我们的膀胱模型与去除的松弛肌肉是一种新的实验方法,同时研究在膀胱填充期间在拉米亚丙体和膀胱流明的尿皮中介的可用性。此模型可以提供新的见解,了解在填充过程中调节膀胱兴奋性尿素、亚尿素和德特鲁索肌肉之间的信号机制。首先将完整的穆林膀胱标本放入含有10摄氏度含氧KBS的解剖显微镜下解剖盘中,并清理膀胱周围的结缔和脂肪组织。
将隔离膀胱圆顶的一小部分固定到远离肌部肌肉最内侧边缘的分离膀胱,以制成充满KBS的带状解剖盘,并固定尿管和膀胱颈部,以显示完整的膀胱制剂。使用细尖钳子,轻轻拉一块在尿尿道和膀胱体之间的角落的血清,并调整显微镜的光线,以提高透明度,并区分尿道肌肉下方的亚木科萨边缘。为了避免穿孔的制备壁,一定要切断德特鲁索肌肉只,而膀胱粘膜的横向边缘是清晰可见的。
使用细尖剪刀,开始沿着德特鲁索肌肉层的内表面切割膀胱壁,同时轻轻地将切开部分从准备中拉开,同时注意可以观察到粘膜的侧缘,同时避免接触组织的边缘。将一小块德特鲁瑟肌肉留在膀胱圆顶顶部,以便在协议的剩余步骤中固定制备,并填充两厘米的 20 个聚乙烯管,并填充 37 摄氏度的氧化 KBS。将导管插入膀胱尿道的孔后,轻轻推动导管,直到导管尖端到达膀胱的近似中间。
然后用双环6.0尼龙缝合线将导管固定在膀胱颈部周围组织。检查组织有无泄漏后,将排骨膀胱制剂放入37摄氏度水套管管的三毫升腔内,并固定导管到腔室的一侧,使制剂不会浮在灌注溶液表面之上。将膀胱导管连接到一块聚乙烯 20 管,连接到三向止动器和充满 37 摄氏度含氧 KBS 的输液注射器,然后启动输液泵,用 KBS 小心地对膀胱进行填充,以监测灌装过程中内压中的灌装量。
为了检测制备过程中亚尿层中介质,在各适当的实验时间点收集浴液的等分,并按照计划的下游分析处理样品。切除膀胱准备壁包含尿素和亚尿素,但不是德特鲁索平滑肌。压力体积关系在完好无损的制剂中非常相似。
测量在灌装过程中在亚尿素层状丙烯侧释放的尿素衍生介质的模型是否适用,可以通过测量紫菜介质释放到溶液中,使被消退制剂的亚尿素层状介质的释放情况得到测试。如所证明,在含有完整切除肌肉的隔离膀胱制剂的浴池中,可以检测到微不足道的紫菜;而从含有排骨膀胱制剂的浴池中收集的样本中,这些紫菜的量要高得多。值得注意的是,从流明和亚尿素的样品中,在填充结束时的紫菜和代谢物的分布差异很大。
将 ATP 的一个高度荧光模拟 Atp 添加到无毒剂制备的亚三边,导致 Atp 的减少,Atheno ATP 产品的增加,atheno ADP、atheno AMP 和 atheno ADO 的添加。同样,在流明制备中加入 atheno ATP 会导致 atheno ATP 的减少,以及流明中 atheno ADP、atheno AMP 和 atheno ADO 的增加。此外,在德努德制剂的亚尿层层丙条一侧添加 atheno ATP 会导致 atheno AMP 和 atheno ADO 在流明中出现。
同样,在流明中添加 atheno ATP 会导致 atheno AMP 和 atheno ADO 在亚尿素层中出现。按照这个程序,兴奋和抑制性调停剂的可用性可以在膀胱填充的不同阶段的拉米纳丙体和膀胱流明测量。也可以利用该模型研究调停器的双边横贯运输和调停器的代谢。
使用这种新的膀胱模型将导致对内在,局部机械敏感信号之间的尿素和德特鲁索平滑肌肉,控制膀胱兴奋在健康和疾病的新的理解。