وكان تعداد وحدات تشكيل المستعمرة يحد من إمكانية استنساخ البحوث في مجال التهاب المسالك البولية. سوف تقدم التصوير الإضاءة الحيوية في البحوث في الجسم الحي UTI على فسيولوجيا المثانة، مسببات الأمراض UTI والتعرض. يتيح التصوير بالإضاءة الحيوية المتابعة الطولية من خلال رؤية في الوقت الفعلي لتطور العدوى.
وعلاوة على ذلك، فإنه يقلل بشكل كبير من عدد الحيوانات اللازمة. يسهل التصوير بالإضاءة الحيوية إجراء البحوث على العدوى المتكررة أو المزمنة ، والتي تتكرر في البشر. بالإضافة إلى ذلك، يمكن للباحثين تحديد العدوى الصاعدة أو نشرها على الدم باستخدام التصوير الإضاءة الحيوية.
الحصول على مستعمرات واحدة عن طريق streaking من مخزون الجلسرين من البكتيريا مع حلقة تلقيح على لوحات LB تكملها كبريتات الكاناميسين، وزراعة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. ملء أنبوب المعقمة 14 ملليلتر البوليسترين الجولة القاع, مع قبعات المفاجئة مزدوجة الموقف مع خمسة ملليلتر من مرق LB تكملها كبريتات كاناميسين. اختيار مستعمرة بكتيرية واحدة مع حلقة التطعيم، وإضافة هذا إلى مرق LB.
دوامة لمدة 10 ثوان لضمان الخلط السليم. ثقافة ثابتة مع سقف المفاجئة في موقف مفتوح في 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها. بعد الحضانة ، دوامة الأنبوب لمدة 10 ثوان لضمان التجانس السليم للثقافة البكتيرية.
جعل ثقافة فرعية في Erlenmeyer بإضافة 25 ميكرولتر من التعليق البكتيري إلى 25 ملليلتر من المتوسط LB الطازجة دون المضادات الحيوية. إغلاق Erlenmeyer والثقافة بشكل ثابت بين عشية وضحاها. في يوم التثبيت، صب الثقافة من Erlennmeyer في أنبوب ثقافة 50 ملليلتر، والطرد المركزي.
Decant العملاقة وإعادة إنفاق بيليه البكتيرية في 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني عقيمة. دوامة الأنبوب مرة أخرى لمدة 10 ثوان. اختر التركيز التجريبي لل inoculum وحدد OD المقابلة في 600 نانومتر باستخدام منحنى القياسية.
إضافة ملليلتر واحد من الثقافة البكتيرية التي أعيد إنفاقها إلى تسعة ملليلترات من برنامج تلفزيوني معقم وضبط حتى يتم الوصول إلى OD 600 نانومتر المطلوب. قم بتركيب طرف وعائي معقم عيار 24 على حقنة 100 ميكرولتر. ملء المحاقن مع الحل البكتيري المعدة.
ضع حيوانا واحدا على سطح عمل في وضعية السطاخ وحافظ على تخدير isoflurane مستقر باستخدام مخروط الأنف أثناء التثبيت. تطبيق مرهم العين. طرد البول المتبقية عن طريق تطبيق ضغط لطيف وإجراء حركات دائرية على المنطقة فوق العانة، ثم تنظيف أسفل البطن مع الإيثانول 70٪.
تليين طرف القسطرة مع المالحة العادية. ضع السبابة على اليد غير المهيمنة على البطن وادفعها بلطف لأعلى. بدء القسطرة من مجرى البول عموديا في زاوية 90 درجة.
بمجرد مواجهة المقاومة، قم بإمالتها أفقيا قبل إدخالها بشكل أكبر. إجراء تركيب بطيء من 50 ميكرولتر من inoculum البكتيرية. بعد التثبيت، احتفظ بالحقنة والقسطرة في مكانها لبضع ثوان ثم تراجع ببطء لمنع التسرب.
