يعد أخذ عينات الدم المتكررة من المختبر الصغير جانبا مهما من جوانب تحسين الرصاص الصيدلاني. يفصل هذا البروتوكول مهارات الجراحة المجهرية لإنشاء نموذج دائم لقنية الوريد الوداجي. يمكن لهذه التقنية إنشاء نموذج فئران تقليب الوريد الوداجي بكفاءة وجمع عينات الدم بشكل متكرر من خلال القنية في الفئران الواعية مع تجنب الإجهاد والألم.
من المهم تحديد موقع الوريد الوداجي وقنواته لأن العرض المرئي للتعقيد التشريحي غير متوفر لهذا النموذج. للبدء ، قم بإعداد محطة العمل المعقمة بالكحول الطبي بنسبة 75٪ ، ثم قم بتخدير الفئران المحلوقة بالأيزوفلوران الممزوج بالأكسجين. حقن محلول ميلوكسيكام تحت الجلد بجرعة ملليغرام لكل كيلوغرام ، ثم ارفع الجلد بعناية بالقرب من الترقوة على الجانب الأيمن من خط الوسط من الرقبة باستخدام ملقط ، وباستخدام زوج من المقص الجراحي ، قم بعمل شق طوله 1.5 إلى 2 سم نحو الصدر.
لكشف الوريد الوداجي تحت الوريد ، استخدم مقص القزحية لتشريح غطاء الأنسجة الرقيقة. تتكون النهاية الرأسية القريبة من الوريد الوداجي الخارجي من فرعين يمكن تحديدهما بصريا. ارفع الوريد الوداجي مع أنسجته الغشائية الضامة لتصور الغدة الليمفاوية المرتبطة بالوريد الوداجي.
افصل الوريد بعناية على طول اتجاه الأوعية الدموية عن العضلات المحيطة والدهون والأنسجة الأخرى. دفع الملقط تحت الوريد الوداجي دون إتلاف الأوعية الدموية الجانبية وتمرير قطعتين من خياطة 6-0 تحت الوريد لتحديد طرفي الوعاء الدموي بشكل فردي. اسحب قطعة واحدة من الخيط قدر الإمكان نحو رأس الفئران وقم بربط الوريد بالجمجمة باستخدام عقدتين إلى ثلاث عقد باستخدام الملقط.
ضع الرباط الثاني على الطرف الذيلي من الوريد بعقدة واحدة فضفاضة. قم بتوصيل قسطرة من البولي يوريثين بطول 11 سم ، أو PU ، بحقنة الطرف الحاد المحضرة المملوءة بالمحلول الملحي الهيبارين ، وادفع ببطء المالحة الهيبارينية إلى القسطرة لتجنب فقاعات الهواء. ادفع الجانب المسطح غير المائل من الملقط تحت الوريد الوداجي للخروج من الجانب الآخر.
قم بعمل قطع صغير على شكل حرف V على الوريد بالقرب من ربطة الجمجمة باستخدام زوج من المقصات الدقيقة كاستروفيجو ، وافتح الشق بلطف بطرف ملقط موسع وعاء الكوع. قطع الفتحة المائلة للطرف الأمامي من قسطرة الوريد الوداجي. زرع الطرف المائل من الأنبوب مع ملقط وتحريكه في الوريد الوداجي.
أثناء تقدم القسطرة ، اسحب ببطء ملقط الجراحة المجهرية للكوع ، وقم بتثبيت السطح الخارجي للوعاء باستخدام ملقط. توقف عن إدخال القسطرة عند ضرب العلامة الزرقاء الأولى لأنبوب PU ، الذي يبلغ طوله حوالي ثلاثة سنتيمترات. قم بتثبيت القسطرة المثبتة على الوريد باستخدام كل من الأربطة الذيلية والسطحية باستخدام الملقط.
خيط خياطة 6-0 من خلال الأنسجة المكشوفة على الجانب الأيمن من الشق باستخدام إبرة خياطة ، وربط الرباط مع مرقئ. ثم ثني القسطرة عند العلامة الزرقاء الثانية للربط بنفس الرباط وتجنب انسداد أنابيب PU. بعد قص كل خيط الخياطة الإضافي ، أغلق القسطرة عن طريق استبدال المحقنة ذات الرؤوس الحادة بقابس من الفولاذ المقاوم للصدأ قياس 22.
