Nuestro modelo de vejiga con un músculo destrusor eliminado es un nuevo enfoque experimental para estudiar simultáneamente la disponibilidad de mediadores uroteliales en la lamia propria y el lumen de la vejiga durante el llenado de la vejiga. Este modelo puede proporcionar nuevas perspectivas sobre los mecanismos de señalización entre urotelio, suburotelio y músculo detrusor que regulan la excitabilidad de la vejiga durante el llenado. Comience colocando la muestra de vejiga murina intacta en un plato diseccionado bajo un microscopio de disección que contenga 10 grados centígrados oxigenados KBS y limpie los tejidos conectivos y grasos alrededor de la vejiga.
Ancle una pequeña porción de la cúpula de la vejiga aislada todo el camino a través del borde más externo del músculo del detrusor lejos del borde más interno del músculo que enfrenta a la suburotheliummia lapropria a un plato diseccionador cubierto de sigard lleno de KBS, y pin los uréteres y el cuello de la vejiga para mostrar la preparación intacta de la vejiga. Usando fórceps de punta fina, tire suavemente de un pedazo de la serosa en la esquina entre el uréter y el cuerpo de la vejiga y ajuste la luz del microscopio para aumentar la transparencia y distinguir el margen de la submucosa debajo del músculo detrusor. Para evitar perforar la pared de preparación, asegúrese de cortar el músculo del detrusor sólo mientras el borde lateral de la mucosa de la vejiga es claramente visible.
Usando tijeras de punta fina, comience a cortar la pared de la vejiga a lo largo de la superficie interna de la capa muscular del detrusor mientras tira suavemente del segmento de corte lejos de la preparación teniendo cuidado de que el borde lateral de la mucosa se pueda observar evitando tocar el borde del tejido. Deje un pequeño trozo del músculo del detrusor en la parte superior de la cúpula de la vejiga para permitir que la preparación se inmovilice durante los pasos restantes del protocolo y llene una pieza de dos centímetros de tubo de polietileno de 20 grados con KBS oxigenado de 37 grados centígrados. Después de insertar el catéter en el orificio de la uretra vesical, empuje suavemente el catéter hasta que la punta del catéter llegue a la mitad aproximada de la vejiga.
A continuación, asegure el catéter en el tejido circundante del cuello de la vejiga con una sutura de nylon de doble bucle 6.0. Después de comprobar el tejido en busca de fugas, coloque la preparación de la vejiga denudada en una cámara de tres mililitros de 37 grados centígrados con un plato de órgano con revestimiento de agua con un fondo sylgard y asegure el catéter a un lado de la cámara para que la preparación no flote por encima de la superficie de la solución de perfusión. Conecte el catéter vesical a un trozo de tubo de polietileno 20 conectado a un tope de tres vías y una jeringa de perfusión llena de KBS oxigenado de 37 grados centígrados e inicie la bomba de perfusión para llenar la vejiga con KBS teniendo cuidado de controlar el volumen de llenado en la presión intravesical durante el llenado.
Para detectar mediadores dentro del aspecto de lamina propria de la preparación, recoja las alícuotas de la solución de baño en varios puntos de tiempo experimentales apropiados y procese las muestras de acuerdo con el análisis posterior planificado. La pared de preparación de la vejiga denuda contiene el urotelio y el suburotelio, pero no el músculo liso desconfiador. Las relaciones de volumen de presión son notablemente similares en los preparados intactos y denudados.
La idoneidad del modelo para medir mediadores derivados del urotelio que se liberan en el lado de lamina de lamina suburothelium durante el llenado se puede probar midiendo la liberación de mediadores de purina en la solución que baña la lámina de suburotelio propria de la preparación denudada. Como se ha demostrado, se pueden detectar cantidades insignificantes de purinas en un baño que contiene una preparación de vejiga aislada con un músculo detrusor intacto; mientras que las cantidades de estas purinas son significativamente más altas en muestras recogidas del baño que contienen una preparación de vejiga denudada. En particular, la distribución de purinas y metabolitos en muestras recogidas del lumen y la suburotelio lamina propria al final del llenado difieren significativamente.
La adición de ATP ateo, un análogo altamente fluorescente de ATP, al lado suburético de la preparación libre de intrusos resulta en una disminución en el ateo ATP y un aumento en los productos ATP ateniense, ateniense ADP, atheno AMP, y ateo ADO. Del mismo modo, la adición de atheno ATP a la preparación de lúmenes resulta en una disminución en el ato ATP y un aumento en el ato ADP, atheno AMP, y ateniense ADO en el lumen. Además, la adición de ateo ATP al lado de lamina propria suburothelium de la preparación denuded resulta en la aparición de atheno AMP y atheno ADO dentro del lumen.
Del mismo modo, la adición de ateo ATP al lumen resulta en la aparición de atheno AMP y atheno ADO en el suburothelium lamina propria. Después de este procedimiento, la disponibilidad de mediadores excitatorios e inhibitorios se puede medir en la lámina propria y en el lumen de la vejiga en diferentes etapas del llenado de la vejiga. El transporte transuretral bilateral de mediadores y el metabolismo de los mediadores también se pueden estudiar utilizando este modelo.
El uso de este nuevo modelo de vejiga dará lugar a una nueva comprensión de la señalización mecanosensible intrínseca entre el urotelio y el músculo liso detrusor que controlan la excitabilidad de la vejiga en la salud y la enfermedad.
