Ce protocole automatisé permet la préparation histopathologique des tissus murins avec des systèmes robotiques couramment utilisés pour le traitement et l’intégration d’échantillons humains, augmentant considérablement la qualité des échantillons. Les principaux avantages de cette technique, c’est qu’elle réduit le nombre de variables méthodologiques et améliore la normalisation des étapes procédurales. Démontrer la procédure, sera Francesca Boggio.
Francesca Boggio est pathologiste travaillant dans mon laboratoire. Commencez par utiliser de petites pinces à épiler pour transférer les échantillons fixes de tissu du côlon murin de la formaline tamponnée neutre, sur une plaque de travail de sectionnement dans une boîte de Pétri. Utilisez un scalpel stérile pour couper le côlon en fragments de 0,2 à 0,3 centimètre, et utilisez la pince à épiler pour placer un segment dans chacun des trois bouts non adjacents en plastique saillant d’une cassette orientée paraffine-intégration.
Poussez soigneusement les quatre bords pour fermer la cassette et insérez la grille dans un cadre de soutien en plastique. Ensuite, étiquetez le cadre de soutien pour identifier l’échantillon et transférer la cassette dans la grille. Une heure avant le traitement, tournez le processeur automatisé.
Lorsque l’instrument indique que la paraffine a fondu, insérez manuellement le panier métallique dans le processeur automatisé. Lorsque toutes les cassettes ont été insérées, fermez le panier et ouvrez le couvercle de la riposte. Insérez le panier dans le boîtier dédié du processeur et fermez le couvercle de la riposte.
Utilisez l’écran tactile de l’ordinateur de l’instrument pour définir le protocole de travail en sélectionnant la séquence de solutions, le timing et la température, à implémenter selon le schéma fourni dans le tableau. Cliquez sur l’icône dédiée à l’ordinateur pour attribuer le protocole à la riposte contenant le panier de cassettes, et cliquez sur le bouton de démarrage. Lorsque l’instrument confirme la fin du protocole avec une icône dédiée et une tonalité d’alarme, ouvrez le couvercle de la riposte et retirez le panier du processeur.
Une heure avant l’intégration du tissu, allumez l’embedder automatisé et attendez que la paraffine soit complètement fondue comme l’indique le thermomètre de bain paraffine de l’instrument. Transférez manuellement jusqu’à 32 cassettes traitées du panier du processeur à la grille d’enseil et ouvrez le couvercle principal de l’embedder. Utilisez l’écran tactile pour signaler au système robotique qu’un rack est inséré et ouvrir le couvercle du boîtier de l’entrée.
Insérez jusqu’à quatre supports dans le boîtier de l’entrée et fermez le couvercle du boîtier. Ensuite, utilisez l’écran tactile pour démarrer la procédure d’intégration comme indiqué dans le tableau. Lorsque l’instrument confirme la fin du protocole avec l’icône dédiée, retirez le support de sortie et fermez le couvercle principal de l’embedder.
Ensuite, transférez les blocs intégrés de la grille dans une boîte de stockage. Le raccourcissement du côlon, et l’expression du côlon des gènes pro-inflammatoires, sont des paramètres largement utilisés pour marquer la présence de sulfate de sodium dextran ou d’inflammation induite par le DSS. L’infiltration des cellules inflammatoires dans le propria intestinal de lamina est également considérablement augmentée par le traitement de DSS.
La coloration H&E d’échantillons non traités traités par automatisation, telle qu’elle a été démontrée, révèle moins de cellules inflammatoires infiltrantes, d’altérations épithéliales et de changements dans l’architecture muqueuse par rapport aux échantillons prélevés sur des animaux traités par le MAS. La qualité de la préparation et de l’intégration des tissus murins effectuée par les instruments automatisés peut être confirmée en outre par la coloration immunohistochimique du CD20 et de la coloration trichrome mallory. Notamment, le traitement automatisé des échantillons permet systématiquement l’évaluation d’une proportion plus élevée de paramètres histologiques que les échantillons traités par la méthode manuelle.
Prenez soin d’insérer correctement le tissu dans la grille pour attendre que le processeur automatisé soit prêt, et d’attendre que la paraffine soit complètement fondue. Cette méthode peut être utilisée pour effectuer l’analyse histologique de n’importe quel tissu murin, avec le qualitive des échantillons histologiques humains qui seront utilisés dans les modèles murins des pathologistes humains. Cette technique a déjà été une étude réussie pour l’étude de l’inflammation inflammatoire des tissus, et sera utile pour étudier les modèles de cancer colorectal de la murine.
Comme certains reagents utilisés dans ce protocole sont dangereux, n’oubliez pas de toujours porter des gants de protection, des lunettes et un manteau de laboratoire lors de l’exécution de cette procédure.
