このプロトコルは、対にされた患者由来の異種移植片、またはPDX、および対応する患者由来オルガノイドラインの一致したライブラリーを確立するために使用することができる。この方法の利点は、インビトロスクリーニングにPDXを用いてオルガノイドを作成し、インビボ/インビトロモデルのペアを一致させることです。まず、腫瘍を収穫し、テキスト原稿に記載されているように組織を処理します。
組織消化後、5ミリリットルの無菌プラスチックピペットで組織を上下にピペットします。その後、20ミリリットルのAD+をホモジネートに加え、100マイクロメートルの細胞ストレーナーでフィルターします。ろ液をAD+で2回洗い、プラスチックチューブに移し、450倍Gで5分間遠心分離します。
BMEの細胞を再中断し、氷の上に保管してください。オルガノイド培養を調製するには、細胞懸濁液200マイクロリットルを6ウェルプレートの各ウェルに移し、37°Cでプレートを30分間インキュベートする。各ウェルにオルガノイド培地を2ミリリットル加え、代表的な滴を顕微鏡下で画像化します。
オルガノイド培養物は摂氏37度、二酸化炭素は5%で、3~4日ごとに培地変化、7日ごとに1対2の割合で通過します。オルガノイドを解離した後、70マイクロメートルのフィルターを通して50ミリリットルのプラスチックチューブに流します。オルガノイドを顕微鏡で数え、氷上のBMEで再懸濁して、最終的な濃度5%の最終的な濃度を384ウェルプレートに加え、液体ディスペンサーで200 CR2110 PDXOを播種します。
デジタルディスペンサーを使用して、シリアル希釈の各ウェルにSN38を追加します。デジタルディスペンサーソフトウェアツールを使用してプレートマップを作成します。治療には、100%生存率を有する陰性対照車と、0%生存率を有する5つのマイクロモルスタウロスポリンの正の対照が含まれるべきです。
終了したら、薬物処理された384ウェルプレートを摂氏37度のインキュベーターに戻します。光顕微鏡の下で、PDXO CR2110は、PDX由来オルガノイドと患者由来のオルガノイドとの類似性を同じ培養条件下で示す典型的な嚢胞形態を示す。H&E染色による病理組織学的検査では、PDXO CR2110の組織構造および細胞タイプが元のPDX CR2110と類似していることが明らかになった。
PDXとPDXOのゲノムプロファイル比較は、転写酵素発現の94.92%の相関とDNA突然変異の97.67%の相関を示し、このモデルのペア間の全体的なゲノム類似性を示唆している。384ウェルプレートでPDXO CR2110に対して薬物感受性アッセイを行った。PDXO CR2110は、イリノテカンに感受性であり、シスプラチンに対して耐性であり、PDX処理結果と一致した。
インビトロモデルとインビボモデルの一致ペアは、インビボでのインビトロスクリーニングと検証のためにお互いを補完することができ、創薬の成功率を向上させ、臨床開発における消耗率を低下させる可能性がある。
