В процессе преобразования важно содержать все растворы инфильтрации агробактерий в автоклавируемых контейнерах.
Стерилизовать и безопасно отказаться от всех материалов, которые в контакте с агробактериями, включая перчатки, макро пипетки советы, и бумажные полотенца.
