ويمكن أن يساعد فحص الجسيمات المحمولة جواً فيما يتعلق بالسمية الرئوية الحادة عن طريق الكشف عن خلايا الرئة البشرية المزروعة في نظام ALI باستخدام نظام التعرض في المختبر في تقليل التجارب على الحيوانات. والميزة الرئيسية لنظام التعرض هذا هي مفهوم توزيع الهباء الجوي الشعاعي الذي يؤدي إلى توزيع متجانس ووضع الجسيمات على الخلايا. قبل البذر الخلايا، إضافة 2.5 ملليلتر من متوسطة النمو خفف إلى كل بئر من ستة لوحة جيدا.
وضع ثقافة الخلية إدراج دون خلايا بعناية داخل الآبار وإضافة ملليلتر واحد من متوسطة النمو إلى كل خلية ثقافة إدراج. احتضان لوحات لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد تريبسينت من الخلايا، وتمييع 100 ميكرولترات من تعليق ثقافة الخلية في كوب مليئة 10 ملليلتر من محلول متساوي التوتر.
إمالة الكأس ببطء دون اهتزاز. على عداد خلية، تحديد عدد الخلايا القابلة للحياة لكل ملليلتر و الخلية قابلة للاستمرار استناداً إلى معلمات قياس الخلية الخاصة بالخلايا A549. بعد هدأ من لوحة, تعرق الوسط ضمن الخلية ثقافة إدراج وبذّر واحدة ملليلتر من A549 خلايا مع كثافة من ثلاثة أوقات 10 إلى الخلايا الخامسة لكل ملليلتر في كل خلية ثقافة إدراج.
توزيع تعليق الخلية عن طريق هزاز لطيف واحتضان لمدة 24 ساعة. تعيين الوقت الملح عبر التحكم في الوقت على الجانب الأمامي من الصحافة. افتح إمدادات الهواء المضغوط في صمام الهواء المضغوط.
باستخدام منظم الضغط على الجانب الأمامي من الصحافة، تعيين ضغط الهواء المضغوط إلى ما يقرب من شريط اثنين. اسحب الدرج واضغط على زر الضغط وقراءة الضغط على مفتاح الضغط الرقمي. ملء حاوية المادة بكمية صغيرة من مادة الاختبار.
إدراج المكبس في حاوية المادة وتحويلها قليلا ذهابا وإيابا لتوزيع بالتساوي مسحوق في الحاوية. ضع حاوية المادة ، مع المكبس ، في الدرج واضغط على زر الضغط. فتح الدرج وإزالة المكبس.
ومن الخطوات الحاسمة الضغط على المواد الاختبارية التي يجب أن تكون مضغوطة على وجه التحديد إلى كعكة مسحوق داخل حاوية المادة من أجل تمكين التعرض للجسيمات المستقرة. إزالة محول مدخل وتكاثف العاكس من وحدة توجيه الهباء الجوي. إغلاق الآبار تغذية الهباء الجوي الثلاثة في وحدة توجيه الهباء الجوي مع المقابس واتصالات العرض المتوسطة في وحدة أخذ العينات مع اللوحات وهمية.
قم بتوصيل خطوط الفراغ بموصل أنبوب الوحدة التوجيهية للهباء الجوي. استخدم عجلة اليد لإغلاق الوحدة وقياس قيمة وحدات تحكم التدفق. بعد بضع دقائق من الإغلاق، تنخفض القيم إلى أقل من خمسة ملليلترات في الدقيقة.
بدء تشغيل برنامج مولد الهباء الجوي. إذا لم يكن أداة كشط المادة في الموضع الأدنى، اضغط على وضع توجيه الزر. ضع حاوية المادة مع المواد الاختبارية المضغطة رأساً على عقب فوق مكشطة المادة.
تأكد من أن الزجاج من حاوية المادة يواجه الجبهة. وضع لوحة تأمين في فتحة على حاوية المادة وتشديد المسمار الأسود. تغيير قيم التغذية والتدوير إلى الإعدادات المطلوبة.
استخدام الأسهم إلى الأسفل لدفع أسفل الشريحة مع حاوية المادة حتى مكشطة المادة بالقرب من المادة الضغط. افتح إمدادات الهواء المضغوط إلى مولد الهباء الجوي بنقرة من وحدة تحكم التدفق الجماعي وابدأ توليد الهباء الجوي بالنقر على زر ابدأ. تعيين معدل التغذية إلى 15 إلى 20 ملليمتر في الساعة لتجنب أوقات الانتظار الطويلة.
