암 약리학 연구를 위한 PDX 및 PDX 유래 오르가노이드의 생체내/생체외 환자 유래 모델 쌍 생성

이 프로토콜은 쌍환자 유래 제노이식, 또는 PDX, 및 해당 환자 유래 오르가노이드 라인의 일치하는 라이브러리를 설정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법의 장점은 생체 내 검사를 위해 PDX를 사용하여 오가노이드를 만드는 데 사용할 수 있으며 생체 내/생체 외 모델의 쌍을 일치시키는 것입니다. 종양을 수확하고 텍스트 원고에 설명된 대로 조직을 처리하는 것으로 시작합니다.

조직 소화 후, 5 밀리리터 멸균 플라스틱 파이펫으로 조직을 위아래로 피펫합니다. 그런 다음 20 밀리리터의 AD+를 균주에 넣고 100 마이크로미터 세포 여과기로 필터링합니다. AD+로 여과물을 두 번 세척한 다음 플라스틱 튜브로 옮기고 원심분리기를 5분 동안 450회 G로 옮긴다.

BME에서 세포를 다시 중단하고 얼음에 보관하십시오. 오르가노이드 배양을 준비하기 위해 셀 서스펜션 200마이크로리터를 6웰 플레이트의 각 웰에 옮기고 30분 동안 37°C에서 플레이트를 배양한다. 각 웰에 오르가노이드 미디어의 2 밀리리터를 추가하고 현미경으로 대표가 떨어뜨립니다.

3~4일마다 중간 변화가 있는 오르가노이드 배양을 섭씨 37도, 이산화탄소 5%로 유지하고 7일마다 1대2비율로 통과한다. 오르가노이드를 분리한 후 70마이크로미터 필터를 통해 50밀리리터 플라스틱 튜브로 실행합니다. 현미경으로 오르가노이드를 계산하고 얼음에 BME에서 다시 중단하여 5%의 최종 농도를 위해 200 CR2110 PDXOs의 파종 밀도를 위해 액체 디스펜서가 있는 각 384웰 플레이트에 50 마이크로리터를 추가합니다.

디지털 디스펜서를 사용하여 직렬 희석에 각각 SN38을 추가합니다. 디지털 디스펜서 소프트웨어 도구를 사용하여 플레이트 맵을 만듭니다. 처리는 0%의 생존성을 가진 5개의 micromolar Staurosporine의 100%의 생존및 긍정적인 통제를 가진 음성 통제 차량을 포함해야 합니다.

완료되면, 약물 처리 384 웰 플레이트를 다시 37섭씨 인큐베이터로 놓습니다. 가벼운 현미경 검사법하에서 PDXO CR2110은 동일한 배양 조건하에서 PDX 유래 오르가노이드와 환자 유래 오르가노이드 사이의 유사성을 보여주는 전형적인 낭포성 형태를 보여줍니다. H&E 염색에 의한 조직 병리학 검사는 PDXO CR2110의 조직 구조 및 세포 유형이 원래 PDX CR2110과 유사하다는 것을 보여줍니다.

PDX와 PDXO의 유전체 프로파일 비교는 전사 발현의 94.92%와 DNA 돌연변이의 97.67%의 일치를 나타내며, 이는 이 모델 들 사이의 전반적인 게놈 유사성을 시사한다. 약물 감도 는 384 웰 플레이트에서 PDXO CR2110에서 수행되었다. PDXO CR2110은 irinotecan에 민감하고 시스플라틴에 내성이 있으며 PDX 치료 결과와 일치했습니다.

시험관 내 및 생체 내 모델의 일치 쌍은 생체 내 시험관 내 선별 및 유효성 검사에 대해 서로를 칭찬할 수 있으며, 약물 발견의 성공률을 개선하고 임상 개발의 감소율을 잠재적으로 감소시킬 수 있습니다.