ضع الفئران في الوضع الظهري ونظف المنطقة الواقعة بين لوح الكتف بلطف باستخدام كرة القطن المنقوعة في الكحول الطبي بنسبة 75٪. باستخدام المقص الجراحي ، قم بعمل شق صغير جدا في وسط الرقبة الظهرية. من خلال الشق الظهري ، قم بتوجيه ودفع trochar بلطف تحت الجلد نحو الشق البطني على الجانب الأيمن من الرقبة.
ضع القسطرة الوريدية في التروشار ثم اسحب القسطرة الوريدية ووجهها نحو الشق الظهري. بعد تثبيت القسطرة الخارجية في طبقة العضلات ، أغلق طبقة الجلد من الشقوق البطنية والظهرية باستخدام خياطة النايلون 6-0 وإبرة الخياطة ومسح جميع الشقوق الجراحية باليودوفور. بعد ذلك ، قم بإزالة قابس القسطرة عن طريق ربط القسطرة بأطراف الأصابع.
ضع حقنة جديدة ذات طرف حاد واسحب المحقنة ببطء لاختبار تدفق الدم. أمسك القسطرة مرة أخرى بأطراف الأصابع. حقن 0.2 ملليلتر من محلول ملحي هيبارين و 0.1 ملليلتر من محلول القفل في القسطرة باستخدام حقنة الطرف الحاد ، ثم استبدل المحقنة بقابس من الفولاذ المقاوم للصدأ.
قم بفك القسطرة وادفع القابس قليلا لضمان ضيق القسطرة. لجمع عينات الدم لإجراء اختبارات الدم ، ضع الفئران في مقيد ، وافتح القابس ، وأدخل المحقنة في قسطرة PU الوريدية لضمان عدم إعاقة القسطرة. تخلص من الدم المسحوب في البداية الذي يحتوي على خليط من الدم والمحلول الملحي الهيبارين ومحلول قفل القسطرة.
باستخدام حقنة جديدة ، قم بجمع 150 ميكرولتر من عينة الدم الطازجة ونقل عينة الدم إلى أنبوب 0.5 ملليلتر تم رشه مسبقا باستخدام K2EDTA. حقن 150 ميكرولتر من المياه المالحة العادية التي تم تسخينها مسبقا ، وغرس 0.2 ملليلتر من محلول ملحي طبيعي هيباريني معقم من خلال القسطرة. حقن 100 ميكرولتر من محلول القفل في القسطرة لضمان ختم وعقم القسطرة قبل جمع العينات التالية.
في الدراسة الحالية ، تم التحقيق في الحالات الفسيولوجية والدموية على مدى ستة أيام بعد الجراحة. تعافت غالبية الفئران في غضون أربعة إلى ستة أيام بعد الجراحة كما يتضح من زيادة وزن الجسم لأكثر من 10 غرامات ، وتناول الطعام بانتظام ، ومكونات الدم المختارة المتعلقة بالعدوى والجفاف والالتهابات ، بما في ذلك خلايا الدم البيضاء وخلايا الدم الحمراء والهيموجلوبين وعدد الصفائح الدموية. وبالتالي ، تطلبت الفئران ما لا يقل عن أربعة إلى ستة أيام للتعافي بعد الإجراء.
يشير المدخول الكبير من الماء إلى الجفاف في اليوم الأول بعد العملية. بالإضافة إلى ذلك ، تمت دراسة الحرائك الدوائية لحمض الإيلاجيك البوليفينول الطبيعي في نموذج الفئران الوداجي الوداجي ، وأشير إلى ضعف التوافر البيولوجي لحمض الإيلاجيك من خلال انخفاض تركيز البلازما على مدار 24 ساعة. يعد العزل الصحيح للوريد الوداجي أهم خطوة أولى لأن الوريد الوداجي المضمن في الأنسجة الرخوة الأخرى قد لا يكون مرئيا على الفور للباحث.
يمكن إجراء أخذ عينات الدم المتسلسلة داخل نفس الحيوان في نموذج الفئران JVC المعمول به. إنها أداة مفيدة وقوية لتقييم أداء تركيبات الأدوية في الجسم الحي.
