작은 실험실 동물로부터의 반복 혈액 샘플링은 제약 리드 최적화의 중요한 측면입니다. 이 프로토콜은 영구적 인 경정맥 cannulation 쥐 모델을 확립하기위한 미세 수술 기술을 자세히 설명합니다. 이 기술은 경정맥 통조림 쥐 모델을 효율적으로 확립하고 스트레스와 통증을 피하면서 의식이있는 쥐의 캐뉼라를 통해 혈액 샘플을 반복적으로 수집 할 수 있습니다.
이 모델에서는 해부학 적 복잡성에 대한 시각적 시연을 사용할 수 없으므로 경정맥과 그 캐뉼레이션을 찾는 것이 중요합니다. 시작하려면 75 % 의료용 알코올로 무균 워크 스테이션을 준비한 다음 면도 된 쥐를 산소와 혼합 된 이소 플루란으로 마취하십시오. 멜록시캄 용액을 킬로그램 당 2 밀리그램의 용량으로 피하 주사 한 다음 포셉으로 목 중앙선의 오른쪽에있는 쇄골 근처의 피부를 조심스럽게 들어 올리고 한 쌍의 외과 용 가위를 사용하여 가슴쪽으로 1.5 ~ 2 센티미터 길이의 절개를하십시오.
경정맥 아래를 노출시키려면 홍채 가위를 사용하여 얇은 조직 덮개를 무딘 해부하십시오. 외부 경정맥의 근위 두개골 끝은 시각적으로 식별 할 수있는 두 가지 가지로 구성됩니다. 결합 막 조직과 함께 경정맥을 들어 올려 경정맥에 부착 된 림프선을 시각화하십시오.
조심스럽게 혈관 방향을 따라 정맥을 주변 근육, 지방 및 기타 조직으로부터 분리하십시오. 부수적 인 혈관을 손상시키지 않고 경정맥 아래에 포셉을 움켜 쥐고 정맥 아래에 6-0 봉합사 두 개를 통과시켜 혈관의 두 끝을 개별적으로 표시하십시오. 봉합사의 한 조각을 가능한 한 쥐 머리 쪽으로 당기고 포셉을 사용하여 두세 개의 매듭으로 정맥을 두개골로 절개하십시오.
두 번째 합자를 하나의 느슨한 매듭으로 정맥의 꼬리 끝에 놓습니다. 11 센티미터 폴리우레탄 또는 PU, 카테터를 헤파린화 식염수로 채워진 제조된 무딘 팁 주사기에 부착하고, 기포를 피하기 위해 헤파린화 식염수를 카테터 내로 천천히 밀어 넣는다. 포셉의 팁이 아닌 평평한면을 경정맥 아래로 밀어 반대편에서 빠져 나오게하십시오.
한 쌍의 castroviejo microscissors로 두개골 넥타이 근처의 정맥에 작은 V 자형 컷을 만들고 팔꿈치 혈관 확장기 포셉의 끝으로 절개를 부드럽게 열었습니다. 경정맥 카테터의 전단의 비스듬한 개구부를 잘라냅니다. 튜브의 비스듬한 끝을 포셉으로 심고 경정맥으로 밀어 넣으십시오.
카테터를 전진시키면서 팔꿈치 미세 수술 포셉을 천천히 철회하고 포셉으로 혈관의 외부 표면을 고정시킵니다. 길이가 약 세 센티미터 인 PU 튜브의 첫 번째 파란색 마크를 칠 때 카테터 삽입을 중단하십시오. 삽입 된 카테터를 포셉을 사용하여 꼬리 및 rostral 합자로 정맥에 고정시킵니다.
봉합사 바늘을 이용하여 절개 오른쪽에 노출된 조직을 통해 6-0 봉합사를 실을 꿰고, 합자를 지혈제로 묶는다. 그런 다음 두 번째 파란색 표시에서 카테터를 구부려 동일한 합자와 결합하고 PU 튜브를 막지 않도록하십시오. 여분의 봉합사 실을 모두 저격 한 후 무딘 팁이 달린 주사기를 22 게이지 스테인레스 스틸 플러그로 교체하여 카테터를 닫으십시오.