التحكم في توليد الجسيمات الصحيحة من خلال مراقبة سحابة الغبار الدقيقة مع مصباح يدوي صغير يتم وضعه من الأسفل خلف الأنبوب الزجاجي للـ elutriator. بدء العرض المتوسط مع متوسط التعرض مسخن مسبقا وملء وحدات أخذ العينات حتى يتم تغطية downpipes بينما الوحدة مفتوحة. إدراج خلية عمياء تدرج في وحدة التعرض ، ضخ متوسطة التعرض لأسفل حتى يتم تغطية downpipes مع المتوسطة والجانب السفلي من إدراج في اتصال مع المتوسطة.
بدء مولد الهباء الجوي، وإغلاق وحدة التعرض، وربط وحدة التعرض لمأخذ وحدة التعرض لمولد الهباء الجوي. بعد 30 دقيقة من المهلة، ختم منفذ وحدة التعرض من elutriator مع المكونات المطاطية وإزالة إدراج أعمى. إعادة ملء متوسط التعرض حتى يتم تغطية downpipes مع المتوسطة.
إزالة إدراج ثقافة الخلية من لوحات الآبار الستة بمساعدة الملاقط. صب متوسطة النمو بعناية من ثقافة الخلية إدراج قبالة عن طريق إسقاط إدراج واستخدام ماصة لpiratesate والتخلص من السائل المتبقية. ضع إدراج في غرف التعرض لكل من التعرض والوحدات الهواء النظيف.
أغلق الوحدات وتبدأ تجارب التعرض عن طريق ربط وحدة التعرض بمأخذ وحدة التعرض لمولد الهباء الجوي ووحدة الهواء النظيف بإمدادات الغاز الناقلة في وقت واحد. بعد الانتهاء من التجربة، افصل وحدات التعرض والهواء النقي وختم منفذ وحدة التعرض. وقف إمدادات الهواء المضغوط والمولد الهباء الجوي عن طريق النقر على زر وقف.
فتح وحدة التعرض والهواء النقي واستخدام ملاقط لنقل إدراج ثقافة الخلية إلى إعداد ما بعد الحضانة ستة لوحات جيدا. احتضان لوحات الآبار الستة ، فضلا عن إدراج ثقافة الخلية غير المكشوفة ، لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية و 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون في واجهة الهواء السائل. بعد 24 ساعة من التعرض، إدراج إدراج ثقافة الخلية في لوحات الآبار الستة الجديدة المعدة.
إضافة ملليلتر واحد من الحل WST1 الطازجة المعدة لإدراج كل ثقافة الخلية. صخرة لوحات بعناية من أجل توزيع الحل متجانس على الخلايا. احتضان لوحات الآبار الستة مع إدراج ثقافة الخلية لمدة ساعة واحدة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
بعد ذلك، نقل 100 ميكرولترات من المابير في ثلاثات من كل ستة صحن جيدا إلى لوحة 96 جيدا. باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة، وقياس امتصاص في 450 نانومتر مع طول موجة مرجعي من 650 نانومتر. RFS CULTEX هو نظام تعرض وحدات في المختبر مصممة خصيصا التي تمكن من التعرض المباشر ومتجانس الخلايا للجسيمات المحمولة جوا في واجهة السائل الهواء.
تعريض الخلايا للهواء النقي يؤدي إلى عدم انخفاض صلاحية الخلية مع مرور الوقت. وتم بنجاح التحقق من صحة نظام التعرض، وتم تأسيسه كنموذج للتنبؤ بأخطار الاستنشاق الحادة للمركبات المختبرة. تعرض خلايا A549 لمواد اختبار مختلفة لم تظهر أي سمية أو متوسطة أو قوية.
يرجى التأكد من أنك تحتفظ بدقة في الأطر الزمنية التي هي أوقات الحضانة، ومهلة توليد الجسيمات، وأوقات ترسب الجسيمات. وقد صُمِّمت طريقة التعرض هذه أساساً لتُعَرِّض الخلايا للجسيمات، ولكن يمكن توسيعها لتشمل تعرض الهباء الجوي والغازات السائلة عن طريق تكييف طريقة توليد الهباء الجوي. وتتيح طريقة الفرز هذه إجراء تقييم نوعي للجسيمات القابلة للاستنشاق فيما يتعلق بسمية الاستنشاق الحادة في المختبر، مما يقلل من الاختبارات على الحيوانات التي توفر عادة هذا التقييم السمي.
لا تنس أن العمل مع المواد السامة اختبار يمكن أن تكون خطرة للغاية والاحتياطات، مثل ارتداء القفازات، قناع، ينبغي دائما أن تتخذ عند التعامل مع هذه المركبات.
