يظهر هذا الفيديو التعريفي في المختبر للخلايا الجذعية لب الأسنان البشري نحو أنساب البنكرياس. تعطي الخلايا الجذعية علاجا بديلا في العديد من الأمراض بما في ذلك مرض السكري من النوع الأول الذي يسبب الخبث البيولوجي لخلايا بيتا. زرع الخلايا المنتجة للأنسولين سيكون الأسلوب الواعد الجديد للتسبب مدى الحياة.
في هذا الفيديو يتم وصف نهجين لتوليد الأنسولين إنتاج الخلية، بما في ذلك بروتوكول التعريفي التكاملي وغير التكاملي. وفي هذا الجزء يتم شرح بروتوكول التكامل لتحفيز الخلايا المنتجة للأنسولين من الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري. لبروتوكول التعريفي هو لخلط عملية نمو البنكرياس الطبيعية.
للحصول على الخلايا الطبيعية والوظيفية المنتجة للأنسولين. لتوليد الأنسولين إنتاج الخلايا من الخلايا الجذعية mesenchymal مثل الخلايا الجذعية لب الأسنان، ويستخدم بروتوكول التعريفي خطوة متعددة. وتستخدم الخلايا الجذعية Mesenchymal في كلمة endoderm نهائي, بطانة البنكرياس, الغدد الصماء البنكرياس ثم البنكرياس بيتا الخلية أو الأنسولين الخلايا المنتجة على التوالي.
للحث على الخلايا، يتم استخدام نهج التعريفي ثلاث خطوات كبروتوكول العمود الفقري. استخدم البروتوكول التكاملي انتهاء صلاحية عامل نسخ البنكرياس الأساسي ، PDX-1 ، بواسطة الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري. ثم سيتم حث PDX-1 على الخلايا الجذعية المعبر عنها باستخدام بروتوكول التمايز ثلاث خطوات.
ويمكن مقارنة إمكانات تمايز البنكرياس، من خلال البروتوكول التكاملي، مع البروتوكول غير التكاملي كما هو موضح في الرسوم المتحركة. تم تنفيذ هذه الفكرة بموجب البروتوكول المعتمد من قبل لجنة أخلاقيات البحوث البشرية ، كلية طب الأسنان ، جامعة شولالونغكورن بموافقة المرضى المستنيرة. بدأ هذا البروتوكول مع انتهاء صلاحية PDX-1.
وتستخدم الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية في أجزاء من 2 إلى 5، مع التقاء 70-80٪، ل transduction. يتم محاولة الخلايا والعد. ثم يجلس مليون من الخلايا على وعاء العدوى واحتضانها بين عشية وضحاها.
24 ساعة في وقت لاحق يتم إضافة الفيروسات الطازجة التي تحمل الجين PDX-1 إلى السفينة المستزرعة وفقا للتعدد المطلوب من العدوى. ثم يتم الاحتفاظ بالخلايا المصابة في الحاضنة لمدة 24 ساعة. ثم يتم تغيير وسط مثقف جديد والحفاظ عليها لفترة 48 أخرى.
يتم فحص مورفولوجيا الخلايا المصابة قبل استخدامها لمزيد من الخطوة التعريفية. ثم يتم Tryptimized الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري مع PDX-1 على انتهاء الصلاحية وتعليقها في أول وسيط التعريفي البنكرياس، ما يسمى المتوسطة A.In هذه الخطوة، يتم استخدام مرفق منخفض السفينة المستزرعة. مورفولوجيا PDX-1 على الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية أعرب في اليوم 3 بعد لوحظ التعريفي المتوسطة A.
ثم سيتم استخدام الخلايا مع مورفولوجيا جيدة لمزيد من خطوة التعريفي. الخطوة التالية، يتم إضافة وسيط التعريفي الثاني، ما يسمى المتوسط B إلى السفينة المستزرعة. مورفولوجيا PDX-1 على الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية أعرب في اليوم الثاني بعد التعريفي المتوسط لوحظ.
ثم سيتم استخدام الخلايا ذات المورفولوجيا الجيدة لمزيد من الخطوة التعريفية. الخطوة التالية، يتم إضافة وسائل الإعلام التعريفي الثالث، ما يسمى المتوسطة C إلى السفينة مثقف. 5 أيام في وقت لاحق لوحظ مورفولوجيا الخلية.
يتم جمع مستعمرات الخلايا لمزيد من التحليل. بما في ذلك مورفولوجيا المستعمرة وحجمها ، والتعبير عن علامة جين البنكرياس والممتلكات الوظيفية فيما يتعلق بإفراز الببتيد C -peptide المحفز للجلوكوز أو فحص GSCS. وبالنسبة لنهج الاستقراء غير التكاملي، يستخدم بروتوكول تعريفي من ثلاث خطوات سبق ذكره.
يتم إعادة تعليق مليون من الخلايا في المتوسط A ويجلس على وعاء ثقافة مرفق منخفض. ثم استزراع لمدة ثلاثة أيام. بعد فحص مورفولوجيا، تضاف سلسلة من المتوسط التعريفي، بما في ذلك المتوسط B و C في وقت لاحق إلى السفينة المستزرعة في اليوم الثالث والخامس، على التوالي.
في اليوم العاشر، يلاحظ مورفولوجيا الخلايا. يتم جمع مستعمرات الخلايا لمزيد من التحليل، بما في ذلك مورفولوجيا المستعمرة وحجمها، والتعبير عن علامة جين البنكرياس، والممتلكات الوظيفية فيما يتعلق بإفراز الببتيد C-peptide المحفز للجلوكوز أو فحص GSCS. تتم مقارنة نتائج كلا البروتوكولين التعريفيين في كلا البروتوكولين.
الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية قادرة على تشكيل مستعمرة مثل هيكل منذ اليوم الأول من التعريفي. مظهر المستعمرات مستدير وكثيف. جميع المستعمرات تطفو في أوعية الثقافة طوال فترة التعريفي.
مجموع عدد مستعمرة من بروتوكول التعريفي التكاملي هو أعلى قليلا من ذلك من التعريفي غير التكاملي. التطور تحت مستعمرة الحجم النسبة المئوية يظهر اتجاها مفيدا، من تشكيل مستعمرة صغيرة إلى متوسطة الحجم على التعريفي التكاملي، وهو أمر مهم للحد من جوهر نخر داخل المستعمرة. كشف تحليل علامة جين البنكرياس أن البروتوكول الاستقرائي التكاملي ينتج المستعمرات ذات انتهاء صلاحية عالية لعلامات البنكرياس ، بما في ذلك MAP-A و GLUT-2 والأنسولين وGLP-1R ، مما يشير إلى التمايز نحو الخلايا المنتجة للأنسولين المقاسة.
إلى وظيفة الجلوكوز C-الببتيد إفراز مهم. تظهر النتائج أن كلا البروتوكولين التعريفيين ينتجان المستعمرات مع استجابة جيدة لتحدي الجلوكوز. من هذه الدراسة, كل من بروتوكولات التعريفي البنكرياس قادرة على توليد الخلايا المنتجة للأنسولين في المختبر من حيث انتهاء صلاحية علامة البنكرياس والخصائص الوظيفية, البروتوكولات يظهر نوعية أفضل من الأنسولين إنتاج تشكيل الخلايا.
مما يشير إلى اتجاهات الخلايا الجذعية mesenchymal الإنسان مثل تطبيق الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية في علاج مرض السكري القائم على الخلايا الجذعية في المستقبل القريب.