쥐를 등쪽 위치에 놓고 75 % 의료용 알코올에 담근 면봉으로 견갑골 사이의 부위를 부드럽게 닦으십시오. 외과 용 가위를 사용하여 등쪽 목 중앙에 매우 작은 절개를하십시오. 등쪽 절개를 통해 피부 아래의 trochar 를 목의 오른쪽에있는 복부 절개쪽으로 안내하고 부드럽게 밀어 넣으십시오.
정맥 카테터를 trochar에 넣은 다음 정맥 카테터를 당겨 등쪽 절개 쪽으로 안내하십시오. 외장형 카테터를 근육층에 고정시킨 후, 6-0 나일론 봉합사와 봉합사 바늘로 복부 및 등쪽 절개의 표피층을 닫고 모든 수술 절개를 요오도포로 면봉합니다. 다음으로, 손가락 끝으로 카테터를 쥐어 카테터 플러그를 제거하십시오.
새로운 무딘 팁 주사기를 놓고 천천히 주사기를 뒤로 당겨 혈류를 테스트하십시오. 손가락 끝으로 카테터를 다시 잡으십시오. 무딘 팁 주사기를 사용하여 0.2 밀리리터의 헤파린화 식염수와 0.1 밀리리터의 잠금 용액을 카테터에 주입 한 다음 주사기를 스테인레스 스틸 플러그로 교체하십시오.
카테터의 고정을 풀고 플러그를 약간 밀어 카테터의 조임을 보장합니다. 혈액학 검사를 위해 혈액 샘플을 수집하려면 쥐를 제지기에 넣고 플러그를 연 다음 정맥 PU 카테터에 주사기를 삽입하여 카테터가 막히지 않도록하십시오. 혈액, 헤파린화 식염수 및 카테터 잠금 용액의 혼합물을 포함하는 초기에 철회 된 혈액을 버리십시오.
새로운 주사기를 사용하여 150 마이크로 리터의 신선한 혈액 샘플을 수집하고 혈액 샘플을 이전에 K2EDTA로 분무 된 0.5 밀리리터 튜브로 옮깁니다. 미리 예열 된 정상 식염수 150 마이크로 리터를 주입하고 카테터를 통해 멸균 헤파린화 된 정상 식염수 0.2 밀리리터를 주입하십시오. 100 마이크로 리터의 잠금 용액을 카테터에 주입하여 다음 샘플 수집 전에 카테터의 밀봉 및 멸균을 보장합니다.
현재의 연구에서, 수술 후 엿새 동안의 생리적 및 혈액학적 상태를 조사하였다. 대부분의 쥐는 10 그램 이상의 체중 증가, 정기적 인 음식 섭취, 백혈구, 적혈구, 헤모글로빈 및 혈소판 수를 포함한 감염, 탈수 및 염증과 관련된 선택된 혈액 성분에 의해 입증 된 바와 같이 수술 후 4 ~ 육일 이내에 회복되었습니다. 따라서, 래트는 시술 후 회복을 위해 최소 사육일이 필요했다.
물을 많이 섭취하면 수술 후 첫날에 탈수가 나타났습니다. 또한, 천연 폴리페놀 엘라그산의 약동학은 확립된 경정맥 캐뉼레이션 래트 모델에서 연구되었고, 엘라그산의 열악한 생체이용률은 24시간에 걸쳐 낮은 혈장 농도로 나타났다. 경정맥의 올바른 분리는 다른 연조직 내에 매립된 경정맥이 연구자에게 즉시 보이지 않을 수 있기 때문에 가장 중요한 첫 번째 단계이다.
동일한 동물 내의 순차적 혈액 샘플링은 확립된 JVC 래트 모델에서 수행될 수 있다. 생체 내에서 약물 제형 성능을 평가하는 데 유용하고 강력한 도구입니다.
