Этот автоматизированный протокол позволяет гистопатологическо готовить ткани мурина с роботизированными системами, регулярно используемыми для обработки и встраивания образцов человека, что значительно повышает качество образцов. Основными преимуществами этого метода являются то, что он уменьшает количество методологических переменных и улучшает стандартизацию процедурных шагов. Демонстрация процедуры, будет Франческа Боггио.
Франческа Боггио - патологоанатом, работающая в моей лаборатории. Начните с использования небольших пинцетов для передачи фиксированных образцов ткани толстой кишки мурина из нейтрального буферного формалина, на секционую рабочую пластину в чашке Петри. Используйте стерильный скальпель, чтобы разрезать толстой кишки на 0,2 до 0,3 сантиметра фрагментов, и использовать пинцет, чтобы поместить один сегмент в каждом из трех не прилегающих пластиковых выступающие кончики ориентированного парафина встраивания кассеты.
Аккуратно нажмите четыре края, чтобы закрыть кассету и вставить сетку в пластиковую поддерживающую раму. Затем наклеить на нее вспомогательную рамку для идентификации образца и передачи кассеты в сетку. За час до обработки поверните автоматизированный процессор.
Когда прибор указывает на то, что парафин расплавился, вручную вставьте металлическую корзину в автоматизированный процессор. Когда все кассеты были вставлены, закройте корзину и откройте крышку реторты. Вставьте корзину в специальное корпус процессора и закройте крышку реторты.
Используйте сенсорный экран на приборной компьютере для определения рабочего протокола, определяя последовательность решений, сроки и температуру, которые должны быть реализованы в соответствии с схемой, представленной в таблице. Нажмите на специальный значок компьютера, чтобы назначить протокол на реторту, содержащую кассетную корзину, и нажмите кнопку "Пуск". Когда прибор подтвердит конец протокола выделенным значком и сигналом тревоги, откройте крышку реторты и удалите корзину из процессора.
За час до встраивания ткани включите автоматизированный встраиваемый прибор и подождите, пока парафин полностью расплавится, как указано на термометре парафиновой ванны на приборе. Вручную перенесите до 32 обработанных кассет из корзины процессоров в встраиваемую стойку и откройте крышку основного встраиваемого встраиваемого. Используйте сенсорный экран, чтобы сигнализировать роботизированной системе, что стойка вставляется и открыть крышку вставки жилья.
Вставьте до четырех стой в входе жилья и закрыть крышку вставки жилья. Затем используйте сенсорный экран для запуска процедуры встраивания, как указано в таблице. Когда прибор подтвердит конец протокола с выделенным значком, снимите стойку розетки и закройте крышку основного встраиваемого.
Затем перенесите встроенные блоки из стойки в ящик для хранения. Сокращение толстой кишки, и толстой кишки экспрессии провоспалительных генов, широко используются параметры для скоринга наличие декстрана сульфата натрия или DSS индуцированного воспаления. Инфильтрация воспалительных клеток в кишечные ламина проприя также значительно усиливается путем лечения DSS.
H и E окрашивание необработанных образцов, обработанных автоматизацией, как попродемонстрировано, показывает меньше проникающих воспалительных клеток, эпителиальных изменений и изменений в слизистой архитектуре по сравнению с образцами из DSS обработанных животных. Качество подготовки и встраивания ткани мурина, выполняемого автоматизированными приборами, может быть дополнительно подтверждено иммуногистохимическим окрашиванием для CD20 и Мэллори Трихромного окрашивания. Примечательно, что автоматизированная обработка образцов последовательно позволяет работать с более высокой долей гистологических параметров, чем образцы, обработанные ручным методом.
Позаботьтесь, чтобы правильно вставить ткань в сетку, чтобы ждать автоматизированного процессора, чтобы быть готовым, и ждать парафина, чтобы полностью расплавиться. Этот метод может быть использован для выполнения гистологического анализа любой ткани мурина, с qualitive человеческих гистологических образцов, которые будут использоваться в муриновых моделях человека патологоанатомов. Этот метод уже успешно изучается для изучения воспаления воспалительных тканей, и будет полезен для изучения моделей колоректального рака мурина.
Поскольку некоторые реагенты, используемые в этом протоколе, опасны, не забудьте всегда носить защитные перчатки, очки и лабораторное пальто при выполнении этой процедуры.
