Повторный забор крови у мелкого лабораторного животного является важным аспектом оптимизации фармацевтического свинца. Этот протокол детализирует микрохирургические навыки для создания постоянной модели яремной вены канюляции крысы. Этот метод может эффективно установить модель крысы с канюляцией яремной вены и многократно собирать образцы крови через канюлю у сознательных крыс, избегая при этом стресса и боли.
Важно найти яремную вену и ее канюляцию, так как визуальная демонстрация анатомической сложности недоступна для этой модели. Для начала подготовьте асептическую рабочую станцию 75% медицинским спиртом, затем обезбольте бритую крысу изофлураном, смешанным с кислородом. Подкожно вводят раствор мелоксикама в дозе два миллиграмма на килограмм, затем аккуратно поднимают кожу возле ключицы с правой стороны средней линии шеи щипцами, и с помощью хирургических ножниц делают разрез длиной от 1,5 до 2 сантиметров в сторону груди.
Для обнажения нижней яремной вены используйте ножницы радужной оболочки, чтобы притупить рассечение тонкой тканевой оболочки. Проксимальный цефальный конец наружной яремной вены состоит из двух ветвей, которые могут быть визуально идентифицированы. Поднимите яремную вену вместе с ее соединительной мембранной тканью, чтобы визуализировать лимфатическую железу, прикрепленную к яремной вене.
Тщательно отделите вену вдоль сосудистого направления от окружающих мышц, жира и других тканей. Подтолкните щипцы под яремную вену, не повреждая коллатеральные кровеносные сосуды, и проведите два куска шва по 6-0 под вену, чтобы пометить два конца кровеносного сосуда по отдельности. Потяните один кусок шва как можно дальше к голове крысы и с помощью щипцов с помощью щипцов обложите вену кранизно двумя-тремя узлами.
Поместите вторую лигатуру на каудальный конец вены одним рыхлым узлом. Прикрепите 11-сантиметровый полиуретановый, или ПОЛИУ, катетер к подготовленному шприцу с тупым наконечником, заполненному гепаринизированным физиологическим раствором, и медленно протолкните гепаринизированный физиологический раствор в катетер, чтобы избежать пузырьков воздуха. Подтолкните плоскую сторону щипцов под яремную вену, чтобы выйти с другой стороны.
Сделайте небольшой V-образный разрез на вене возле черепного галстука парой микросубчиков кастровьехо, и аккуратно вскройте разрез кончиком локтевого сосуда расширительными щипцами. Вырежьте косое отверстие переднего конца катетера яремной вены. Обсадите косой конец трубки щипцами и сдвиньте его в яремную вену.
Во время продвижения катетера медленно вынимайте локтевые микрохирургические щипцы, и зажимайте наружную поверхность сосуда щипцами. Прекратите вставлять катетер при попадании в первую синюю метку пуновой трубки, которая составляет примерно три сантиметра в длину. Закрепите вставленный катетер на вене с помощью каудальных и ростральных лигатур с помощью щипцов.
Проденьте шов 6-0 через открытую ткань с правой стороны разреза с помощью шовной иглы и свяжите лигатуру гемостатом. Затем согните катетер на второй синей отметке, чтобы связаться с той же лигатурой и избежать закупорки pu трубки. После перерезания всей дополнительной шовной нити закройте катетер, заменив тупой наконечник шприца на заглушку из нержавеющей стали 22 калибра.
Поместите крысу в спинное положение и аккуратно очистите область между лопатками ватным тампоном, пропитанным 75% медицинским спиртом. Используя хирургические ножницы, сделайте очень маленький разрез в центре спинной шейки. Через спинной разрез направьте и осторожно протолкните трохар под кожей к вентральному разрезу на правой стороне шеи.
Поместите венозный катетер в трохар, а затем вытащите и направьте венозный катетер к дорсальному разрезу. После закрепления экстериорализованного катетера в мышечном слое закройте кожный слой вентрального и дорсального разрезов 6-0 нейлоновым швом и шовной иглой и смажьте все хирургические разрезы йодофором. Затем удалите пробку катетера, обхватив катетер кончиками пальцев.
Поместите новый шприц с тупым наконечником и медленно отведите шприц назад, чтобы проверить кровоток. Снова удерживайте катетер кончиками пальцев. Введите 0,2 миллилитра гепаринизированного физиологического раствора и 0,1 миллилитра стопорного раствора в катетер с помощью шприца с тупым наконечником, а затем замените шприц заглушкой из нержавеющей стали.
Отстегните катетер и слегка вставьте пробку, чтобы обеспечить герметичность катетера. Чтобы собрать образцы крови для гематологических тестов, поместите крысу в ограничитель, откройте пробку и вставьте шприц в венозный катетер PU, чтобы убедиться, что катетер не заблокирован. Отбросьте первоначально изъятую кровь, содержащую смесь крови, гепаринизированного физиологического раствора и раствора для блокировки катетера.
Используя новый шприц, соберите 150 микролитров свежего образца крови и перенесите образец крови в 0,5-миллилитровую пробирку, предварительно распыленную K2EDTA. Вводят 150 микролитров предварительно подогретого нормального физиологического раствора и вводят 0,2 миллилитра стерильного гепаринизированного нормального физиологического раствора через катетер. Введите 100 микролитров стопорного раствора в катетер, чтобы обеспечить герметизацию и стерильность катетера перед следующим сбором пробы.
В текущем исследовании были исследованы физиологические и гематологические состояния в течение шести дней после операции. Большинство крыс выздоровели в течение четырех-шести дней после операции, о чем свидетельствует увеличение массы тела более чем на 10 граммов, регулярное потребление пищи, отдельные компоненты крови, связанные с инфекцией, обезвоживанием и воспалением, включая лейкоциты, эритроциты, гемоглобин и количество тромбоцитов. Таким образом, крысам требовалось минимум четыре-шесть дней для восстановления после процедуры.
Большое потребление воды указывало на обезвоживание в первый день после операции. Кроме того, фармакокинетика природной полифенольной эллаговой кислоты была изучена в установленной модели крысы канюляции яремной вены, а на плохую биодоступность эллаговой кислоты указывала ее низкая концентрация в плазме в течение 24 часов. Правильная изоляция яремной вены является наиболее важным первым шагом, потому что яремная вена, встроенная в другие мягкие ткани, может быть не сразу видна исследователю.
Последовательный забор крови у одного и того же животного может быть выполнен в установленной модели крыс jVC. Это полезный и надежный инструмент для оценки эффективности лекарственных препаратов in vivo.
