يسمح هذا البروتوكول الآلي بإعداد الأنسجة المورينية باستخدام أنظمة روبوتية تستخدم بشكل روتيني في معالجة العينات البشرية وتضمينها، مما يزيد بشكل كبير من جودة العينات. وتتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها تقلل من عدد المتغيرات المنهجية وتحسن من توحيد الخطوات الإجرائية. إثبات الإجراء، ستكون فرانشيسكا بوغيو.
فرانشيسكا بوغيو هي أخصائية في علم الأمراض تعمل في مختبري. تبدأ باستخدام ملاقط صغيرة لنقل عينات أنسجة القولون مورين ثابتة من formalin buffered محايدة، على لوحة عمل المقطع في طبق بيتري. استخدام مشرط معقم لقطع القولون إلى 0.2 إلى 0.3 شظايا سنتيمتر، واستخدام ملاقط لوضع قطعة واحدة في كل من ثلاث نصائح البلاستيك غير المجاورة جاحظ من شريط موجه البارافين تضمين.
ادفع الحواف الأربعة بعناية لإغلاق الكاسيت وأدخل الشبكة في إطار دعم بلاستيكي. ثم، تسمية الإطار الداعم لتحديد العينة ونقل الكاسيت إلى الشبكة. قبل ساعة واحدة من المعالجة، قم بتشغيل المعالج التلقائي.
عندما يشير الصك إلى أن البارافين قد ذاب، إدراج سلة معدنية يدويا في المعالج الآلي. عند إدراج كافة الكاسيتات، قم بإغلاق السلة وفتح غطاء المُسَوَل. أدخل السلة في السكن المخصص للمعالج واغلق غطاء المُعال.
استخدام شاشة اللمس على جهاز الكمبيوتر الصك لتحديد بروتوكول العمل اختيار تسلسل الحلول والتوقيت ودرجة الحرارة، ليتم تنفيذها وفقا للمخطط المنصوص عليها في الجدول. انقر على رمز الكمبيوتر المخصص لتعيين البروتوكول إلى المعوجة التي تحتوي على سلة الكاسيت، وانقر فوق زر البدء. عندما يؤكد الصك نهاية البروتوكول مع رمز مخصص ونبرة إنذار، فتح غطاء معوجة وإزالة السلة من المعالج.
قبل ساعة من تضمين الأنسجة ، قم بتشغيل تضمينها الآلي وانتظر حتى يذوب البارافين تمامًا كما هو موضح من قبل مقياس حرارة حمام البارافين على الجهاز. يمكنك نقل ما يصل إلى 32 كاسيت معالجة يدويًا من سلة المعالج إلى حامل التضمين وفتح غطاء المضمّن الرئيسي. استخدم شاشة اللمس للإشارة إلى النظام الروبوتي بأنه يتم إدخال حامل وفتح غطاء السكن المدخل.
أدخل ما يصل إلى أربعة رفوف في مسكن المدخل واغلق غطاء السكن المدخلي. ثم استخدم شاشة اللمس لبدء إجراء التضمين كما هو موضح في الجدول. عندما يؤكد الصك نهاية البروتوكول مع رمز مخصص، وإزالة رف منفذ وإغلاق غطاء تضمين الرئيسية.
ثم، نقل الكتل المضمنة من الرف إلى مربع تخزين. القولون تقصير، والتعبير القولوني من الجينات الموالية للالتهابات، وتستخدم على نطاق واسع المعلمات لتسجيل وجود كبريتات الصوديوم ديكستران أو التهاب DSS الناجمة. كما أن تسلل الخلايا الالتهابية إلى بروبريا اللمينا المعوية يعززه علاج DSS بشكل كبير.
H & E تلطيخ العينات غير المعالجة التي تتم معالجتها عن طريق التشغيل الآلي كما هو موضح، ويكشف عن عدد أقل من الخلايا الالتهابية المتسللة، والتعديلات الظهارية، والتغيرات في العمارة المخاطية مقارنة مع عينات من الحيوانات المعالجة DSS. ويمكن بالإضافة إلى ذلك جودة إعداد الأنسجة مورين وتضمينها التي تقوم بها الصكوك الآلية يمكن أن تؤكد من خلال التلطيخ المناعي لD20 و تلطيخ Trichrome مالوري. وتجدر الإشارة إلى أن المعالجة الآلية للعينات تتيح باستمرار تقييم نسبة أعلى من البارامترات النسيجية، مقارنة بالعينات التي تتم معالجتها بواسطة الطريقة اليدوية.
الحرص على إدراج الأنسجة بشكل صحيح في الشبكة لانتظار المعالج الآلي لتكون جاهزة، وانتظر البارافين أن تذوب تماما. يمكن استخدام هذه الطريقة لإجراء التحليل النسيجي لأي أنسجة مورين ، مع صفات العينات النسيجية البشرية التي سيتم استخدامها في نماذج murine من علماء الأمراض البشرية. وقد تم بالفعل هذه التقنية دراسة ناجحة لدراسة التهاب الأنسجة الالتهابية، وسوف تكون مفيدة لدراسة نماذج من سرطان المورين القولون والمستقيم.
كما أن بعض الكواشف المستخدمة في هذا البروتوكول خطرة، تذكر أن ترتدي دائما قفازات واقية، نظارات واقية ومعطف مختبر عند تنفيذ هذا الإجراء.
