Çıkarılan detrusor kas ile mesane modeli aynı anda mesane dolgu sırasında lamia propria ve mesane lümen ürotelyal mediatörler durumu çalışma için yeni bir deneysel yaklaşımdır. Bu model, dolgu sırasında mesane uyarılabilirliğini düzenleyen urothelium, suburothelium ve detrusor kas arasındaki sinyal mekanizmalarına yeni bakış açısı sağlayabilir. Bozulmamış murin mesane örneğini 10 santigrat derece oksijenli KBS içeren bir diseksiyon mikroskobu altında bir diseksiyon çanak içine yerleştirerek ve mesane etrafında bağ ve yağ dokuları temizleyerek başlayın.
Izole mesane kubbesinin küçük bir kısmını, detrusor kasının en dış kenarına kadar, suburothelium lamia propria'ya bakan kasın en iç kenarından KBS ile doldurulmuş bir sylgard kaplı diseksiyon kabına sabitleyin ve sağlam mesane hazırlıkını görüntülemek için üreterleri ve mesane boynunu sabitleyin. İnce uçlu forceps kullanarak, yavaşça üreter ve mesane gövdesi arasındaki köşesinde serosa bir parça çekin ve şeffaflığı artırmak ve detrusor kas altında submucosa marjı ayırt etmek için mikroskop ışığı ayarlamak. Hazırlık duvarının bozulmasını önlemek için, mesane mukozasının lateral kenarı açıkça görünürken detrusör kası kestiğinden emin olun.
İnce uçlu makas kullanarak, detrusor kas tabakasının iç yüzeyi boyunca mesane duvarını kesmeye başlarken, kesilen segmenti hafifçe, mukozanın lateral kenarının doku kenarına dokunmaktan kaçınarak gözlemlenebildiği hazırlıktan uzaklaştırın. Protokolün kalan adımları sırasında hazırlık immobilize izin vermek ve 37 derece santigrat derece oksijenli KBS ile 20 polietilen boru iki santimetre lik bir parça doldurmak için mesane kubbesinin üstüne detrusor kas küçük bir parça bırakın. Kateteri mesane üretrasının deliğe yerleştirdikten sonra kateter ucu mesanenin yaklaşık ortasına ulaşana kadar kateteri hafifçe itin.
Daha sonra mesane boynunun çevresindeki dokuda kateteri çift halka 6.0 naylon dikişle sabitle. Sızıntıları için doku kontrol ettikten sonra, bir hekte alt ile 37 derece santigrat derece su ceketli organ çanak üç mililitrelik bir odaya denuded mesane hazırlık yerleştirin ve hazırlık perfüzyon çözeltisi yüzeyinin üzerinde yüzen değil, böylece odanın yan kateter güvenli. Mesane kateterini üç yönlü stopcock'a bağlı polietilen 20 boruya ve 37 derece santigrat derece oksijenli KBS ile dolu bir infüzyon şırıngasına bağlayın ve dolgu sırasında intravezal basınçtaki dolum hacmini izlemeye özen gösteren KBS ile mesane doldurmak için infüzyon pompasını çalıştırın.
Preparatın suburothelium lamina propria yönü ndeki aracıları tespit etmek için, banyo çözeltisinin aliquotlarını çeşitli uygun deneysel zaman noktalarında toplayın ve numuneleri planlanan downstream analizine göre işleyin. Denuded mesane hazırlık duvarı ürotelyum ve suburothelium içerir, ancak detrusor düz kas içermez. Basınç hacmi ilişkileri bozulmamış ve denuded preparatlar son derece benzer.
Dolgu sırasında suburothelium lamina propria tarafında serbest bırakılan ürotellium kaynaklı aracıların ölçümü için modelin uygunluğu, denuded preparatın suburothelium lamina propriasını yıkanan çözeltiye pürin arabulucularının salınımını ölçerek test edilebilir. Gösterildiği gibi, ihmal edilebilir miktarda pürin sağlam bir detrusor kas ile izole bir mesane hazırlık içeren bir banyo tespit edilebilir;bu pürinlerin miktarları bir denuded mesane hazırlık içeren banyo dan toplanan örneklerde önemli ölçüde daha yüksek ise. Özellikle lümenden toplanan örneklerdeki pürin ve metabolitlerin dağılımı ve dolgu sonunda suburothelium lamina propria önemli ölçüde farklılık gösterir.
ATP'nin son derece floresan analogu olan atheno ATP'nin detrusor içermeyen preparatın suburothelial tarafına eklenmesi, atheno ATP'de azalma ve atheno ATP ürünlerinde artışa yol, atheno ADP, atheno AMP ve atheno ADO. Aynı şekilde, lümen hazırlık atheno ATP eklenmesi atheno ATP bir azalma ve atheno ADP bir artış sonuçlanır, atheno AMP, ve atheno ADO lümen. Ayrıca, denuded hazırlık suburothelium lamina propria tarafına atheno ATP eklenmesi lümen içinde atheno AMP ve atheno ADO görünümünü sonuçları.
Aynı şekilde, lümen atheno ATP ekleyerek suburothelium lamina propria atheno AMP ve atheno ADO görünümünü sonuçları. Bu prosedürü takiben, uyarıcı ve inhibitör mediatörlerin durumu lamina propria ve mesane dolgu farklı aşamalarında mesane lümen ölçülebilir. Arabulucuların bilateral transüretral taşınması ve arabulucuların metabolizması da bu model kullanılarak incelenebilir.
Bu yeni mesane modelinin kullanılması, sağlık ve hastalıkta mesane uyarılabilirliğini kontrol eden ürotelyum ve detrusor düz kas arasında içsel, lokal mekanosensduyarlı sinyalizasyon un yeni anlaşılmasına yol açacaktır.