استخدم قسطرة واحدة لكل مجموعة تجريبية. ضع الحيوان في وضع ية في مخروط الأنف لإعداده للتصوير ، وإعداده للتصوير باستخدام قسطرة واحدة لكل مجموعة تجريبية. إذا لزم الأمر، إعطاء المضادات الحيوية أو الأدوية التجريبية، كما هو مذكور في المخطوطة النصية.
افتح برنامج اكتساب BLI وانقر على التهيئة في جهاز التصوير لاختبار الكاميرا ونظام تحكم المرحلة وتبريد كاميرا الجهاز المقترنة بالشحن إلى ناقص 90 درجة مئوية. انقر على الاستحواذ، AutoSave To.Select التلألؤ والصورة الفوتوغرافية. تحقق من إعدادات الإنارة الافتراضية عن طريق تعيين فلتر الإثارة إلى كتلة وفلتر الانبعاثات إلى فتح.
تعيين وقت التعرض للسيارات عند التقاط الصورة الأولى. بالنسبة لقياسات الجسم الحي والإشارات الساطعة، حدد وقت التعرض إلى حوالي 30 ثانية. قلل من وقت التعرض إذا ظهر تحذير بسبب صورة مشبعة.
حدد binning المتوسطة، F / إيقاف واحد، واختيار FOV الصحيح. تعيين ارتفاع الموضوع إلى سنتيمتر واحد عند تصوير الفئران. صورة تصل إلى خمسة أميال في وقت واحد وفصل الحيوانات باستخدام حيرة الضوء لمنع الانعكاس.
أغلق الباب وانقر على اكتساب لبدء تسلسل التصوير، ثم ملء معلومات مفصلة عن التجربة. إزالة الفئران من غرفة التصوير وإعادتها إلى قفصهم. تحقق من الشفاء التام بعد التخدير، ثم أعد الأقفاص إلى الرفوف التهوية حتى دورة التصوير التالية.
بدء تشغيل برنامج التصوير وتحميل الملف التجريبي عن طريق النقر على تصفح. استخدم لوح الأدوات لضبط مقياس لون الصورة. استخدم أدوات عائد الاستثمار لرسم منطقة اهتمام على الصورة، مع التأكد من أنها كبيرة بما يكفي لتغطية المساحة الكاملة واستخدام نفس الأبعاد لجميع الصور.
ثم انقر على قياس عائد الاستثمار لتحديد شدة الضوء. وأظهرت الصور اللاحقة للفئران التي تم الحصول عليها مباشرة بعد التثبيت أنه يمكن اكتشافها بقوة فوق 20000 وحدة تشكيل مستعمرة ، وتم إنشاء ارتباط خطي بين وحدات تشكيل المستعمرة من الإنكولوم والإضاءة الحيوية في الجسم الحي. تمت دراسة التطور الطبيعي لالتهاب المسالك البولية في مجموعة مراقبة لم تتلق أي علاج.
تم تصور تأثير العلاج بالمضادات الحيوية على حركة العدوى بالتفصيل في مجموعة من الحيوانات المعالجة بالمضادات الحيوية. وشوهد انخفاض فوري في الحمل البكتيري، كما يقاس بإجمالي تدفق الفوتون، بعد الجرعة الأولى من إنروفلوكساسين. لم يكن لأي من الحيوانات المعالجة ارتفاع لاحق في الحمل البكتيري.
تم حساب الحمل البكتيري الإجمالي لكل باستخدام المنطقة تحت منحنى السجل تحول إجمالي تدفق الفوتون ، مما يدل على اختلاف كبير بين الحيوانات المعالجة ب Enrofloxacin والحيوانات غير المعالجة على مدار 10 أيام. تقدم هذه النتائج دليلا على المفهوم الذي يمكن استخدامه لتقييم الاختلافات في الحركية عدوى التهاب المسالك البولية. التصوير الإضاءة الحيوية هو تقنية غير الباضعة التي يمكن دمجها مع أساليب أخرى مثل جمع منتظم للعينات البولية للتحليل البكتيري أو الكيميائي الحيوي أو للتجارب.
هنا أثبتنا أن التصوير الإضاءة الحيوية هو أداة قوية لتقييم استراتيجيات علاجية جديدة على مسار المرض من التهابات المسالك البولية.
