نموذج المثانة لدينا مع إزالة العضلات detrusor هو نهج تجريبي جديد لدراسة في وقت واحد توافر وسطاء urothelial في لاميا propria وتجويف المثانة أثناء ملء المثانة. يمكن أن يوفر هذا النموذج رؤى جديدة في آليات الإشارات بين urothelium، suburothelium، والعضلات الطاردة التي تنظم استثارة المثانة أثناء الملء. تبدأ عن طريق وضع عينة المثانة مورين سليمة في طبق تشريح تحت مجهر تشريح تحتوي على 10 درجة مئوية أكسيجينت ك.م.م وتنظيف الأنسجة الضامة والدهون حول المثانة.
دبوس جزء صغير من قبة المثانة المعزولة على طول الطريق من خلال الحافة الخارجية للعضلات detrusor بعيدا عن الحافة الأعمق للعضلات التي تواجه suburothelium lamia propria إلى طبق تشريح sylgard المغطاة مليئة KBS، ودبوس الحالبين والرقبة المثانة لعرض إعداد المثانة سليمة. باستخدام ملقط ناعم، سحب بلطف قطعة من سيروزا في الزاوية بين الحالب والجسم المثانة وضبط ضوء المجهر لزيادة الشفافية والتمييز هامش submucosa تحت العضلات detrusor. لتجنب ثقب جدار التحضير ، تأكد من قطع العضلات الطاردة فقط في حين أن الحافة الجانبيّة للمثانة الغشاء المخاطي واضحة للعيان.
باستخدام مقص ذو رؤوس دقيقة، ابدأ في قطع جدار المثانة على طول السطح الداخلي لطبقة العضلات المقنّة بينما تسحب الجزء المقطوع برفق بعيداً عن التحضير مع الحرص على أن الحافة الجانبيّة للغشاء المخاطي يمكن ملاحظتها مع تجنب لمس حافة النسيج. ترك قطعة صغيرة من عضلة detrusor على رأس قبة المثانة للسماح للتحضير لشل خلال الخطوات المتبقية من البروتوكول وملء قطعة سنتيمترين من 20 أنابيب البولي إيثيلين مع 37 درجة مئوية أكسيجيند KBS. بعد إدخال القسطرة في فتحة مجرى البول في المثانة، ادفع القسطرة بلطف حتى يصل طرف القسطرة إلى منتصف المثانة تقريبيًا.
ثم تأمين القسطرة في الأنسجة المحيطة من عنق المثانة مع حلقة مزدوجة 6.0 خياطة النايلون. بعد فحص الأنسجة للتسريبات، ضع إعداد المثانة المهترئة في غرفة ثلاث ملليلتر من 37 درجة مئوية من الماء سترة طبق الجهاز مع أسفل sylgard وتأمين القسطرة إلى جانب الغرفة بحيث لا تطفو التحضير فوق سطح محلول الضخ. توصيل قسطرة المثانة إلى قطعة من البولي ايثيلين 20 أنابيب متصلة بسدكوك ثلاثية الاتجاه وحقنة ضخ مليئة بـ 37 درجة مئوية من الأوكسجين KBS وابدأ بمضخة التسريب لملء المثانة مع KBS مع الحرص على مراقبة حجم التعبئة في الضغط داخل الجسم أثناء الملء.
للكشف عن الوسطاء داخل suburothelium الجانب بروبريا لامينا من إعداد، وجمع aliquots من حل الحمام في مختلف النقاط الزمنية التجريبية المناسبة ومعالجة العينات وفقا لتحليل المصب المخطط لها. يحتوي جدار إعداد المثانة المشوه على urothelium و suburothelium ولكن ليس ديترور العضلات الملساء. علاقات حجم الضغط متشابهة بشكل ملحوظ في الاستعدادات سليمة ومهتكة.
يمكن اختبار ملاءمة النموذج لقياس الوسطاء المشتقين من urothelium التي يتم إصدارها في جانب suburothelium lamina propria أثناء الملء عن طريق قياس إطلاق وسطاء البيورين في الحل الذي يستحم بروبريا الصفيحة suburothelium من إعداد مُنَح. كما هو موضح, يمكن الكشف عن كميات لا تذكر من البيورينات في حمام يحتوي على إعداد المثانة المعزولة مع عضلة detrusor سليمة;في حين أن كميات من هذه البيورينات هي أعلى بكثير في العينات التي تم جمعها من الحمام تحتوي على إعداد المثانة ينحي. وتجدر الإشارة إلى أن توزيع البيورينات والمستقلبات في العينات التي تم جمعها من تجويف الأرض وpourothelium lamina propria في نهاية الملء يختلف اختلافا كبيرا.
إضافة atheno ATP، وهو التناظرية الفلورية للغاية من ATP، إلى الجانب دون المسالك الفرعية من نتائج إعداد detrusor خالية في انخفاض في ATP atheno وزيادة في المنتجات ATP atheno، atheno ADP، atheno AMP، و Atheno ADO. وبالمثل، إضافة ATP atheno إلى إعداد تجويف النتائج في انخفاض في ATP atheno وزيادة في ADP atheno، Atheno AMP، و ATHENO ADO في التجويف. علاوة على ذلك، إضافة atheno ATP إلى الجانب suburothelium لامينا بروبريا من نتائج إعداد denuded في ظهور atheno AMP و Atheno ADO داخل تجويف.
وبالمثل، إضافة attheno ATP إلى نتائج التجويف في ظهور AMP atheno و Atheno ADO في بروبريا lamina suburothelium. بعد هذا الإجراء، يمكن قياس توافر الوسطاء مثير ومثبطة في بروبريا لامينا وفي تجويف المثانة في مراحل مختلفة من ملء المثانة. ويمكن أيضا دراسة النقل الثنائي للوسطاء والتنمين من الوسطاء باستخدام هذا النموذج.
استخدام هذا النموذج الجديد المثانة سوف يؤدي إلى فهم جديد لل، إشارة الحساسية المحلية الجوهرية بين urothelium والعضلات الملساء النتوء التي تتحكم في استثارة المثانة في الصحة والمرض.
