تبادل لاطلاق النار meristems apical السيطرة على نمو النبات والتكاثر. هذه الطريقة تساعدنا على التحقيق في مورفولوجيا والهياكل الداخلية لاطلاق النار meristems apical ليس فقط في الأنواع النموذجية ولكن أيضا في المحاصيل المختلفة. هذه التقنية هي إجراء فعال جدا.
يمكن تصوير apical meristem مباشرة في دقة خلوية عالية دون أي تثبيت العينة كثيفة العمالة والخطوات تقسيم الأنسجة. للبدء، تنمو العربية، الطماطم، و فول الصويا النباتات كما هو مفصل في بروتوكول النص. قطع قمة تبادل لاطلاق النار inflorescence من النباتات Arabidopsis انسحب.
عقد الجزء القاعدي من الجذعية الرئيسية، واستخدام ملقط لإزالة أكبر عدد من الأعضاء زهرة القديمة ممكن من الجذعية الرئيسية. مواصلة إزالة بقية الزهور في مجال المجهر ستيريو حتى يمكن الاطلاع على meristem تبادل لاطلاق النار apical من العدسة. لعرض اللمباتية تبادل لاطلاق النار apical meristems من الطماطم أو فول الصويا، تشريح كوتيليدونس، والأوراق، والجذور من النبات.
عقد hypocotyls من النبات تحت المجهر ستيريو، واستخدام ملقط لمزيد من تشريح الأوراق وورق primordia تغطي الخضرية تبادل لاطلاق النار apical meristems. مايليت 50 ميكرولترات من محلول يوديد بروبديسيوم في طبق بيتري نظيف وفارغ. تراجع كامل تشريح تبادل لاطلاق النار قمة في صبغ لمدة دقيقتين.
خلال عملية تلطيخ، تزج في كل inflorescence تبادل لاطلاق النار apical meristem أو الخضرية تبادل لاطلاق النار apical meristem في حل يوديد بروبديسيوم لتحقيق تلطيخ موحدة. شطف قمة تبادل لاطلاق النار الملون مرتين في الماء العقيمة، deionized. الآن، يخترق حفرة في وسط طبق التصوير المعدة باستخدام ملقط، والعصا قمة تبادل لاطلاق النار الملون تستقيم في الوسط.
املأ طبق التصوير بالماء المعقم والمؤين لتغمر العينة تمامًا. عرض العينة من خلال المجهر ستيريو. ماصة صعودا وهبوطا لإزالة فقاعات الهواء المحاصرين حول meristem.
ثم، ضبط زاوية الجذعية في أجار للتأكد من أن تبادل لاطلاق النار meristem هو واضح تماما من فوق مباشرة. الآن، ضع طبق التصوير على مرحلة العينة من المجهر confocal. خفض عدسة المياه غمس، ورفع مرحلة عينة المجهر للسماح غيض من العدسة تراجع في الماء.
فتح برنامج المجهر confocal، واستخدام العدسة لتحديد مكان والتركيز على تبادل لاطلاق النار meristem apical في مجال مشرق. تشغيل وظيفة الاستحواذ في برنامج المجهر confocal. ابدأ تشغيل الوضع المباشر لعرض العينة من شاشة الكمبيوتر، ثم قم بإعداد كافة المعلمات لتجربة المسح الضوئي بالليزر.
عند ضبط المعلمات، استخدم وظيفة مؤشر النطاق لتحديد ما إذا كانت الإشارة مشبعة أم لا. ويمكن استخدام نفس البرنامج الذي كان يستخدم لاقتناء الصور لتصور الإسقاط الشفاف ثلاثي الأبعاد. افتح ملف confocal الأصلي، وانقر على القائمة ثلاثية الأبعاد، وحدد شفاف لإنشاء عرض عرض 3D.
اختياريًا، حدد الشفافية لضبط ثلاث معلمات للعرض، بما في ذلك العتبة والمنحدر والحد الأقصى لشفافية الصورة ثلاثية الأبعاد. الآن، حدد ضوء لضبط سطوع الصورة ثلاثية الأبعاد. تصدير الصور المسقطة وحفظها كملفات TIFF.
لتصور عمق طريقة عرض الترميز من الصور 3D، استخدم نفس البرنامج. مرة أخرى، انقر فوق القائمة 3D، وحدد المظهر. حدد خاص، وحدد ترميز العمق.
تصدير الصور المسقطة وحفظها كملفات TIFF. هذه الصورة من القسم المتعامد من خلال منتصف عربدوبسيس تبادل لاطلاق النار meristem apical تبين أن الجدران الأفقية ملطخة مع يوديد بروبيديوم في جميع الخلايا تقريبا في طبقات الخلايا المتعددة. وجهة نظر قسم واحد عرضية من خلال مجموعة من inflorescence تبادل لاطلاق النار apical meristem يظهر أن الخلايا من الطائرة XY هي أيضا صورة واضحة.
يكشف عرض الإسقاط ثلاثي الأبعاد أن الريستيم المزهر يشكل بنية تشبه القبة وتحيط به زهرة primordia النامية. هذه الصورة من القسم المتعامد من خلال منتصف الطماطم تبادل لاطلاق النار meristem تبادل لاطلاق النار أيضا يدل على أن الجدران الأفقية ملطخة مع يوديد بروبديسيوم في طبقات متعددة الخلية، على الرغم من أن إشارة يوديد بروبدييوم من المنطقة الداخلية العميقة هو أقل قليلا. صورة من مقطع واحد عرضية من خلال الطبقات العميقة من التصوير النباتي apical meristem يكشف عن الخلايا من طائرات XY والحدود التي تشكلت بين meristem الخضري وورقة primordia.
يمكن أن توفر طريقة العرض الإسقاط ثلاثية الأبعاد رؤية شاملة لشكل وتنظيم الزهد الخضري من الطماطم. يظهر هنا هو عرض متعامد من خلال منتصف تصوير فول الصويا meristem و 3D الإسقاط من نفس تبادل لاطلاق النار meristem. وsristem النباتية مثل القبة وprimordia ورقة جديدة مشتقة هي أيضا يمكن ملاحظتها.
يمكن أن يلطخ يوديد البروديوم بسهولة الخلايا التالفة أو الميتة ، والتي ستؤثر بشكل كبير على جودة الصور ، لذلك من المهم تجنب أي ضرر مادي أثناء إعداد عينات التصوير السريع.
