이 자동화 된 프로토콜은 인간 샘플의 처리 및 포함에 일상적으로 사용되는 로봇 시스템으로 뮤린 조직의 조직 병리학적 준비를 허용하여 샘플의 품질을 크게 증가시합니다. 이 기술의 주요 장점은 방법론 적 변수의 수를 줄이고 절차 단계의 표준화를 향상시킨다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 프란체스카 보기오가 될 것입니다.
프란체스카 보기오는 내 실험실에서 일하는 병리학자입니다. 작은 핀셋을 사용하여 중성 완충 포르말린에서 고정 된 뮤린 결장 조직 샘플을 페트리 접시의 단면 작업 플레이트로 옮기는 것으로 시작합니다. 멸균 메스를 사용하여 결장수를 0.2~0.3센티미터 의 조각으로 자르고 핀셋을 사용하여 1개의 세그먼트를 지향파라핀 포함 카세트의 3개의 비인접 플라스틱 돌출 팁에 배치합니다.
네 개의 가장자리를 조심스럽게 밀어 카세트를 닫고 그리드를 플라스틱 지지 프레임에 삽입합니다. 그런 다음 지원 프레임에 레이블을 지정하여 샘플을 식별하고 카세트를 그리드로 전송합니다. 처리 하기 한 시간 전에 자동화 된 프로세서를 설정 합니다.
파라핀이 녹았다는 것을 나타내는 계측기가 자동화된 프로세서에 금속 바구니를 수동으로 삽입합니다. 모든 카세트가 삽입되면 바구니를 닫고 레토르트의 뚜껑을 엽니다. 바구니를 프로세서 전용 하우징에 삽입하고 레토르트 뚜껑을 닫습니다.
계측기 컴퓨터의 터치스크린을 사용하여 테이블에 제공된 방식에 따라 구현될 솔루션, 타이밍 및 온도의 시퀀스를 선택하는 작업 프로토콜을 정의합니다. 전용 컴퓨터 아이콘을 클릭하여 카세트 바구니가 포함된 레토르트에 프로토콜을 할당하고 시작 단추를 클릭합니다. 기기가 전용 아이콘과 알람 톤으로 프로토콜의 끝을 확인하면 레토르트 뚜껑을 열고 프로세서에서 바구니를 제거합니다.
조직이 포함되기 한 시간 전에 자동화 된 임베드를 켜고 파라핀이 악기의 파라핀 목욕 온도계에 의해 표시된 대로 완전히 녹을 때까지 기다립니다. 프로세서 바구니에서 임베더 랙까지 최대 32개의 가공 카세트를 수동으로 전송하고 메인 임베드리드 뚜껑을 엽니다. 터치스크린을 사용하여 랙이 삽입되고 있음을 로봇 시스템에 알리고 입구 하우징 뚜껑을 엽니다.
입구 하우징에 최대 4개의 랙을 삽입하고 입구 하우징 뚜껑을 닫습니다. 그런 다음 터치스크린을 사용하여 테이블에 표시된 대로 포함 절차를 시작합니다. 계측기가 전용 아이콘으로 프로토콜의 끝을 확인하면 콘센트 랙을 제거하고 메인 임베드리드 뚜껑을 닫습니다.
그런 다음 랙에서 임베디드 블록을 저장소 상자로 옮기습니다. 결장 단축, 및 프로 염증 유전자의 대장 발현은, dextran 나트륨 황산염 또는 DSS 유도 염증의 존재를 득점하기 위한 널리 사용되는 매개 변수입니다. 장 라미나 프로프리아로 염증 세포의 침투는 또한 DSS 처리에 의해 크게 강화됩니다.
입증된 바와 같이 자동화에 의해 처리된 처리되지 않은 견본의 H&E 염색은, DSS 처리한 동물에게서 견본에 비교된 염증성 세포, 상피 변경 및 점막 건축에 있는 변경의 더 적은 침투를 보여줍니다. 자동화된 기기에 의해 수행된 뮤린 조직 제제 및 포함의 품질은 CD20 및 말로리 트리크롬 스테인닝을 위한 면역조직화학 염색에 의해 추가적으로 확인할 수 있다. 특히, 자동화된 샘플 처리는 수동 방법에 의해 처리된 샘플보다 조직학적 파라미터의 높은 비율을 일관되게 평가할 수 있게 한다.
자동 프로세서가 준비될 때까지 기다리기 위해 그리드에 조직을 올바르게 삽입하고 파라핀이 완전히 녹을 때까지 기다립니다. 이 방법은 인간 병리학자의 뮤린 모형에서 이용될 인간 조직학 견본의 자질로, 어떤 murine 조직의 조직학 분석을 능력을 발휘하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 기술은 이미 염증 성 조직 염증을 연구하기위한 성공적인 연구였으며 대장 뮤린 암 모델을 연구하는 데 유용 할 것입니다.
이 프로토콜에 사용되는 일부 시약은 위험하므로 이 절차를 수행 할 때 항상 보호 장갑, 고글 및 실험실 코트를 착용해야합니다.
