Bu otomatik protokol, insan örneklerinin işlenmesi ve gömülmesi için rutin olarak kullanılan robotik sistemlerle mürin dokularının histopatolojik olarak hazırlanmasına olanak sağlar ve numunelerin kalitesini büyük ölçüde artırır. Bu tekniğin temel avantajları, metodolojik değişkenlerin sayısını azaltması ve usul adımlarının standardizasyonunu iyileştirmesidir. Prosedürü gösteren, Francesca Boggio olacak.
Francesca Boggio laboratuvarımda çalışan bir patolog. Nötr tamponlu formalinden sabit minnet kolon doku örneklerini petri kabındaki bir kesit çalışma plakasına aktarmak için küçük cımbızlar kullanarak başlayın. 0,2 ila 0,3 santimetre parçalar halinde kolon kesmek için steril bir neşter kullanın ve bir yönelimli parafin gömme kaset üç bitişik olmayan plastik çıkıntılı ipuçları her birine bir segment yerleştirmek için cımbız kullanın.
Kaseti kapatmak ve ızgarayı plastik bir destek çerçevesine yerleştirmek için dört kenarı dikkatlice itin. Ardından, örneği tanımlamak ve kaseti ızgaraya aktarmak için destek çerçevesini etiketleyin. İşlemden bir saat önce otomatik işlemciyi çevirin.
Cihaz parafinin eridiğini gösterdiğinde, metal sepeti otomatik işlemciye manuel olarak takın. Tüm kasetler takıldığında, sepeti kapatın ve retort'un kapağını açın. Sepeti işlemcinin özel gövdesine takın ve retort kapağını kapatın.
Tabloda sağlanan şemaya göre uygulanacak çözüm sırasını, zamanlamayı ve sıcaklığı seçerek çalışma protokolünü tanımlamak için gösterge bilgisayarındaki dokunmatik ekranı kullanın. Kaset sepetini içeren retort'a protokol atamak için özel bilgisayar simgesine tıklayın ve başlat düğmesini tıklatın. Cihaz protokolün sonunu özel bir simge ve alarm tonuyla onayladığında, retort kapağını açın ve sepeti işlemciden çıkarın.
Doku gömme den bir saat önce, otomatik katıştırma işlemini açın ve parafinin cihazdaki parafin banyo termometresi tarafından belirtildiği gibi tamamen erimesini bekleyin. İşlemsepetinden 32'ye kadar işlenmiş kaseti gömme rafına elle aktarın ve ana gömme kapağını açın. Robot sistemine bir raf ın yerleştirildiğini bildirmek için dokunmatik ekranı kullanın ve giriş muhafaza kapağını açın.
Giriş muhafazasına en fazla dört raf takın ve giriş muhafaza kapağını kapatın. Ardından, tabloda belirtildiği gibi katıştırma işlemini başlatmak için dokunmatik ekranı kullanın. Cihaz, ilgili simgeyle protokolün sonunu onayladığında, çıkış rafını çıkarın ve ana gömme kapağını kapatın.
Ardından, raftan katışmık blokları bir depolama kutusuna aktarın. Kolon kısalma, ve pro inflamatuar genlerin kolon ekspresyonu, yaygın dekstran sodyum sülfat veya DSS indüklenen inflamasyon varlığını puanlama için kullanılan parametrelerdir. Bağırsak lamina propria içine inflamatuar hücrelerin infiltrasyonu da büyük ölçüde DSS tedavisi ile geliştirilmiştir.
Otomasyon la işlenen işlenmemiş numunelerin H&E boyanması, dss tedavi edilen hayvanlardan alınan örneklere kıyasla daha az infiltrasyon lu inflamatuar hücre, epitel değişiklikler ve mukozal mimarideki değişiklikleri ortaya koymaktadır. Otomatik aletler tarafından yapılan minür doku hazırlama ve katıştırma kalitesi CD20 ve Mallory Trikrom Boyama için immünohistokimyasal boyama ile ayrıca teyit edilebilir. Özellikle, otomatik numune işleme sürekli histolojik parametrelerin daha yüksek bir oranda değerlendirilmesi sağlar, el yöntemi ile işlenen örnekleri yapmak daha.
Otomatik işlemcinin hazır olmasını beklemek için dokuyu ızgaraya doğru şekilde yerleştirmeye ve parafinin tamamen erimesini beklemeye özen. Bu yöntem, insan patologların murine modellerinde kullanılacak insan histolojik örneklerinin niteliksel olarak, herhangi bir mürin dokusunun histolojik analizini yapmak için kullanılabilir. Bu teknik zaten inflamatuar doku iltihabı çalışma için başarılı bir çalışma olmuştur, ve kolorektal murine kanser modelleri çalışma için yararlı olacaktır.
Bu protokolde kullanılan bazı reaktifler tehlikeli olduğundan, bu işlemi gerçekleştirirken her zaman koruyucu eldiven, gözlük ve laboratuvar önlüğü giymeyi unutmayın.
