يعالج بروتوكولنا الحاجة غير الملباة لطريقة قوية وقابلة للتكرار للتحليل الكمي للتغيرات المشتركة في تطور هشاشة العظام والتقدم. تحدد تقنيتنا المعلمات المحددة والقابلة للاستنساخ للتحليل الكمي للتغيرات في الأنسجة المشتركة المتعددة في هشاشة العظام. وبما أن هذه التقنية تسمح للتحليل الكمي لالتهاب المفاصل، يمكن استخدامها لمقارنة آثار علاجات محددة على أنسجة مشتركة متعددة من أجل تقييم فعاليتها العلاجية.
يمكن أيضا تطبيق بروتوكول لدينا على نماذج أخرى من هشاشة العظام أو مجالات البحوث العضلية الهيكلية التي هناك حاجة إلى تحديد كمي للغضاريف والعظام. وعلى الرغم من أن النظام بسيط وبديهي، فإن الدورات التدريبية لا تزال ضرورية لممارسة الحصول على القياسات بطريقة متكررة لتحقيق قابلية الاستنساخ. فينغاديسهبرابو كاروباغوندر، باحث ما بعد الدكتوراه من مختبرنا سوف يظهر الآن إجراءنا.
ابدأ من خلال تشغيل المجهر والكاميرا والكمبيوتر وشاشة اللمس. حدد الهدف 4X وانقر على رمز البرنامج لإطلاق البرنامج. ضع الشريحة على مرحلة المجهر ومركز العينة داخل نافذة القياس مع ضمان ضبط شبكة القياس على التكبير المناسب لتتناسب مع الهدف في أن يتم تضمين كل من السطح المفصلي التيبالي والفيدي والعظام الفرعية الطنينية داخل مناطق الصورة ذات الاهتمام.
ثم ضمن القائمة ملف، حدد قراءة الإعدادات. في إطار الإعدادات، حدد ملف الإعدادات المناسبة للمعلمات التي سيتم قياسها. لقياس منطقة الغضاريف الكلية، حدد وظيفة TC Tib وتتبع على طول الحافة العليا لسطح الغضاريف التيبالية حيث يلتقي الغضاريف الفضاء المشترك وعلى طول تقاطع chondro-osseous حيث يلتقي الغضروف المتكلس العظام تحت الأرض.
لقياس منطقة الغضاريف المتكلسة حدد وظيفة Tib CC وتتبع خط على طول علامة المد والجزر، وهو خط يحدث بشكل طبيعي يفصل المناطق المتكلسة وغير محسوبة من الغضاريف، وعلى طول تقاطع chondro-osseous حيث يلتقي الغضروف المتكلس العظام الفرعية. لتحديد منطقة الغضاريف غير المعابسة، اطرح منطقة الغضاريف المتكلسة من منطقة الغضاريف الكلية. لتحديد عدد chondrocyte، قم بإنشاء دالات عدد منفصلة ضمن الإعدادات في برنامج قياس الهستومورومي للتمييز بين المصفوفة المنتجة والمصفوفة غير المنتجة للزخرون.
ثم استخدم القلم لجعل نقطة صغيرة على كل chondrocyte التعبير عن النمط الظاهري المحدد لتحديد عدد المصفوفة المنتجة أو لا تنتج chondrocytes. لقياس إجمالي معلمة السطح المفصلي التيباحي، تتبع خط عبر سطح الغضروف التيبالي لتحديد بعناية الرجفان الفردي. ثم رسم خط ثان على طول علامة المد لتكون بمثابة عنصر تحكم داخلي لطائرة كل قسم وتقسيم معلمة سطح المفصلي التيبى بواسطة المعلمة علامة المد لحساب مؤشر الرجفان السطحي التيبى.
لقياس مساحة منطقة نخاع النخاع الفرعي، حدد وظيفة منطقة النخاع. ثم رسم خطوط حول معلمة هذه المناطق لتحديد المساحة الإجمالية لمساحة نخاع العظام داخل عظم النخاع الفرعي. لقياس إجمالي منطقة تحت السونندرال، حدد وظيفة العظام تحت السونندرالية ومخطط المنطقة بين تقاطع chondro-osseous في الحدود العليا لصفائح النمو تمتد بشكلٍ كبير إلى مناطق العظام الأمامية والخلفية.
ثم اطرح مساحة نخاع العظم في المنطقة الفرعية من منطقة الكلى الفرعي لحساب منطقة العظام في منطقة النخاع. لقياس منطقة أوستيوفيت، حدد وظيفة أوستيوفيت الأمامية وتتبع العظم الأمامي للقبيا القريب. ثم حدد osteophyte الخلفي وتتبع osteophyte الخلفي من الساق القريبة.
لقياس سمك الزليلي الفخذي الأمامي، انقر فوق عظم الفخذ الأمامي Synovium مينيسيسكوسي وارسم سطرًا واحدًا من نقطة الإدراج الداخلية للسينوفينية الأمامية على عظم الفخذ نحو نقطة المرفق على الغضروف المفصلي وخط واحد من الإدراج الخارجي للزلق على عظم الفخذ نحو مرفقه بالغضروف المفصلي. ثم تقسيم المساحة الزليلية الإجمالية على المعلمة الزليلي لحساب سمك الزليلي. DMM الناجمة عن هشاشة العظام النتائج في زيادة Osteoarthritis الجمعية الدولية للبحوث درجة مقارنة الفئران صوري.
تتميز بوضوح تآكل السطح والغضاريف المفقودة. يمكن استخدام هذا البروتوكول قياس الهيستومورمور للكشف عن العديد من العظام المرتبطة التغيرات بما في ذلك انخفاض في مجموع الغضاريف والمناطق غير محسوبة الغضروف. انخفاض في العدد الكلي للزخرون، والأهم من ذلك، خسارة في عدد المصفوفة المنتجة للشوكندريات.
كما لوحظت تغيرات في السطح المفصلي، تدل على شدة التآكل، بما في ذلك زيادة إجمالية في مؤشر الرجفان. التهاب المفاصل يشمل أيضا زيادة في منطقة العظام تحت البطن وانخفاض في منطقة نخاع العظام في الفئران DMM تشير إلى التصلب العظمي تحت المستوى. كما زادت كل من المناطق الأمامية والخلفية من العظام في فئران DMM ، مما يشير إلى إعادة عرض العظام تحت الركبة الجارية التي تعمل كآلية تعويضية للتعامل مع التغيرات في تحميل المفاصل في موقع الإصابة.
تحليل الهيستومورومية من الزلوفيوم يظهر زيادة في سمك الزليلي في الفئران DMM. نتيجة نموذجية من التهاب المفاصل المرتبطة التهاب الزليلي وانتشار السيتوكينات الالتهابية في الفضاء المشترك. بالإضافة إلى ذلك ، لا يوجد تباين كبير بين المستخدمين بين التحليل الهستومورومي لمنطقة الغضروف غير المعاين في النتيجة الدولية لجمعية أبحاث هشاشة العظام.
بعد تحليل الهدسم، يمكن استخدام الشرائح المتتالية وتلطيخ الفلور المناعية لفحص التغيرات في التعبير البروتيني بين العينات.
