الطريقة التي نستخدمها هنا يمكن أن تساعد على حزمة oligonucleotide مع نانوتيوب الكربون واحد الجدار، وهو نوع جديد من الجسيمات النانوية لتسليم المخدرات. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أكثر كفاءة تسليم الأدوية oligonucleotide في الخلايا في الجسم الحي. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى البحث في المايلوما المتعددة ، لأنها أدخلت جسيمات نانوية لتحسين تسليم أدوية oligonucleotide.
من خلال هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في علاج المايلوما المتعددة. ويمكن أيضا أن تطبق على الأمراض الأخرى ومترافقة مع غيرها من البضائع، مثل البروتينات والجزيئات الصغيرة. أولاً، اخلطي مليغراماً واحداً من الأنابيب النانوية الكربونية ذات الجدار الواحد، وخمس ملليغرام من قنين DSPE-PEG 2000، وخمس ملليلترات من المياه الخالية من النوى المعقمة في قارورة زجاجية من 20 ملليلتر.
سونيكات القارورة في sonicator حمام مائي على مستوى الطاقة من 90 واط لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد سونيكيشن، الطرد المركزي القارورة في 24، 000 مرات ز لمدة ست ساعات. ثم جمع حل فائقة.
إضافة ملليلتر واحد من حل نانوتيوب الكربون واحد الجدار إلى 100 كيلودالتون الجزيئية خفض الوزن المركزي جهاز تصفية تليها أربعة ملليلتر من المياه الخالية من النوى معقمة. جهاز طرد مركزي لمدة 10 دقائق في 4،000 ز مرات في درجة حرارة الغرفة لإزالة أمين الزائدة. إضافة 0.5 ملليغرام من Sulfo-LC-SPDP إلى 450 ميكرولترات من الأنابيب النانوية الكربونية أحادية الجدار ذات الجدار الواحد.
ثم إضافة 50 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني 10x، واحتضان لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أضف خليط التفاعل إلى جهاز تصفية الطرد المركزي للوزن الجزيئي 100 كيلودالتون، يليه أربعة ملليلترات من المياه الخالية من النوى. الطرد المركزي العينة لمدة 10 دقائق في 4،000 ز مرات في درجة حرارة الغرفة لإزالة الزائدة Sulfo-LC-SPDP.
جمع سولفو-LC-SPDP-معالجة أمين واحد جدار الكربون نانوتيتوب حل اليسار في التصفية، وتمييع مع 500 ميكرولترات من قبل أعدت المضادة لملا 1-Cy3 الحل. ثم احتضان العينة في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. لتحقيق أفضل النتائج للمقارنة، وترتيب عشوائيا 14 الفئران في مجموعات تجريبية أو السيطرة مع سبعة في كل مجموعة، وبنفس نسبة الذكور إلى الإناث في كل مجموعة.
المقبل، وتنظيف مقاعد البدلاء عملية وتعقيمه مع 70٪ إيثيل الكحول. استخدم مصباح تدفئة لتدفئة أحد الفئران لمساعدة الوريد الذيل على الظهور. تقييد الماوس بشكل صحيح مع حقن الذيل كبحة.
حقن MM.1S-لوك/ mCherry الخلايا في 50 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني من خلال الوريد الذيل. اضغط على موقع الحقن مع مسحة الكحول لمدة 30 ثانية. ثم وضع علامة على الفأرة المحقونة وإعادته إلى قفص نظيف.
في اليوم السابع، بعد حقن الخلية MM1S، حقن 50 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني يحتوي على أنبوب نانوي الكربون واحد الجدار المضادة لملا 1 في الوريد الذيل من الماوس. ثم اضغط على موقع الحقن مع مسحة الكحول لمدة 30 ثانية. مراقبة نزيف المحلية على الذيل والسلوك العام للماوس لمدة دقيقة واحدة، ومن ثم إعادته إلى قفص نظيف.
مراقبة جميع الفئران حقن مرة أخرى قبل العودة القفص إلى الرف للتأكد من أن يتم التسامح مع الحقن بشكل جيد. وزن كل فأر قبل تشريح. جمع الدم المحيطي من القلب لإجراء فحص كامل لعدد الدم الذي يقوم به جهاز عداد خلايا الدم.
بعد ذلك، جمع أنسجة نخاع العظام والطحال والعقدة الليمفاوية والكلى والأنسجة مع الانبثاث مرئية. استخراج الحمض النووي الريبي والبروتين من عينات نخاع العظام. إصلاح جميع الأنسجة المتبقية في formalin.
بعد 24 ساعة من التثبيت، غمر عينات العظام في محلول EDTA 0.5 مولر لمدة خمسة أيام للتخويل. ثم تزج جميع العينات في 75٪ إيثيل الكحول للتخزين على المدى الطويل. أظهرت نتائج QRT PCR أن الحمض النووي مضادة لـ MALAT1 gapmeR أسقطت تعبير MALAT1 ومستحثة بمضادات المبرمجين بشكل كبير في خلايا H929 وMM.1S.
تم تسليم أنبوب نانوي كربوني أحادي الجدار مضاد لملا 1-Cy3 في نواة خلايا MM ، وقمع بشكل كبير مستوى MALAT1 الداخلي في كل من خلايا H929 وMM.1S. إن قابلية الخلية BMEC-1 للبقاء ليس لها فرق كبير بعد علاج أنبوب الكربون النانوية المضاد لملا 1-Cy3 أو التحكم في جرعات ونقاط زمنية مختلفة. وهذا يشير إلى أن سمية أحادية الجدار الكربون نانوتيتوب المضادة ل-مالات1-Cy3 له سمية محدودة ومقبولة للخلايا الطبيعية في جرعة عالية.
تم إنشاء نموذج فأرة نشرها MM الإنسان لتقييم آثار العلاج من الكربون أحادي الجدار نانوتيتوب مضادة لملا 1 في الجسم الحي. كانت إشارات لوسيفيرون للفئران في مجموعة المعالجة المضادة لـ MALAT1 أحادية الجدار منخفضة بشكل ملحوظ مقارنة بالتحكم بعد 21 يومًا من العلاج. من هذه النتائج، تم التوصل إلى أن وحيد الجدار الكربون نانوتيتوب المضادة لـ MALAT1 العلاج عن طريق الحقن الوريدي يمكن أن تقدم oligos المضادة لملاط1 إلى الخلايا السرطانية بشكل فعال.
لم تلاحظ أي آثار جانبية كبيرة للعلاج ، مما يشير إلى أن حقنة نانوتيوب الكربون أحادية الجدار المضادة لملاT1 هي علاج آمن للفئران. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن تكوين جزيء الخلية سوف تؤثر على التسليم، والكفاءة، والتأثير العلاجي للعقاقير oligonucleotide. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل اقتران البروتينات أو الجزيئات الصغيرة من أجل الإجابة على أسئلة إضافية.
مثل استخدام الأنابيب النانوية الكربونية ذات الجدار الواحد لتسليم أدوية أخرى.
