خلق مطابقة في الجسم الحي / في المختبر المريض المستمدة من أزواج نموذج PDX وPDX المستمدة Organoids لأبحاث الصيدلة السرطان

يمكن استخدام هذا البروتوكول لإنشاء مكتبة متطابقة من xenografts المشتقة من المريض ، أو PDX ، وخطوط عضوية مشتقة من المريض. ميزة هذه الطريقة هي أنه يمكن استخدامها لإنشاء organoids باستخدام PDX لفحص في المختبر، مما أدى إلى أزواج متطابقة من في الجسم الحي / في نماذج المختبر. ابدأ بحصد الأورام ومعالجة الأنسجة كما هو موضح في مخطوطة النص.

بعد هضم الأنسجة، ماصة الأنسجة صعودا وهبوطا مع ماصة بلاستيكية معقمة خمسة ملليلتر. ثم أضف 20 ملليلتر من AD+ إلى المتجانس ورشحه باستخدام مصفاة خلايا 100 ميكرومتر. اغسل الخيوط مرتين مع AD+ثم قم بنقلها إلى أنبوب بلاستيكي واطردها المركزية بمعدل 450 مرة G لمدة خمس دقائق.

إعادة إنفاق الخلايا في BME والاحتفاظ بها على الجليد. لإعداد ثقافة الجهازية ، نقل 200 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى كل بئر من لوحة من ستة آبار واحتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. إضافة اثنين من ملليلتر من الوسائط العضوية إلى كل بئر وصورة الممثل يسقط تحت المجهر.

الحفاظ على الثقافات العضوية في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون مع تغييرات متوسطة كل ثلاثة إلى أربعة أيام والمرور بنسبة واحد إلى اثنين كل سبعة أيام. بعد فصل الأجهزة العضوية، قم بتشغيلها من خلال فلتر 70 ميكرومتر في أنبوب بلاستيكي 50 ملليلتر. عد organoids تحت المجهر وإعادة إنفاقها في BME على الجليد لتركيز نهائي من 5٪إضافة 50 ميكرولتر من تعليق الجهازية في كل لوحة 384 جيدا مع موزع السائل لكثافة البذر من 200 CR2110 PDXOs لكل بئر.

استخدام موزع الرقمية لإضافة SN38 إلى كل بئر في تخفيف المسلسل. إنشاء خريطة لوحة باستخدام أداة برنامج موزع الرقمية. يجب أن تتضمن العلاجات مركبة تحكم سلبية مع 100٪ من الجدوى والتحكم الإيجابي في خمسة فلوروسبورين ميكرومولار مع 0٪ من الجدوى.

عند الانتهاء، ضع لوحات 384-well المعالجة بالمخدرات مرة أخرى إلى حاضنة 37 درجة مئوية. تحت المجهر الخفيف ، PDXO CR2110 يظهر مورفولوجيا الكيسية نموذجية مما يدل على التشابه بين الأجهزة المستمدة من PDX والأعضاء المشتقة من المريض في ظل ظروف الثقافة نفسها. يكشف الفحص النسيجي بواسطة تلطيخ H &؛ E أن هياكل الأنسجة وأنواع الخلايا من PDXO CR2110 مشابهة ل PDX CR2110 الأصلي.

تظهر مقارنات الملف الشخصي الجينومي ل PDX و PDXO ارتباطا بنسبة 94.92٪ للتعبير عن النسخ وتوافقا بنسبة 97.67٪ من طفرات الحمض النووي ، مما يشير إلى تشابه جينومي شامل بين هذا الزوج من النماذج. تم إجراء فحوصات حساسية الدواء على PDXO CR2110 في لوحات 384-well. PDXO CR2110 كان حساسا لirinotecan ومقاومة ل سيسبلاتين، بما يتفق مع نتائج العلاج PDX.

يمكن للزوج المطابق من نماذج المختبر وفي الجسم الحي أن يكمل كل منهما الآخر للفحص المختبري والتحقق في الجسم الحي ، مما يحسن معدل نجاح اكتشاف الأدوية وربما يقلل من معدلات الاستنزاف في التطوير السريري.